齊悅 朱濤 覃志成

[摘要]目的 觀察核因子κB受體活化因子配體（RANKL）對(duì)血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘導(dǎo)的人腎足細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）的影響，探究AngⅡ是否通過(guò)RANK/RANKL信號(hào)通路影響足細(xì)胞表達(dá)VEGF。方法 以分化為樹(shù)枝狀的人腎足細(xì)胞為研究對(duì)象，以不同濃度（0、1、10、100 nmol/L）的AngⅡ處理，分別于不同時(shí)間（0、6、12、24 h）通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)基因VEGF、RANK和RANKL的mRNA表達(dá)變化。然后以不同劑量的RANKL與100 nmol/L AngⅡ共同刺激足細(xì)胞24 h后，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)VEGF的mRNA表達(dá)變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞凋亡率變化。結(jié)果 AngⅡ呈劑量和時(shí)間依賴性地誘導(dǎo)足細(xì)胞表達(dá)VEGF、RANK和RANKL（P<0.05），而過(guò)量RANKL表現(xiàn)出劑量依賴性地阻斷VEGF表達(dá)增高 （P<0.05）；與對(duì)照組比較，AngⅡ可以顯著誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡（P<0.05），而RANKL可以抑制由AngⅡ誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡（P<0.05）。結(jié)論 AngⅡ可能通過(guò)RANK/RANKL信號(hào)通路影響足細(xì)胞表達(dá)VEGF，RANKL通過(guò)反饋調(diào)節(jié)下調(diào)VEGF基因表達(dá)來(lái)抑制AngⅡ引起的足細(xì)胞凋亡，保護(hù)腎臟。

[關(guān)鍵詞]足細(xì)胞；血管緊張素Ⅱ；核因子κB受體活化因子配體；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子

[中圖分類號(hào)] R692.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）5（b）-0013-05

Effect of receptor activator of nuclear factor-κB ligand on the secretion of vascular endothelial cell growth factor from human glomerular podocytes induced by angiotensinⅡ

QI Yue1 ZHU Tao2 QIN Zhi-cheng3

The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of receptor activator of nuclear factor-κB ligand （RANKL） on the secretion of vascular endothelial growth factor （VEGF） induced by angiotensin Ⅱ （AngⅡ） in human renal podocytes，and to explore whether AngⅡaffecting VEGF expression in podocytes through RANK/RANKL signaling pathway.Methods The human renal podocytes differentiated into dendrites were selected as research subjects.They were dealt with AngⅡin different concentrations （0，1，10，100 nmol/L）.Real-time fluorescence quantitative PCR was performed at different time （0，6，12，24 h） to detect the changes in mRNA expression of the genes VEGF，RANK，and RANKL.Then podocytes were stimulated with different doses of RANKL and 100 nmol/LM AngⅡ for 24 h.The expression of VEGF mRNA was detected by RT-PCR and the apoptosis rate of podocytes was detected by flow cytometry.Results AngⅡ induced podocyte expression of VEGF，RANK，and RANKL in a dose-and time-dependent manner （P<0.05），while excess RANKL showed dose-dependent blockade of VEGF expression increasing （P<0.05）.Compared with the control group，AngⅡ significantly induced podocyte apoptosis （P<0.05），while RANKL inhibited podocyte apoptosis induced by AngⅡ （P<0.05）.Conclusion AngⅡ may affect podocyte expression of VEGF through RANK/RANKL signaling pathway.RANKL inhibits the apoptosis of the podocytes induced by AngⅡ by regulating the expression of VEGF gene through feedback regulation and protects the kidneys.

[Key words]Podocyte；Angiotensin Ⅱ；Receptor activator of nuclear factor-κB ligand；Vascular endothelial growth factor

足細(xì)胞（腎小球臟層上皮細(xì)胞，podocyte）作為腎小球的濾過(guò)屏障的重要組成部分，在多種因素的刺激下可導(dǎo)致其損傷，從而引起蛋白尿的發(fā)生和腎小球的硬化[1]。血管緊張素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，AngⅡ），作為腎臟局部腎系血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）的主要效應(yīng)因子， 在間充質(zhì)干細(xì)胞、小鼠和人足細(xì)胞等多種細(xì)胞中能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)上調(diào)，p-38、Akt、ERK可能發(fā)揮著重要作用[2-5]。但AngⅡ與VEGF在人足細(xì)胞中的作用機(jī)制仍有許多不明之處還需進(jìn)一步研究。

Liu等[6]的研究發(fā)現(xiàn)一條和炎癥相關(guān)的新信號(hào)通路介導(dǎo)足細(xì)胞損傷，即腫瘤壞死因子家族的核因子κB受體活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）信號(hào)，RNAK的配體（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）可以阻抑凋亡，保護(hù)足細(xì)胞。前期實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)AngⅡ可以通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路誘導(dǎo)足細(xì)胞表達(dá)VEGF[7]，推測(cè)在人腎小球足細(xì)胞中是否也存在類似AngⅡ-RANK/RANKL-VEGF的通路，調(diào)節(jié)足細(xì)胞的功能，故本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)足細(xì)胞表達(dá)VEGF的變化及其與RANK/RANKL信號(hào)通路的關(guān)系進(jìn)行研究，以進(jìn)一步明確AngⅡ誘導(dǎo)足細(xì)胞表達(dá)VEGF的作用機(jī)制及其對(duì)足細(xì)胞的保護(hù)作用，為將來(lái)藥物干預(yù)提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

RPMI-1640培養(yǎng)基（美國(guó)GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）；1% ITS（胰島素10 μg/ml、轉(zhuǎn)鐵蛋白5.5 μg/ml、亞硒酸鈉5 ng/ml，美國(guó)Sigma公司）；青霉素（華北制藥）；AngⅡ （美國(guó)Sigma公司）；RANKL（美國(guó)R&D; Systems公司）； Trizol液（美國(guó)Promega公司）；引物 （上海生工公司）；RNA 提取試劑盒 （美國(guó)Omega公司）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Prie Script TMRT-PCR kit，寶生物工程有限公司）；SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒（寶生物工程有限公司）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（瑞士Roche公司）。

1.2 足細(xì)胞培養(yǎng)

人腎小球足細(xì)胞由英國(guó)Bristol大學(xué)Saleem教授贈(zèng)送，按參考文獻(xiàn)[8]的方法培養(yǎng)。足細(xì)胞復(fù)蘇后在含1% ITS的RPMI-1640培養(yǎng)液（10%胎牛血清）中，于33℃ 、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用含0.05%胰蛋白酶的消化液消化傳代，然后轉(zhuǎn)入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱分化14 d。選取在37℃條件下分化為樹(shù)枝狀的人腎足細(xì)胞為研究對(duì)象。

1.3實(shí)驗(yàn)分組

AngⅡ濃度梯度對(duì)人腎小球足細(xì)胞表達(dá)基因VEGF、RANK和RANKL的影響：細(xì)胞各組中分別加入AngⅡ，其終濃度分別為0、1、10、100 nmol/L，培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。AngⅡ時(shí)間梯度對(duì)人足細(xì)胞VEGF、RANK和RANKL基因表達(dá)的影響：用100 nmol/L AngⅡ影響VEGF基因表達(dá)的最佳濃度干預(yù)細(xì)胞，分別培養(yǎng)0、6、12、24 h。RANKL對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)人腎小球足細(xì)胞表達(dá)VEGF的影響：用AngⅡ（100 nmol/L）加入不同劑量的RANKL（0、20、40、80 ng/ml）干預(yù)足細(xì)胞24 h，同時(shí)設(shè)置正常組（不加AngⅡ和RANKL）。

1.4 RNA提取和半定量RT-PCR

用Trizol法提取總RNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCT法進(jìn)行相對(duì)定量。嚴(yán)格按照RT-PCR相關(guān)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，用SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒在Roche 480儀器上進(jìn)行PCR檢測(cè)。PCR反應(yīng)條件為：95℃ 30 s，95℃ 10 s，60 ℃ 20 s（35 cycles）。各基因引物序列見(jiàn)表1。

1.5 AngⅡ和 RANKL干預(yù)對(duì)足細(xì)胞凋亡率的影響

實(shí)驗(yàn)分三組：分別以100 nmol/L 的AngⅡ單獨(dú)刺激足細(xì)胞，100 nmol/L的AngⅡ和80 ng/ml的 RANKL共同處理足細(xì)胞24 h，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組。胰酶消化收集細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞2次，使用凋亡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行FITC和PI雙染15 min，30 min內(nèi)通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析（one-way AVONA）和Turkey檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同劑量AngⅡ?qū)θ四I足細(xì)胞VEGF、RANK和RANKL mRNA表達(dá)水平的影響

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，以不同濃度AngⅡ刺激腎足細(xì)胞24 h后，VEGF、RANK和RANKL mRNA表達(dá)均呈劑量依賴性升高。如圖1所示，與空白組比較，較大劑量組（10、100 nmol/L AngⅡ）的VEGF、RANK和RANKL mRNA表達(dá)量明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 AngⅡ刺激不同時(shí)間對(duì)人腎足細(xì)胞VEGF、RANK和RANKL mRNA表達(dá)水平的影響

在AngⅡ（100 nmol/L）刺激腎足細(xì)胞0、6、12、24 h后，VEGF、RANK和RANKL mRNA表達(dá)均呈時(shí)間依賴性升高。與對(duì)照組（0 h）比較， VEGF、RANK和RANKL mRNA表達(dá)量均隨干預(yù)時(shí)間增加而呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)（P<0.05）（圖2）。

2.3 RANKL對(duì)經(jīng)AngⅡ誘導(dǎo)的足細(xì)胞表達(dá)VEGF的影響

與空白組比較，經(jīng)AngⅡ 100 nmol/L刺激，不添加RANKL的對(duì)照組的VEGF mRNA表達(dá)增加（P<0.01）。經(jīng)RANKL干預(yù)的足細(xì)胞，VEGF mRNA的表達(dá)受到抑制，且呈現(xiàn)劑量依賴性抑制。小劑量組（20 ng/ml）與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但隨著RANKL劑量的增大，VEGF mRNA表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05）（圖3），提示在AngⅡ誘導(dǎo)的足細(xì)胞中，RANKL影響mRNA的表達(dá)，與VEGF mRNA的表達(dá)成負(fù)相關(guān)。

2.4 AngⅡ和 RANKL干預(yù)對(duì)足細(xì)胞凋亡率的影響

收集細(xì)胞，使用BD Accuri C6流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡率檢測(cè)，并進(jìn)行方差分析。與空白組（0.4±0.1）%比較，對(duì)照組（AngⅡ 100 nmol/L）的凋亡率為（28.34±2.2）%，說(shuō)明AngⅡ可以明顯誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡。AngⅡ+RANKL組的細(xì)胞凋亡率為（11.14±1.06）%，與AngⅡ比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（圖4），提示RANKL可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡。

3 討論

蛋白尿是幾乎所有腎小球疾病的共同臨床表現(xiàn)之一，它不僅是腎小球?yàn)V過(guò)屏障受損的標(biāo)志，而且它與腎小球疾病的進(jìn)展密切相關(guān)，是腎小球疾病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。足細(xì)胞是附著在腎小球基底膜（GBM）外側(cè)高度分化的細(xì)胞[9]，作為腎小球固有細(xì)胞之一，連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞一起，構(gòu)成腎小球血液濾過(guò)屏障[10]。作為血液濾過(guò)的最后屏障，足細(xì)胞已經(jīng)成為針對(duì)蛋白尿研究的關(guān)鍵細(xì)胞。目前大量研究認(rèn)為，足細(xì)胞損傷是腎小球損傷的中心環(huán)節(jié)，可以直接導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生及腎小球的硬化。因此，研究足細(xì)胞從而揭示蛋白尿發(fā)生的機(jī)制具有重要意義。

VEGF是一種二聚體糖蛋白，是內(nèi)皮特異性的有絲分裂原，在腎臟主要表達(dá)于足細(xì)胞的足突，有增加血管通透性、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增生和血管形成作用。而VEGF受體則以跨膜蛋白的形式表達(dá)于腎小球內(nèi)皮細(xì)胞表面，足細(xì)胞可以通過(guò)旁表達(dá)的方式調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能，是內(nèi)皮細(xì)胞重要的調(diào)控因子[11]。腎小球足細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞是構(gòu)成濾過(guò)膜的重要成分，VEGF能減少GBM陰離子數(shù)而影響電荷屏障，并通過(guò)影響腎小球內(nèi)皮細(xì)胞而調(diào)節(jié)機(jī)械屏障，因而VEGF被認(rèn)為是調(diào)節(jié)腎小球通透性的重要因子，在腎病進(jìn)展中扮演著重要的角色[12]。大量證據(jù)表明，VEGF與蛋白尿的形成密切相關(guān)[13]，VEGF的異常表達(dá)增加可導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)膜通透性增加，促進(jìn)蛋白尿的形成。

腎臟局部的RAS在慢性腎臟病變的發(fā)生發(fā)展中的重要作用越來(lái)越受到人們的關(guān)注，RAS的主要效應(yīng)因子AngⅡ 與許多腎臟疾病的發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)[14-15]。研究表明，AngⅡ可以誘導(dǎo)腎臟內(nèi)生性VEGF的產(chǎn)生[5]。此外，Ren等[16]的研究發(fā)現(xiàn)，AngⅡ以劑量依賴方式誘導(dǎo)培養(yǎng)的足細(xì)胞以及動(dòng)物模型足細(xì)胞凋亡。本研究也發(fā)現(xiàn)，AngⅡ可以誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡，但是過(guò)量的RANKL會(huì)抑制AngⅡ誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡。足細(xì)胞作為血液濾過(guò)的最后屏障，其凋亡必然會(huì)增加腎小球?yàn)V過(guò)膜的通透性，引起蛋白尿的形成。因此，維持VEGF正常水平和足細(xì)胞的數(shù)量，可以保護(hù)腎小球，避免蛋白尿的發(fā)生。

RANK及其RANKL是腫瘤壞死因子（TNF）及其受體超家族的成員。以往對(duì)RANK和RANKL的研究主要集中在骨質(zhì)疏松及骨腫瘤性疾病中。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為RANK/RANKL/OPG通路是成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞之間進(jìn)行對(duì)話的重要信號(hào)通路， RANKL結(jié)合RANK后通過(guò)調(diào)控NF-κB和MAPK通路促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化與活化引起骨質(zhì)的破壞[17]。近年有研究表明，RANK和RANKL參與慢性腎臟疾病的發(fā)生與發(fā)展。Liu等[6，18]在腎小球硬化性腎病、IgA腎病、膜性腎病等患者腎臟中發(fā)現(xiàn)RANK和RANKL的高表達(dá)，且RANK特異性表達(dá)于足細(xì)胞。Chen等[19]體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，RANK和RANKL介導(dǎo)NF-κB通路和MAPK通路活化，促進(jìn)足細(xì)胞損傷，加快腎臟疾病的發(fā)生與發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)，AngⅡ以時(shí)間和劑量依賴性的上調(diào)VEGF基因的表達(dá)，這與Pupilli等[20]的研究結(jié)果類似。此外，AngⅡ還能引起RANK和RANKL基因水平的表達(dá)上調(diào)。當(dāng)足細(xì)胞中加入過(guò)量外源性的RANKL時(shí)，VEGF的基因水平表達(dá)下調(diào)，最終引起足細(xì)胞凋亡率減少。上述兩方面實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，RANKL與VEGF存在直接的相互關(guān)系，處于同一個(gè)通路AngⅡ-RANK/RANKL-VEGF中。當(dāng)AngⅡ含量升高，刺激足細(xì)胞表達(dá)過(guò)多的VEGF，能導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生。而AngⅡ還能引起RANK/RANKL的表達(dá)升高。但當(dāng)RANKL達(dá)到一定濃度后，能下調(diào)VEGF的表達(dá)水平，形成反饋調(diào)節(jié)。因此，AngⅡ和RANK/RANKL兩者通過(guò)一定的平衡狀態(tài)共同調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，維持腎臟的正常功能。本文的研究提示AngⅡ和RANK/RANKL兩者共同維持VEGF表達(dá)水平，避免足細(xì)胞凋亡，為將來(lái)藥物干預(yù)治療尿蛋白提供了研究基礎(chǔ)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Menon MC，Chuang PY，He CJ.The glomerular filtration barrier： components and crosstalk[J].Int J Nephrol，2012，2012：749010.

[2]QP Li，RZ Shi，JCh Wang，et al.Angiotensin II induces vascular endothelial growth factor synthesis in mesenchymal stem cells[J].Exp Cell Res，2009，312（1）：10-15.

[3]Kang YS，Park YG，Kim BK，et al.Angiotensin II stimilates the synthesis of vascular endithelial growth factor through the p38 mitogen activated protein kinase pathway in cultured mouse podocytes[J].Mol Endocrinol，2006，36（2）：377-388.

[4]卞帥博，劉佳.氟伐他汀及氯沙坦對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)人足細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 31（8）：1123-1127.

[5]Lee EY，Shim MS，Kim MJ，et al.Angiotensin Ⅱ receptor blocker attenuates overexpression of vascular endothelial growth factor in diabetic podocytes[J].Exp Mol Med，2004， 36（1）：65-70.

[6]Liu S，Shi W，Xiao H，et al.Receptor activator of NF-kappaB and podocytes：towards a function of a novel receptor-ligand pair in the survival response of podocyte injury[J].PloS One，2012，7（7）：e41331.

[7]齊悅.血管緊張素Ⅱ刺激人足細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路的研究[D].太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2008.

[8]邵珊，白波，李榮山，等.全反式維甲酸對(duì)高糖培養(yǎng)的人腎小球足細(xì)胞synaptopodin蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥，2012，7（5）：601-602.

[9]陳瑜，劉超.足細(xì)胞損傷與糖尿病腎病[J].中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志，2007，27（23）：1876-1879.

[10]陳星華，丁國(guó)華.腎臟局部血管緊張素Ⅱ與足細(xì)胞病變關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2013，16（17）：2053-2056.

[11]Zhan Y，Yang L，Wen Y，et al.Yi qi qing re gao attenuates podocyte injury and inhibits vascular endothelial growth factor overexpression in puromycin aminonucleoside rat model.Evidence-based complementary and alternative medicine[J].Evid-Based Compl Alt，2014，2014（3）：375986.

[12]Veron D，Reidy K，Marlier A，et al.Induction of podocyte VEGF164 overexpression at different stages of development causes congenital nephrosis or steroid-resistant nephrotic syndrome[J].Am J Pathol，2010，177（5）：2225-2233.

[13]張麗萍，譚會(huì)斌，邢玲玲，等.IgA腎病足細(xì)胞損傷中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2010，20（14）：2162-2165.

[14]Sonneveld R，van der Vlag J，Baltissen MP，et al.Glucose specifically regulates TRPC6 expression in the podocyte in an Ang Ⅱ-dependent manner[J].Am J Pathol，2014，184（6）：1715-1726.

[15]Nijenhuis T，Sloan AJ，Hoenderop JG，et al.Angiotensin Ⅱ contributes to podocyte injury by increasing TRPC6 expression via an NFAT-mediated positive feedback signaling pathway[J].Am J Pathol，2011，179（4）：1719-1732.

[16]Ren Z，Liang W，Chen C，et al.Angiotensin Ⅱ induces nephrin dephosphorylation and podocyte injury：role of caveolin-1[J].Cell Signal，2012，24（2）：443-450.

[17]Tanaka S.Signaling axis in osteoclast biology and therapeutic targeting in RANK/RANKL/OPG system[J].Am J Nephrol，2007，27（5）：466-478.

[18]馮仲林，劉雙信，史偉，等.嘌呤霉素氨基核苷腎病腎臟中RANK-RANKL的表達(dá)[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014， 34（1）：65-69.

[19]Chen XW，Liu WT，Wang YW，et al.Cyclopropanyldehydrocostunolide LJ attenuates high glucose-induced podocyte injury by suppressing RANKL/RANK-mediated NF-κB and MAPK signaling pathways[J].J Diabetes Complications，2016，30（5）：760-769.

[20]Pupilli C，Lasagni L，Romagnani P，et al.AngiotensinⅡ stimulates the synthesis and secretion of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in human mesangial cells[J].J Am Soc Nephrol，1999，10（2）：245-255.

（收稿日期：2018-03-06 本文編輯：許俊琴）