陳 俊 ，張世茂 ，許惠鳳 ，葉錦霞 ，陳振沅 ，吳廣文

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建省祥興電子科技有限公司，福建 寧德 352300；3.福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350122）

頸椎病是因頸椎間盤(pán)組織退行性變及其繼發(fā)性椎間關(guān)節(jié)退行性變所致脊髓、神經(jīng)、血管損害而表現(xiàn)的相應(yīng)癥狀和體征［1］。研究發(fā)現(xiàn)頸椎骨質(zhì)疏松［2-3］和退變的頸椎間盤(pán)組織釋放的炎性因子［4-7］，在頸椎病的病理進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)建立頸椎病大鼠模型，觀察頸椎病治療儀對(duì)頸椎骨組織中鈣（Ca）、磷（P）和血清中白介素 1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子 α（TNF-α）含量的影響，探討頸椎病治療儀防治頸椎病的機(jī)制，為頸椎病治療儀臨床療效的科學(xué)內(nèi)涵提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2月齡雄性SD大鼠48只，購(gòu)買(mǎi)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，合格證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鈣測(cè)試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）比色法、磷測(cè)試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）比色法（磷鉬酸法，南京建成生物公司）；IL-1β 檢測(cè)試劑盒、IL-6檢測(cè)試劑盒、TNF-α檢測(cè)試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）。

1.3 主要儀器 頸椎病治療儀（型號(hào)：XX-QX004，福建省祥興電子科技有限公司）；低頻電子脈沖治療儀（型號(hào)：G6805-2A，上海華誼醫(yī)用儀器有限公司）；連續(xù)波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀（型號(hào)：M200，奧地利TECAN公司）；半自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)：BA-88A，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組與模型制備 48只大鼠喂養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組12只和造模組36只?？瞻捉M：切開(kāi)皮膚及皮下組織后，直接縫合。造模組：根據(jù)參考文獻(xiàn)［8］，建立動(dòng)靜力結(jié)合頸椎病動(dòng)物模型。參考前期研究結(jié)果［9］，造模3個(gè)月后按隨機(jī)數(shù)字表將造模組分為模型組、頸椎病治療儀組（治療組）和低頻電子脈沖治療儀組（對(duì)照組）各12只。模型組和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，因麻醉意外，各脫落1只。

2.2 干預(yù)方法 空白組和模型組：每天捆綁于木板上30 min，不作任何處理；治療組：每天捆綁于木板上，頸椎病治療儀刺激雙側(cè)C5、C6夾脊穴，定位依據(jù)華興邦等人撰寫(xiě)的《大鼠穴位圖譜的研制》［10］，1次 ／d，30 min／次；對(duì)照組：每天捆綁于木板上，低頻電子脈沖治療儀刺激雙側(cè) C5、C6夾脊穴，1次／d，30 min／次，定位方法同治療組。

2.3 標(biāo)本采集與處理 治療4周后，采用10%水合氯醛腹腔麻醉，常規(guī)腹主動(dòng)脈采血，3 000 rpm離心15 min，取上層血清，-80℃保存?zhèn)溆谩２裳?，切取各組大鼠C5、C6椎體，按照每0.1 g椎體加2 mL生理鹽水進(jìn)行稀釋，勻漿后，3 000 rpm離心15 min，取上清液，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 指標(biāo)測(cè)定

2.4.1 血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 含量測(cè)定 取出-80℃保存?zhèn)溆玫难?，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟，測(cè)各組大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量。

2.4.2 骨組織中Ca、P活性測(cè)定 取出-80℃保存?zhèn)溆玫墓墙M織勻漿上清液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟，測(cè)各組大鼠中Ca、P含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的以（x±s）表示，2組比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)之間比較采用單因素方差分析；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。

3 結(jié) 果

3.1 4組大鼠頸椎組織中Ca、P含量比較 見(jiàn)圖1。

圖1 4組大鼠頸椎組織中Ca、P含量比較

3.2 4 組大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 含量比較 見(jiàn)圖2～圖4。

圖2 4組大鼠血清中IL-1β含量比較

圖3 4組大鼠血清中IL-6含量比較

4 討論

圖4 4組大鼠血清中TNF-α含量比較

頸椎病發(fā)展過(guò)程中，軟骨終板不斷鈣化與骨化，骨組織取代軟骨組織，中央部位骨性終板增厚導(dǎo)致椎間盤(pán)營(yíng)養(yǎng)障礙而發(fā)生退變［11］。 后期研究［12］發(fā)現(xiàn)：在頸椎間盤(pán)突出到頸椎管狹窄癥的過(guò)程中，椎體骨質(zhì)疏松所造成的椎體寬大變形、椎管繼發(fā)性狹窄對(duì)病情發(fā)展起不可忽視的作用。叢銳等學(xué)者［13］通過(guò)拍攝頸椎X線正側(cè)位片，發(fā)現(xiàn)在頸椎病病理進(jìn)程中頸5、頸6最早發(fā)生變形，而后逐漸擴(kuò)大至其它椎體，得出椎體骨質(zhì)疏松與頸椎病病程具有相關(guān)性的結(jié)論。Ca、P是骨礦物質(zhì)中最基本的元素，在骨代謝過(guò)程中具有重要作用，骨質(zhì)疏松發(fā)生時(shí)存在Ca、P的丟失。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠頸5、頸6骨組織中 Ca、P含量明顯低于空白組（p＜0.01），說(shuō)明退變大鼠頸椎骨組織中存在Ca、P丟失現(xiàn)象。

IL-1β、IL-6、TNF-α 等炎癥促進(jìn)劑， 可促進(jìn)炎癥細(xì)胞聚集，激活炎癥遞質(zhì)釋放。丁文元等學(xué)者［14］比較突出的頸椎間盤(pán)與正常的頸椎間盤(pán)組織，發(fā)現(xiàn)在突出的頸椎間盤(pán)組織中 IL-1β、IL-6、TNF-α 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)增多，認(rèn)為退變椎間盤(pán)細(xì)胞產(chǎn)生各種炎性因子，是椎間盤(pán)退變的主要原因，Le Maitre等也證實(shí)了此觀點(diǎn)［15］。 趙凱等［16］研究發(fā)現(xiàn)：與假手術(shù)對(duì)照組比較，模型組頸椎間盤(pán)組織中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明顯升高（p＜0.01）。此外，基因芯片技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：退變的人頸椎間盤(pán)組織中IL-1β、IL-1α、IL-6和IL-8等炎癥因子基因表達(dá)明顯增加［17］，頸椎病患者椎間盤(pán)組織中IL-1、IL-6、TNF-α表達(dá)水平與椎間盤(pán)退變程度呈正相關(guān)［18］。本研究發(fā)現(xiàn)模型組血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 含量均高于空白組（p＜0.01），提示 IL-1β、IL-6、TNF-α 在頸椎退變過(guò)程中，可能發(fā)揮重要作用。

本研究使用的頸椎病治療儀屬物理治療儀范疇，主要由主控制器（疏密波發(fā)生裝置）、電極（導(dǎo)線及電極片）和電池組成，采用低頻動(dòng)態(tài)變頻疏密波，通過(guò)皮膚電極對(duì)頸椎病相關(guān)穴位進(jìn)行電刺激，可促進(jìn)血液循環(huán)、止痛消炎、增強(qiáng)肌力、疏通經(jīng)絡(luò)氣血，達(dá)到治療頸椎病的目的。本研究結(jié)果顯示：頸椎病治療儀治療后，頸椎骨組織中Ca、P含量較模型組均有明顯升高（p＜0.05），表明頸椎病治療儀能夠增加骨Ca和骨P含量，有效預(yù)防頸椎骨質(zhì)疏松的發(fā)生；治療組IL-1β、IL-6、TNF-α含量較模型組均有所降低（p＜0.05），表明頸椎病治療儀能有效抑制IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)。對(duì)比治療組與對(duì)照組中 Ca、P、IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量差異，發(fā)現(xiàn)2組比較無(wú)顯著性差異，提示頸椎病治療儀在治療頸椎病療效上與低頻電子脈沖治療儀無(wú)明顯差異，但頸椎病治療儀攜帶、使用方便，有利于隨時(shí)隨地使用，值得臨床進(jìn)一步推廣。