劉 凱， 陳 婷， 閆 超， 王若崢

(1中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤免疫與放療研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 烏魯木齊 830011； 2新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院放療中心， 烏魯木齊 830011 )

食管癌作為發(fā)病率及死亡率較高的惡性腫瘤之一已越來越被人們重視[1-2]，據(jù)最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示[3]，2014年我國惡性腫瘤新發(fā)病總數(shù)為380.4萬例，惡性腫瘤死亡總數(shù)為229.6萬例，其中食管癌年新發(fā)病數(shù)為25.8萬例(排第6位)，而年食管癌死亡人數(shù)為19.3萬例(排第4位)。我國食管癌的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)均約占全球的50%左右，占發(fā)展中國家的60%[4-5]。西方國家食管癌中食管腺癌占大多數(shù)，我國食管癌主要類型與西方國家不同，以食管鱗狀細(xì)胞癌為主，大概約占食管癌90%以上。隨著研究進(jìn)展，腫瘤免疫治療取得新的成果，2013年Science雜志將腫瘤免疫治療評(píng)為年度十大科技進(jìn)展之首。免疫療法具有高特異性，靶向腫瘤細(xì)胞而不損傷正常細(xì)胞，可應(yīng)用于晚期癌癥患者和不適合手術(shù)的患者。腫瘤特異性抗原(tumor specific antigen, TSA)被發(fā)現(xiàn)，其中癌-睪丸抗原(cancer-testis antigen，CTA)被認(rèn)為最具有前景的腫瘤相關(guān)抗原之一。紐約食管鱗狀上皮癌抗原1(New York esophageal squamous cell carcinoma antigen 1，NY-ESO-1)[6-9]、滑膜肉瘤X斷裂點(diǎn)基因2(synovial sarcoma X break point gene 2，SSX-2)[10]和黑色素瘤抗原A3[11](and melanoma-associated antigen A3，MAGE-A3)是CTA亞家族之一，它們在正常組織中僅在睪丸、胚胎組織中表達(dá)，但是卻在許多腫瘤組織細(xì)胞中具有表達(dá)的特點(diǎn)。

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT)可以從單細(xì)胞水平檢測出分泌特異性抗體的細(xì)胞以及可以分泌特異性細(xì)胞因子的細(xì)胞，其穩(wěn)定性、敏感性和特異性較高是其主要特點(diǎn)。目前，在病毒研究、腫瘤防治、疫苗研制、藥品生產(chǎn)、自身免疫疾病診治、結(jié)核病高危人群篩查和各種免疫性疾病診斷中該項(xiàng)技術(shù)得以普遍運(yùn)用[12]。目前關(guān)于食管鱗癌中TSA免疫反應(yīng)研究較少，本研究采用ELISPOT方法，使用人工合成的NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3抗原多肽，檢測食管鱗癌患者外周血中淋巴細(xì)胞對(duì)其特異性抗原的反應(yīng)能力，探討其三者特異性CTL免疫應(yīng)答差異與臨床特征的關(guān)系，為今后食管癌的免疫治療提供實(shí)驗(yàn)室憑據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象收集2015年4月-2016年10月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的51例食管鱗癌初治患者，年齡40～82歲，中位年齡63歲。其中，男性28例，女性23例。依據(jù)WHO病理分型，低分化鱗癌13例，中分化鱗癌37例，高分化鱗癌1例。依據(jù)第7版食管癌TNM分期，Ⅰ期1例，Ⅱ期13例，Ⅲ期28例，Ⅳ期9例。該研究通過本院倫理委員會(huì)并且所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(表1)。納入標(biāo)準(zhǔn)： 首次經(jīng)病理明確診斷且未接受過治療的食管鱗癌初治患者；KPS評(píng)分≥70分；有完整的臨床病例資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤的患者；急性或慢性感染性疾??；合并免疫系統(tǒng)疾病者；既往接受過放化療、免疫治療等影響免疫功能者。

1.2試劑ELISPOT 試劑盒由英國牛津大學(xué) MRC 人類免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3抗原肽由英國牛津大學(xué) MRC 人類免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)；96 孔板購于美國 Millipore 公司；細(xì)胞培養(yǎng)液、淋巴細(xì)胞分離液、胎牛血清、磷酸鹽緩沖液(PBS)、植物血凝素(PHA)、細(xì)胞刺激因子(H10/IL2)均購于美國 Sigma 公司；臺(tái)盼藍(lán)染液、青霉素-鏈霉素溶液購于上海生工生物技術(shù)有限公司。

1.3外周血單個(gè)核細(xì)胞采集采集患者治療前肘靜脈血標(biāo)本10 mL(EDTA抗凝)，外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclearcells，PBMC)的分離采用密度梯度離心法，使用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，將細(xì)胞重懸，進(jìn)行培養(yǎng) ELISPOT 實(shí)驗(yàn)。

表1 51例食管鱗癌初治患者的基本臨床特征/例(%)

1.4酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)試驗(yàn)用ELISPOT試劑盒(MABTECH Australia)的一抗包被帶硝酸纖維素膜的96孔板，2 h后用含10%胎牛血清(Sigma America)的細(xì)胞培養(yǎng)液(RPMI 1640 Sigma America)阻斷反應(yīng)，向96孔板中加入制備好的細(xì)胞懸液50 μL，同時(shí)分別加入NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3特異性多肽，設(shè)立陰性對(duì)照孔(加入50 μL細(xì)胞培養(yǎng)液)，陽性對(duì)照孔加入2 μL植物血凝素(PHA)，將反應(yīng)體系放入5% CO2、37℃ 孵育箱中過夜培養(yǎng)。第2天采用無菌PBS洗板6次，加入稀釋好的二抗50 μL，加蓋后室溫放置2h；再次用無菌PBS洗板6次，每孔中加入稀釋好的三抗，加蓋后室溫下放置45 min；按說明書配制ALP顯色液，每孔加入50 μL，加蓋后室溫下放置15～20 min。

1.5ELISPOT實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)ELISPOT檢測的96 孔板上顯示的每一個(gè)斑點(diǎn)都對(duì)應(yīng)一個(gè)分泌細(xì)胞因子的CTL，即斑點(diǎn)形成細(xì)胞(spots forming cell，SFC)，結(jié)果采用 SFC/106PBMCs，表示為反應(yīng)強(qiáng)度。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性對(duì)照孔SFC≥25個(gè)/106PBMCs，陰性對(duì)照孔SFC<30個(gè)/106PBMCs，陽性對(duì)照孔SFC≥陰性對(duì)照孔SFC的3倍。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料使用百分比表示，組間差異用卡方檢驗(yàn)或Fshier確切概率法檢驗(yàn)。NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3不同抗原肽刺激的特異性CTL免疫陽性反應(yīng)頻率與一般臨床特征間比較采用卡方檢驗(yàn)或Fshier確切概率法檢驗(yàn)。符合正態(tài)分布的2組間計(jì)量資料的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，符合非正態(tài)分布的2組間計(jì)量資料的比較采用秩和檢驗(yàn)，對(duì)TAA不同抗原肽刺激的特異性CTL免疫陽性反應(yīng)強(qiáng)度與一般臨床特征間比較采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Graph Pad Prism5.0軟件繪制統(tǒng)計(jì)圖。

2 結(jié)果

2.1食管鱗癌患者中NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3特異性CTL免疫反應(yīng)頻率及強(qiáng)度食管鱗癌患者外周血中NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率分別為19.6%(10/51)、9.8%(5/51)和15.7%(8/51)，平均反應(yīng)強(qiáng)度分別36.3、36.0和45.8 SFC/106PBMCs(表2)。

表2 食管鱗癌患者NY-ESO-1、SSX-2、MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度

2.2食管鱗癌患者NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度與臨床特征間比較NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度在年齡、病灶位置、病灶長度、T 分期、N 分期、M分期、臨床分期和病例分型之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)強(qiáng)度在頸段+胸上段食管鱗癌與胸中段+胸下段食管鱗癌比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(頸段+胸上段：61.7 SFC/106PBMCs vs 胸中段+胸下段：30.0 SFC/106PBMCs，P=0.063)(表3)。

表3 食管鱗癌患者NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度比較

2.3食管鱗癌患者SSX-2特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度與臨床特征間比較SSX-2特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度在年齡、病灶位置、病灶長度、T 分期、N 分期、M分期、臨床分期和病例分型之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表4)。

表4 食管鱗癌患者SSX-2特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度比較

2.4食管鱗癌患者M(jìn)AGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度與臨床特征間比較MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度在年齡、病灶位置、病灶長度、T 分期、N 分期、M分期、臨床分期和病例分型之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率在≥60歲組與<60歲組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(≥60歲：23.5% vs <60歲：0.0%，P=0.077)(表5)。

3 討論

20世紀(jì)末，有國外學(xué)者經(jīng)研究第一次發(fā)現(xiàn)TSA可以在人類生殖細(xì)胞中限制性表達(dá)[13]。近年來，CTA被證實(shí)在多腫瘤腫瘤組織中高表達(dá)，而在正常組織中不表達(dá)，其表達(dá)受甲基化調(diào)控，并影響腫瘤患者的預(yù)后[14-15]。此外，TSA在腫瘤起始細(xì)胞/干細(xì)胞中高表達(dá)[16]，針對(duì)其免疫治療能同樣對(duì)腫瘤干細(xì)胞起到殺傷作用，因而，TSA可以作為腫瘤免疫治療的理想靶點(diǎn)。

NY-ESO-1也被稱為癌-睪丸抗原1B(CTAG1B)，由位于X染色體Xq28區(qū)域的基因CTGAG1B編碼。NY-ESO-1是具有180個(gè)氨基酸的18 kDa蛋白質(zhì)，具有富含甘氨酸的N端區(qū)域和具有Pcc-1結(jié)構(gòu)域的強(qiáng)疏水性C端區(qū)域。是人類NY-ESO-1抗原家族主要成員之一[17]，最早是美國學(xué)者Chen等[17]采用SEREX從食管鱗狀上皮細(xì)胞癌中鑒定獲得。正常生理情況下，僅睪丸、卵巢等生殖器官表達(dá)NY-ESO-1，正常組織中不表達(dá)，在包括黑色素瘤、頭頸部、肺癌、肝癌、胃癌和卵巢癌等多種惡性腫瘤組織中才會(huì)較高水平表達(dá)。既往研究大多使用腫瘤組織免疫組化、RT-PCR等方法。吳晁等[18]使用構(gòu)建組織芯片并結(jié)合免疫組化的方法，檢測食管鱗狀細(xì)胞癌組織中NY-ESO-1蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)大部分在腫瘤細(xì)胞分化較好的Ⅰ期和Ⅱ期食管鱗癌中表達(dá)，其陽性表達(dá)率具有顯著性差異(P<0.01)，與腫瘤的大小、浸潤深度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。陳軍等[19]研究者檢測食管癌患者中NY-ESO-1 mRNA的陽性表達(dá)率為38.3%，并且在14例檢測到的NY-ESO-1+HLA-A2+患者中檢測到11例不同程度的NY-ESO-1 157-165表位特異性CTL反應(yīng)患者，分析隨訪資料發(fā)現(xiàn)弱反應(yīng)者生存率顯著低于強(qiáng)反應(yīng)者。Liang等[20]通過RT-PCR方法檢測食管癌腫瘤組織中CTA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)NY-ESO-1、SSX-2、MAGE-A1及MAGE-A3表達(dá)率分別為20%、0%、25.7%及62.9%，NY-ESO-1、MAGE-A1和 MAGE-A3隨腫瘤進(jìn)展其表達(dá)率增加。由此可見，NY-ESO-1在食管癌組織中及血液中不同程度表達(dá)，有可能成為食管癌免疫治療的靶點(diǎn)。研究證實(shí)，T細(xì)胞在腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要的作用。ELISPOT法能夠?qū)?jīng)過特異性抗原活化后并且可以分泌細(xì)胞因子(如INF-γ、TNF-α等)的單個(gè)效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)和分析，從而進(jìn)一步明確外周血中特異性CTL細(xì)胞的數(shù)量和功能，其特異性和敏感性較以往傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法均較高，現(xiàn)在已經(jīng)大量應(yīng)用到T細(xì)胞對(duì)病毒或者腫瘤抗原(肽段或肽池)免疫應(yīng)答反應(yīng)檢測的研究中。本研究采用ELISPOT法檢測食管鱗癌患者外周血中腫瘤相關(guān)抗原NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)頻率為19.6%，反應(yīng)強(qiáng)度為36.3 SFC/106PBMCs，提示該腫瘤相關(guān)抗原均可以在食管鱗癌患者體內(nèi)表達(dá)，并且可以刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。與之前報(bào)道相似。李春柳等[21]報(bào)道，NY-ESO-1蛋白的表達(dá)陽性率與食管鱗癌的病理分級(jí)和遠(yuǎn)端(鎖骨上)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性差異(P<0.01)，而與腫瘤的大小、位置及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)。本研究中NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)頻率及反應(yīng)強(qiáng)度在臨床特征(年齡、病灶位置、病灶長度、T 分期、N 分期、M分期、臨床分期和病例分型)間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但頸段+胸上段食管鱗癌的NY-ESO-1特異性CTL反應(yīng)強(qiáng)度高于胸中段+胸下段食管鱗癌差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.063)，在腫瘤病灶位置的臨床特征上有趨于具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的趨勢，可能因納入樣本量較少有關(guān)，因此這需要本課題組擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。

表5 食管鱗癌患者M(jìn)AGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率及強(qiáng)度比較

SSX-2是滑膜肉瘤X斷裂點(diǎn)基因(synovial sarcoma X breakpoint, SSX)基因家族其中之一，SSX-2蛋白質(zhì)可能作為轉(zhuǎn)錄抑制因子，還能在癌癥患者中引發(fā)自發(fā)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，此外，研究證明用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-2′-deoxycytidine(5-aza-dc)處理后，可以在腫瘤細(xì)胞中選擇性地誘導(dǎo)SSX-2表達(dá)[22]。這可能具有臨床應(yīng)用價(jià)值。這些表觀遺傳修飾劑可增加抗原表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)癌細(xì)胞的抗原加工和表位呈遞，促進(jìn)抗原特異性CTL的識(shí)別增強(qiáng)[22]。目前研究表明，正常組織組織中SSX-2蛋白主要是位于精原細(xì)胞胞核。文獻(xiàn)資料顯示，在黑色素瘤、前列腺癌及骨肉瘤組織中，SSX-2蛋白的表達(dá)率與腫瘤的轉(zhuǎn)移程度有關(guān)，并且是黑色素瘤、前列腺癌等腫瘤中疫苗免疫療法的潛在有用靶標(biāo)，SSX-2抗原分子可以作為腫瘤免疫治療的靶點(diǎn)有著潛在的應(yīng)用前景[23]。Gehring等[24]研究者報(bào)道在亞洲人群中NY-ESO-1及SSX-2存在較高頻率的特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，但是在肝癌患者研究中發(fā)現(xiàn)這些特異性的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)處于耗竭狀態(tài)。本研究中食管鱗癌患者外周血中腫瘤相關(guān)抗原SSX-2特異性CTL反應(yīng)頻率反應(yīng)頻率和強(qiáng)度分別為9.8%、36.00SFC/106PBMCs；SSX-2特異性CTL反應(yīng)頻率及反應(yīng)強(qiáng)度在臨床特征(年齡、病灶位置、病灶長度、T 分期、N 分期、M分期、臨床分期和病理分型)間比較差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。需要本課題組擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究探討。

黑色素瘤相關(guān)抗原3(melanoma-associated antigens 3, MAGE-A3)是MAGE基因家族表達(dá)蛋白其中之一，MAGE-A3)作為人類已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并鑒定的腫瘤特異性抗原，除了睪丸和胎盤之外的正常組織以及良性腫瘤中不表達(dá)外，廣泛表達(dá)于人體的多種腫瘤組織及細(xì)胞，如黑色素瘤、頭頸部鱗癌、食管癌,肝癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等。MAGE基因編碼的肽段，由不同類型的人類白細(xì)胞抗原(human leucocyte antisen，HLA)Ⅰ類分子遞呈，可以被CTL特異識(shí)別，產(chǎn)生 CTL 對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷作用[11]。目前，MAGE-A3檢測研究有免疫組織化學(xué)法、血清中酶聯(lián)免疫吸附檢測法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcrlltlon nolomerase challl reaction，RT-PCR)法。周高峰等[25]研究采用RT-qPCR)和免疫組化法檢測膀胱癌組織、癌旁組織及正常膀胱組織中MAGE-A3 mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果為膀胱癌組織中MAGE-A3蛋白和mRNA的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織和正常組織的(P<0.05)；120例膀胱癌患者中，56例膀胱癌組織MAGE-A3蛋白表達(dá)陽性，陽性率46.7%。在不同病理分期、病理分級(jí)中MAGE-A3表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008、P=0.01)；隨病理分期、分級(jí)的升高而升高。陳新峰等[26]研究表明，采用RT-PCR和免疫組化檢測MAGE-A3在食管癌組織中的表達(dá)及和臨床特征之間的關(guān)系，結(jié)果顯示MAGE-A3在食管癌腫瘤組織中高表達(dá)，并具有較高的陽性率；并且MAGE-A3的表達(dá)同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期相關(guān)。Liang等[20]發(fā)現(xiàn)食管癌腫瘤組織中NY-ESO-1、MAGE-A1和MAGE-A3的表達(dá)率隨腫瘤進(jìn)展增加。本課題組前期研究董丹寧等[27]研究采用ELISPOT法對(duì)鼻咽癌患者外周血中MAGE-A3的特異性CTL免疫應(yīng)答差異及其臨床相關(guān)性研究，結(jié)果為鼻咽癌患者外周血中MAGE-A3特異性CTL免疫應(yīng)答陽性率為22.2%，平均反應(yīng)強(qiáng)度分別40.0 SFC/106PBMCs；鼻咽癌患者M(jìn)AGE-A3特異性抗原多肽反應(yīng)陽性率在臨床特征間無明顯差異，而MAGE-A3在反應(yīng)強(qiáng)度上鼻咽癌Ⅲ期組(49.5 SFC/106PBMC)明顯高于Ⅳ組(26.6 SFC/106PBMC)(P=0.018)。董丹寧等[28]另外一組研究采用ELISPOT法對(duì)頭頸部腫瘤患者外周血中TAA特異性CTL免疫反應(yīng)進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)抗原NYESO-1、SSX-2、SALL-4、MAGE-A1和MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率分別為19.2%、26.9%、53.8%、23.1%和34.6%，反應(yīng)強(qiáng)度分別28.7、20.0、40.3、30.8和23.3 SFC/106PBMCs，其中MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率及反應(yīng)強(qiáng)度均較最高。本研究中采用ELISPOT 方法檢測 51 例食管鱗癌患者外周血中食管鱗癌患者外周血中腫瘤相關(guān)抗原MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率、反應(yīng)強(qiáng)度分別為15.7%和45.8 SFC/106PBMCs，提示其在食管鱗癌患者體內(nèi)高表達(dá)，并且可以刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。本研究MAGE-A3反應(yīng)強(qiáng)度與本課題組前期研究結(jié)果相似，在反應(yīng)頻率上有所降低，可能與 ELISPOT實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)的調(diào)整有關(guān)。MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率及反應(yīng)強(qiáng)度在臨床特征(年齡、病灶位置、病灶長度、T 分期、N 分期、M分期、臨床分期和病例分型)間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在年齡分組中≥60歲組MAGE-A3特異性CTL反應(yīng)頻率高于<60歲組(P=0.077)，在臨床特征上有趨于具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的趨勢，與本課題組前期研究結(jié)果相似。但仍需要本課題組擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究驗(yàn)證?？紤]食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展可能與腫瘤消耗導(dǎo)致的免疫功能低下有關(guān)，隨著淋巴結(jié)逐漸轉(zhuǎn)移，腫瘤患者病情逐漸進(jìn)展，患者體內(nèi)T細(xì)胞功能逐漸喪失，耗竭的T細(xì)胞逐漸失去效應(yīng)能力，削弱T細(xì)胞對(duì)腫瘤的有效控制，使患者的免疫功能低下[29]。

綜上所述，T細(xì)胞免疫與腫瘤的進(jìn)展和疾病的轉(zhuǎn)歸有著密切的關(guān)系，本研究通過探索食管鱗癌中NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3特異性免疫反應(yīng)差異與臨床特征之間的聯(lián)系,為其三者在今后食管鱗癌免疫研究提供一定實(shí)驗(yàn)室依據(jù)及線索。但仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本開展驗(yàn)證研究。