鄭俠　袁根良　楊曉惠　殷光玲

[摘要]研究番茄紅素茶多酚組合物對(duì)小鼠輻射危害的輔助保護(hù)作用。方法：按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）“對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)功能試驗(yàn)”的相關(guān)規(guī)定，選用昆明種雄性小鼠，設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組，分別為樣品人體推薦劑量5倍、10倍、30倍，另設(shè)輻射模型對(duì)照組。結(jié)果：外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性，小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，血清溶血素含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。結(jié)論：根據(jù)判定原則，認(rèn)為樣品番茄紅素茶多酚組合物對(duì)小鼠的輻射危害有輔助保護(hù)功能。

[關(guān)鍵詞]番茄紅素；茶多酚；小鼠；輻射

中圖分類(lèi)號(hào)：TS201.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20180406

輻射損傷是由電離輻射引起的急性、慢性或遲發(fā)性的機(jī)體損傷…。隨著電子產(chǎn)品的迅速普及，人們?nèi)粘Ｉ钪薪佑|輻射的機(jī)會(huì)越來(lái)越多，遭受輻射損傷的可能性也隨之增加。目前有多種輻射防護(hù)藥物，但大多存在毒副作用大，防護(hù)效價(jià)低等缺點(diǎn)[2-5]。因而尋找安全、有效的抗輻射損傷食品原料日漸緊迫。已有研究表明番茄紅素和茶多酚都具有一定的抗輻射作用，本實(shí)驗(yàn)將兩者按一定比例混合使用，以考察番茄紅素茶多酚組合物的抗輻射作用。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1藥品及試劑

番茄紅素（樂(lè)康瑞德食品添加劑（常州）有限公司，20120331）、茶多酚（安徽紅星藥業(yè)有限責(zé)任公司，20140217-2）、預(yù)膠化淀粉（戴緯林國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司，130401A）、二氧化硅（廣州榮啟貿(mào)易有限公司，130701）。

1.2儀器

電子天平BS223S（北京賽多利斯公司，50961567）、電子秤ACS--3A型（上海太和衡器廠(chǎng)，10400365）、臺(tái)式離心機(jī)Mikr022（HETrlCH公司，105）、血液分析儀XT-2000i（希森美康，66541）。輻照裝置：¹³⁷Csγ輻射源，Gaminacell-40（加拿大Nurdion公司），放射源出廠(chǎng)活度為1.27×10¹⁴Bq，現(xiàn)吸收劑量率為0.75Gy/min。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雄性，18～22g，120只，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2013-0006。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滬）2013-0008。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1番茄紅素茶多酚組合物的制備

取番茄紅素380g、茶多酚112g、預(yù)膠化淀粉400g、二氧化硅8g混合均勻得900g番茄紅素茶多酚組合物。小鼠灌胃前用蒸餾水按比例稀釋至所需濃度。

2.2分組與給藥

取昆明種小鼠120只，逐只稱(chēng)重，按體重分層隨機(jī)分為12組，每組10只。以每四組為一個(gè)實(shí)驗(yàn)組，隨機(jī)分為1個(gè)輻射模型對(duì)照組和3個(gè)受試樣品劑量組。連續(xù)灌胃30d，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，輻射模型對(duì)照組灌胃給予溶劑（蒸餾水）。30d灌胃結(jié)束后進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、血清溶血素實(shí)驗(yàn)。

本品成人（體重按60kg計(jì)算）每天推薦量900mg，折合劑量為15mg/kg。將番茄紅素茶多酚組合物設(shè)計(jì)為75mg/kg、150mg/kg.450mg/kg三個(gè)劑量組，分別相當(dāng)于人體推薦用量的5倍、10倍、30倍。

2.3測(cè)定指標(biāo)

（1）白細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物連續(xù)給樣30d后，取樣品三個(gè)劑量組及輻射模型對(duì)照組動(dòng)物均以同一劑量γ射線(xiàn)¹³⁷Csγ全身照射一次，照射劑量為3Gy。分別于照射前、照射后第3d、照射后第14d三次采末梢血，進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

（2）小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物連續(xù)給樣30d后，取樣品三個(gè)劑量組及輻射模型對(duì)照組動(dòng)物均以同一劑量γ射線(xiàn)¹³⁷Csγ全身照射一次，照射劑量為3Gy，另取一組動(dòng)物作為環(huán)磷酰胺致突變物對(duì)照組。各劑量組及輻射模型對(duì)照組于照射后（繼續(xù)給予樣品）第3d，頸椎脫臼處死小鼠，剝離出胸骨或股骨，用止血鉗擠出骨髓液，加滅活的小牛血清，常規(guī)制片，Giemsa染色，鏡檢，每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞中的微核細(xì)胞數(shù)，以千分率表示。結(jié)果如表2所示。

（3）血清溶血素實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物連續(xù)給樣30d后，取樣品三劑量組及輻射模型對(duì)照組動(dòng)物均以同一劑量γ射線(xiàn)¹³⁷Csγ全身照射一次，照射劑量為3Gy。于照射后（繼續(xù)給予樣品）第6d用2%（v/v）sRBC免疫動(dòng)物，5d后眼眶采血，頸椎脫臼處死，分離血清。在微量血凝板上加25μL血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋?zhuān)偌尤氲攘?.5%（v/v）sRBC懸液，混勻后，裝入濕潤(rùn)的平盤(pán)內(nèi)加蓋，37℃放置3h，當(dāng)血球?qū)φ粘霈F(xiàn)沉落時(shí)觀(guān)察結(jié)果。結(jié)果如表3所示。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1白細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如表1所示，照射前各劑量組與輻射模型對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性（P>0.05）；照射后第3d，輻射模型對(duì)照組和各劑量組的白細(xì)胞數(shù)分別與照射前進(jìn)行自身比較，均明顯下降，且差異均有顯著性（P<0.01），可判定輻射損傷模型成立；動(dòng)物照射后第14d白細(xì)胞明顯回升，但各劑量組的白細(xì)胞數(shù)與輻射模型對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

4.2鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如表2所示，樣品各劑量組與輻射模型對(duì)照組相比，高劑量（450mg/kg）組的骨髓細(xì)胞微核率明顯下降，有顯著性差異（P<0.05）。

4.3血清溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如表3所示，樣品各劑量組與輻射模型對(duì)照組相比，高劑量（450mg/kg）組的血清溶血素明顯增加，有顯著性差異（P<0.05）。

5結(jié)論

番茄紅素（1vcopene）是一種黃/紅色類(lèi)胡蘿卜素，廣泛存在于自然界中。1875年MiHardet從番茄中萃取出含有番茄紅素的粗提物，稱(chēng)之為Solanorbin。1903年Schunck通過(guò)對(duì)番茄紅素吸收光譜的研究，發(fā)現(xiàn)其不同于從胡蘿卜中提取的胡蘿卜素，于是將這種色素命名為lycopene，從而確立了番茄紅素的名稱(chēng)。其分子式為C40H56，是由11個(gè)共軛雙鍵以及2個(gè)非共軛的碳一碳雙鍵構(gòu)成的高度不飽和直鏈型烴類(lèi)化合物。研究發(fā)現(xiàn)，番茄紅素具有抗氧化、抗輻射、延緩衰老、抑制腫瘤、減少心血管疾病、提高人體免疫力等作用。

劉勇等選用健康志愿者進(jìn)行番茄紅素軟復(fù)合膠囊抗氧化人體試驗(yàn)研究，采用雙盲隨機(jī)分組、組問(wèn)和自身兩種對(duì)照設(shè)計(jì)，表明人體食用番茄紅素具有抗氧化功效。李輝等采用動(dòng)物試驗(yàn)方法研究表明小鼠灌胃給予番茄紅素具有顯著抗氧化功效。彭曉莉等采用動(dòng)物試驗(yàn)方法研究表明番茄紅素具有一定的抗輻射保護(hù)作用。綜上，番茄紅素具有一定的抗氧化防輻射功能。

茶多酚是以?xún)翰杷仡?lèi)為主體，由多種酚類(lèi)物質(zhì)組成的羥基酚類(lèi)化合物。大量研究表明，茶多酚具有抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、防癌、抗輻射、抑菌、抗病毒、解毒、降血糖和血脂、抗衰老等方面的保健和藥理作用。

李繼媛等采用動(dòng)物試驗(yàn)方法，連續(xù)90d，每天對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠注射低、中、高劑量組的茶多酚樣品。測(cè)定小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，測(cè)定結(jié)果顯示，不同劑量茶多酚對(duì)小鼠血清SOD、MDA水平有影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明茶多酚可提高小鼠血液抗氧化能力，以血清SOD活性增強(qiáng)為主要表現(xiàn)。劉明哲等通過(guò)茶多酚（TP）對(duì)青、老年NIH小鼠血清中MDA、紅細(xì)胞SOD和過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的作用，研究了它對(duì)機(jī)體自由基的清除功效，并以人體淋巴細(xì)胞DNA單鏈斷裂為指標(biāo)研究了TP對(duì)輻射誘發(fā)的DNA損傷的保護(hù)作用。結(jié)果顯示茶多酚具有清除體內(nèi)自由基抗氧化和抗輻射的作用。

計(jì)融等為評(píng)價(jià)茶多酚對(duì)小鼠的抗輻射作用，將60只小鼠作為抗輻射Ⅰ組，動(dòng)態(tài)觀(guān)察白細(xì)胞數(shù)。另60只小鼠為抗輻射Ⅱ組，進(jìn)行存活試驗(yàn)。結(jié)果顯示茶多酚能顯著提高輻照小鼠存活率。郭紹來(lái)等采用⁶⁰Csγ射線(xiàn)照射小鼠造成亞急性損傷模型，給予不同劑量TP及表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）后1d、3d、7d、14d、21d、28d檢測(cè)對(duì)小鼠外周血指標(biāo)和臟器系數(shù)的影響。同時(shí)檢測(cè)血清中SOD和MDA水平，結(jié)果表明含50%EGCG的茶多酚（TP50）具有明顯緩解輻射所造成的造血功能損傷和抗氧化作用。

本實(shí)驗(yàn)以番茄紅素和茶多酚混合物為主要原料，現(xiàn)代藥理研究及實(shí)踐結(jié)果表明，番茄紅素和茶多酚均具有抗氧化和抗輻射作用。本研究結(jié)果表明番茄紅素和茶多酚混合物具有較好的抗輻射作用。