王彬彬

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤外科，安徽 蚌埠 233000)

長期的臨床隨訪研究發(fā)現(xiàn)，食管癌的發(fā)病率近年來持續(xù)呈現(xiàn)出了較高的水平，其發(fā)病率可達(dá)233/10萬～455/10萬人左右。食管癌的臨床預(yù)后較差，容易早期發(fā)生淋巴結(jié)及血行轉(zhuǎn)移，病死率相對較高[1-2 ]。在探討食管癌的發(fā)病機制的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)因子的改變，或者信號傳遞分子的改變等，能夠影響細(xì)胞增殖速度、抑制癌細(xì)胞凋亡的比例，干預(yù)腫瘤細(xì)胞信號傳遞的速度等，促進(jìn)食管癌病情進(jìn)展。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化因子3(signal transducer and activator of factor 3，STAT3)是腫瘤細(xì)胞間信號傳遞的重要介質(zhì)，其對于癌細(xì)胞間細(xì)胞連接的激活，能夠促進(jìn)腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)錄激活因子對于臨近正常細(xì)胞的整合作用，促進(jìn)食管上皮細(xì)胞的異常增殖風(fēng)險[3-4 ]；p16蛋白是細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶，其對于細(xì)胞周期激酶K的激活作用，能夠改變細(xì)胞周期比例，影響到癌細(xì)胞的G1/S期比例，增加食管癌的發(fā)生風(fēng)險[5-6 ]。為了進(jìn)一步揭示STAT3、p16蛋白對食管癌發(fā)生、發(fā)展的作用，本次研究選取本院病理科收集的94例食管癌術(shù)后組織標(biāo)本，比較兩種蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院病理科收集的94例食管癌術(shù)后組織標(biāo)本和40例癌旁組織標(biāo)本(對照組)。食管癌組，男57例，女37例，年齡42～79歲，平均(58.0±11.0)歲，病理學(xué)類型：鱗癌75例，腺癌19例，組織學(xué)分化：高分化28例，中分化33例，低分化33例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例，TNM分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期25例，Ⅲ期46例，腫瘤病灶部位：上段12例，中段45例，下段37例。對照組，男24例，女16例，年齡44～70歲，平均(56.3±10.7)歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) (1)食管癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；(2)癌組織標(biāo)本、癌旁組織標(biāo)本均來源于手術(shù)切除標(biāo)本；(3)手術(shù)前患者無放化療史、免疫治療史；(4)患者的資料完整。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) (1)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的食管癌患者；(2)凝血功能疾??；(3)伴有其他部位惡性腫瘤。

1.3 免疫組化染色

石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5 min，加入STAT3蛋白、p16蛋白抗體(鼠來源，ABCUM公司)，37 ℃ 孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(購自ABCUM公司)，37 ℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判斷

STAT3、p16蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，根據(jù)著色強度和陽性細(xì)胞比例判斷，著色強度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；兩種積分相乘總分<3分為陰性，≥3分為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計軟件采用SPSS16.0，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗；P值≤0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 食管癌和癌旁組織中STAT3、p16蛋白陽性表達(dá)率比較

食管癌組織中STAT3、p16蛋白陽性表達(dá)率分別為63.83%、41.49%，癌旁組織中STAT3、p16蛋白陽性表達(dá)率分別為30.00%、97.50%，兩組比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；具體見表1，圖1,2。

2.2 食管癌組織中STAT3、p16蛋白陽性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

食管癌組織中的STAT3蛋白在TNM分期Ⅲ期、組織學(xué)低分化患者中呈顯著的高表達(dá)(P<0.05)；食管癌組織中p16蛋白在TNM分期Ⅲ期、組織學(xué)低分化、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中呈顯著的低表達(dá)(P<0.05)；具體見表2。

表1 食管癌和癌旁組織中STAT3、p16蛋白陽性表達(dá)率比較[n(%)]

癌旁組織 食管癌組織

圖1 STAT3蛋白免疫組化染色結(jié)果(400倍)

癌旁組織 食管癌組織

表2 食管癌組織中STAT3、p16蛋白陽性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

3 討 論

食管癌的發(fā)生機制較為復(fù)雜，多種因素均可以促進(jìn)食管癌的發(fā)生發(fā)展，特別是近年來由于食管癌的臨床預(yù)后普遍較差，5年生存率或者無瘤生存期等主要臨床預(yù)后指標(biāo)不佳，使得臨床上對于食管癌基礎(chǔ)領(lǐng)域的相關(guān)研究變得尤為重要。對于食管癌發(fā)病過程中分子生物學(xué)因子的研究，具有下列幾個方面的現(xiàn)實意義：(1)能夠為食管癌的發(fā)病機制提供參考，并為后續(xù)臨床研究提供治療靶點；(2)能夠在食管癌術(shù)后免疫組化檢測相關(guān)分子蛋白水平表達(dá)的基礎(chǔ)上，評估食管癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后。

STAT3作為信號傳導(dǎo)相關(guān)因子，其對于癌細(xì)胞的增殖特性的影響不僅在于促進(jìn)了癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動子的激活，而且促進(jìn)了下游轉(zhuǎn)錄及蛋白翻譯的活性，同時能夠影響局部腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境，維持腫瘤干細(xì)胞增殖活性，提高腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)風(fēng)險。STAT3在誘導(dǎo)趨化因子或者炎癥因子的富集方面同樣具有一定的效應(yīng)，其對于下游炎癥因子的激活作用能夠在誘導(dǎo)癌細(xì)胞核DNA的氧化應(yīng)激損傷方面發(fā)揮作用，提高癌細(xì)胞的異常核分離象的出現(xiàn)[7-8]；p16作為抑癌基因，其表達(dá)濃度的改變是影響細(xì)胞周期激酶活性的主要因子[9-10]，多數(shù)研究已經(jīng)證實了p16蛋白表達(dá)對于消化系統(tǒng)惡性腫瘤、生殖系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生的保護(hù)作用，認(rèn)為p16蛋白的表達(dá)缺失是促進(jìn)癌細(xì)胞失去進(jìn)化保守特征的主要因素。

本次研究通過免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，STAT3、p16在食管癌中均存在明顯的蛋白水平的表達(dá)異常，其中STAT3蛋白呈現(xiàn)出了明顯的高表達(dá)，而p16蛋白的表達(dá)缺失現(xiàn)象較為明顯，提示二者均可能作為病因或者繼發(fā)性的分子生物學(xué)的改變，從而參與到了食管癌的病情進(jìn)展過程中。二者的異常表達(dá)，可能通過影響細(xì)胞周期調(diào)控或者癌細(xì)胞特征的變化，導(dǎo)致疾病的發(fā)生、發(fā)展[11-12]：(1)STAT3蛋白干預(yù)到了食管癌細(xì)胞對于食管癌基底膜組織的浸潤，促進(jìn)了癌細(xì)胞對于食管肌層的突破風(fēng)險；(2)p16蛋白的表達(dá)缺失影響到了細(xì)胞周期激酶、ATP激酶或者磷酸激酶的活性，癌細(xì)胞的變性特征、快速跨越G0期或者增殖失調(diào)控等特征，均影響到了食管癌的病情進(jìn)展。趙醒等[10]分析了46例中晚期食管癌患者的臨床預(yù)后發(fā)現(xiàn)p16的表達(dá)濃度可平均下降25%以上，特別是在癌細(xì)胞分化程度較低、細(xì)胞核異型性較差的患者中，p16蛋白的表達(dá)缺失更為明顯。在TNM分期Ⅲ期、組織學(xué)低分化的食管癌患者中，STAT3蛋白的表達(dá)陽性率較高，STAT3蛋白對于臨床分期或者組織學(xué)分型的影響，考慮可能與下列因素有關(guān)：(1)STAT3蛋白增加了癌細(xì)胞排列極性的紊亂，導(dǎo)致組織學(xué)分型的惡化；(2)STAT3蛋白對于臨床分期進(jìn)展的影響，主要考慮在食管癌發(fā)病后期對于癌細(xì)胞體積或者病灶擴散速度的影響有關(guān)。而在TNM分期Ⅲ期、組織學(xué)低分化、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，p16蛋白的表達(dá)陽性率更低，這主要考慮可能與P16蛋白對于周期素、周期素激酶CDK1等的激活作用有關(guān)，因此誘導(dǎo)了癌細(xì)胞對于淋巴管或者食管上皮的累及。但本次研究中并未發(fā)現(xiàn)STAT3蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，這主要考慮STAT3蛋白對于淋巴結(jié)內(nèi)皮粘附分子的上調(diào)作用不足有關(guān)。

本次研究的創(chuàng)新性在于揭示了STAT3蛋白與食管癌患者臨床病理特征的關(guān)系。綜上所述，食管癌組織中STAT3蛋白高表達(dá)、p16蛋白低表達(dá)，并且與食管癌的病理學(xué)特征具有一定的相關(guān)性。本次研究的局限性在于未能揭示相關(guān)指標(biāo)在臨床預(yù)后評估中的價值。