白會新 ，王靚靚 ，翟寶庫，陳立偉，董玉龍

（1.大慶市畜牧技術(shù)推廣站，黑龍江 大慶 163311；2.大慶市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江 大慶 163311；3.大慶市動物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江 大慶 163311）

隨著抗生素類藥物逐漸被限制在飼料中使用，開發(fā)可替代抗生素類的飼料添加劑已成為飼料領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和追求方向。非營養(yǎng)性資源的開發(fā)，已經(jīng)打破了飼料資源短缺窘境，腐殖酸類物質(zhì)是動植物殘骸經(jīng)微生物分解形成的有機(jī)物，廣泛存在于煤炭、湖泊、土壤等自然環(huán)境中[1]，大量研究已經(jīng)表明其具有抗菌、解毒、消炎的作用，并且能促進(jìn)動物生長，提高飼料利用效率，增強(qiáng)免疫力，調(diào)節(jié)畜禽生產(chǎn)環(huán)境，提高經(jīng)濟(jì)效益[2]。前期試驗已證實(shí)黃腐酸作為天然有機(jī)酸腐殖酸的主要成分，能夠有效地提高生長育肥豬的生產(chǎn)性能、胴體性狀、免疫能力和抗氧化能力[3-5]，作為一種有效的綠色環(huán)保功能型飼料資源被應(yīng)用于動物飼料領(lǐng)域。本試驗依據(jù)前期試驗確定的0.6%的黃腐酸合理添加劑量，對育肥豬飼喂高劑量（6%黃腐酸）日糧來觀測對育肥豬的生產(chǎn)性能、血液指標(biāo)及組織病理學(xué)影響，以確定黃腐酸對育肥豬的安全用量范圍和承受能力，為黃腐酸在育肥豬應(yīng)用推廣中提供一定的實(shí)際理論依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.2 試驗設(shè)計和分組

本試驗采用單因素完全隨機(jī)試驗設(shè)計，選取平均體重為60±2.5 kg的外三元育肥豬30頭，隨機(jī)分為3個組，每個組10頭。第1組為玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧（對照組），第2組和第3組分別為基礎(chǔ)飼糧+0.6%黃腐酸和基礎(chǔ)飼糧+ 6%黃腐酸。試驗豬體重達(dá)到90～100 kg時，試驗結(jié)束。

1.3 試驗日糧

試驗日糧參照NY/T 33-2004和NRC（1998）配制，日糧組成及營養(yǎng)含量見表1。

1.4 飼養(yǎng)管理

按照豬場常規(guī)管理進(jìn)行。當(dāng)體重達(dá)到90 kg以上出欄體重時，每組各屠宰4頭。

1.5 試驗測定指標(biāo)與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能

試驗期內(nèi)每天觀察試驗動物臨床表現(xiàn)、采食和飲水情況、生長情況；詳細(xì)觀察和記錄不良反應(yīng)。試驗結(jié)束每組稱重，計算平均日增重，并統(tǒng)計計算平均采食量、飼料轉(zhuǎn)化率。

1.5.2 血液學(xué)指標(biāo)檢測

試驗結(jié)束，各組隨機(jī)屠宰3頭，采血，抗凝管中存放。

血液常規(guī)指標(biāo)：白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計數(shù)（P LT）等。采血，自然析出血漿，在3 000 r/min離心機(jī)中離心10 min，上清液分裝于1.5 mL eppendof管中，置-30 ℃冰箱保存待用。

各類用戶在該操作系統(tǒng)的使用權(quán)限各不相同，具體分為以下幾種權(quán)限：（1）教師的權(quán)限為輸入、查詢與輸出自己的個人信息；（2）評價部門管理者的權(quán)限為審核教師上傳到由本部門考核欄目的相關(guān)信息，以及在全校范圍內(nèi)結(jié)合部門考核對教師的綜合考核結(jié)果進(jìn)行排序等；（3）超級用戶（校長或經(jīng)學(xué)校授權(quán)者）具有增減考核欄目（板塊）、評價要素的權(quán)限，修改各板塊評價要素權(quán)重的權(quán)限，以及對全校教師進(jìn)行綜合評價和某一單項評價的權(quán)限。本調(diào)查研究團(tuán)隊成員邱健筠為“教師專業(yè)發(fā)展評價系統(tǒng)”架構(gòu)的操作系統(tǒng)如圖3所示[4]。

基本生化指標(biāo)：谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、總蛋白（TPRO）、白蛋白（ALB）、尿素氮（SUN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBILI）等指標(biāo)。采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，在全自動生化分析儀上測定。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)含量

表2 黃腐酸對生長育肥豬生產(chǎn)性能的影響

表3 育肥豬出欄血常規(guī)指標(biāo)

表4 生長育肥豬出欄血液生化指標(biāo)

1.5.3 組織病理學(xué)檢查

試驗結(jié)束，各組稱重后，屠宰的豬只觀測高劑量組及尸檢異常動物的主要器官進(jìn)行稱重，計算臟器比，同時進(jìn)行系統(tǒng)的組織病理學(xué)檢查，詳細(xì)檢查的器官和組織包括：心、肝、腎等組織制作切片。采用常規(guī)石蠟切片，HE染色，組織切片制作。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析， 用Duncan’s進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 生產(chǎn)性能

由表2可知，各組豬只的平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著差異（P＞0.05）。黃腐酸組較對照組有較大的促生長作用，0.6%黃腐酸組與對照組相比平均日增重提高48 g。各組豬只臨床表現(xiàn)正常。

2.2 血常規(guī)指標(biāo)

由表3可知，黃腐酸組血液中各個指標(biāo)都有增加趨勢。6%黃腐酸組的血液白細(xì)胞數(shù)量顯著高于對照組（P＜0.05）。

2.3 血液生化指標(biāo)

由表4可知，黃腐酸對豬各項血液生化指標(biāo)無顯著影響（P＞0.05）。屠宰前，日糧中6%黃腐酸組與照組相比，ALT、GOT、ALP、GRE、ALB有 升高趨勢；SUN、TBIL、TP有降低趨勢；GLU無明顯變化。

2.4 臟器比重

表5 黃腐酸對育肥豬臟器官比重的影響

從表5中可知，6%黃腐酸組各臟器官與對照組相比，差異不顯著（P＞0.05）。各器官重量沒有發(fā)生較明顯變化。

2.5 組織病理切片

2.5.1 心臟

組織樣品采樣時可發(fā)現(xiàn)各組豬心肌色澤正常，無壞死灶。組織病理切片（圖1-圖3）可見心肌纖維清晰，排列緊密，規(guī)則，無結(jié)締組織增生，無炎性細(xì)胞浸潤，心肌纖維短柱狀，互相連接成網(wǎng)狀，各組之間的形態(tài)學(xué)比較無差異（HE染色，100×）。

圖1 對照組心肌切片，100×

圖2 0.6%黃腐酸組心肌切片，100×

圖3 6%黃腐酸組心肌切片，100×

2.5.2 肝臟

采集樣品時可見肝臟表面光滑，無出血和滲出。由圖4-圖6（HE染色，100×）可知：對照組肝細(xì)胞排列整齊，未見異常；0.6%黃腐酸組可見肝細(xì)胞排列整齊，未見異常；6%黃腐酸組肝細(xì)胞板排列整齊，肝竇輕度淤血，小葉間膽管擴(kuò)張，小葉間靜脈擴(kuò)張，局部組織可見灶狀淋巴細(xì)胞分布。

圖4 對照組肝臟切片，100×

圖5 0.6%黃腐酸組肝臟切片，100×

圖6 6%黃腐酸組肝臟切片，100×

2.5.5 腎臟

采集樣品時各組腎臟外觀未見異。由圖7-圖9可知，對照組腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，腎小球、腎小管排列及形態(tài)未見異常，腎間質(zhì)輕度淤血；0.6%黃腐酸組腎小球，腎小管排列及形態(tài)未見異常；6%黃腐酸組腎小管上皮細(xì)胞部分脫離基底膜，部分細(xì)胞輕度萎縮，腎間質(zhì)較好。

圖7 對照組腎臟切片，100×

圖8 0.6%黃腐酸組腎臟切片，200×

圖9 6%黃腐酸組腎臟切片，200×

3 小結(jié)

3.1 生產(chǎn)性能

黃腐酸組豬生長速度表現(xiàn)優(yōu)于對照組，飼料轉(zhuǎn)化率有所提高。0.6%黃腐酸組生產(chǎn)性能較對照組表現(xiàn)出較大的增加趨勢，增重速度加快，采食量上升，這與之前試驗結(jié)果一致。6%黃腐酸組肥育減慢，略優(yōu)于對照組。黃腐酸組豬生產(chǎn)性能均高于對照組但并未達(dá)到顯著性水平（P＞0.05）。

3.2 血常規(guī)指標(biāo)和血液生化指標(biāo)

黃腐酸組肌酐高于對照組，但差異不顯著，這可能與腎臟功能某些變化有關(guān)，然而屠宰后各器官指數(shù)并未發(fā)生明顯變化的趨勢。各組其他指標(biāo)也無顯著差異（P＞0.05）。

3.3 組織病理切片結(jié)果

黃腐酸組豬的心臟、肝臟均未見病變發(fā)生，6%黃腐酸組豬的肝臟出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤，0.6%黃腐酸組并未引起這些變化。雖然6%黃腐酸組對育肥豬的臟器產(chǎn)生輕微變化，但并未影響其正常生長，可以承受該劑量的添加耐受。

4 結(jié)論

1）日糧中添加高劑量6%黃腐酸對育肥豬的生產(chǎn)性能有所提高但并未產(chǎn)生顯著影響；

2）日糧中添加高劑量6%黃腐酸未對生長育肥豬的血常規(guī)和血液生化指標(biāo)造成不利影響；

3）日糧中添加高劑量6%黃腐酸可能導(dǎo)致生長育肥豬腎臟發(fā)生輕微病變，但并不影響豬只正常生長；

4）育肥豬對黃腐酸的耐受劑量可達(dá)到6%。