何瑾瑜，董 璐，楊躍青，薛敬東

（陜西省中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710003）

膽汁淤積性肝病是指各種原因引起的膽汁形成、分泌和（或）膽汁排泄異常所致肝臟病變，最常見的臨床表現(xiàn)及體征為黃疸，同時常伴有一定程度的皮膚瘙癢、乏力等癥狀［1－2］，生化異常主要是堿性磷酸酶（ALP）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）及血總膽紅素（TBil）升高［3］。按照病因可分為肝細胞性膽汁淤積、膽管性膽汁淤積及混合性膽汁淤積［4］。目前，推薦只需符合生化指標ALP高于1．5倍正常上限值（ULN），且 GGT 高于 3 倍 ULN，便可確診［5］。中醫(yī)學(xué)對膽汁淤積性肝病并無認識，中醫(yī)典籍里也無專門記載，很難將其歸于某證，專家多認為應(yīng)歸屬“黃疸病”范疇［6］。金虎退黃湯是陜西省名中醫(yī)薛敬東主任根據(jù)多年治療膽汁淤積性肝病的臨床經(jīng)驗方，以整體觀念為指導(dǎo)，并運用中醫(yī)辨證論治的思想總結(jié)而得。濕邪阻滯、瘀血內(nèi)結(jié)是導(dǎo)致該病最基本的中醫(yī)病因病機，病位可涉及肝、脾、腎、膽、胃等，病性多屬虛實夾雜，臨床表現(xiàn)為“濕－瘀－虛”的演變過程，但以濕邪、瘀血貫穿疾病始終。應(yīng)以利濕退黃、活血化瘀為基本治療原則，自擬方以此選擇特異性中藥遣藥組方，臨床療效顯著。本研究中探討了自擬方金虎退黃湯對α－萘異硫氰酸酯（ANIT）誘導(dǎo)的急性肝內(nèi)膽汁淤積性肝損傷大鼠的干預(yù)作用及作用機制?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器、試藥與動物

1．1 儀器

7170型全自動生化分析儀（日立公司）；BP61型電子分析天平（萬分之一，德國賽多利斯公司）；Axioskop 40型光學(xué)顯微鏡（我院病理科提供）；NU－6832E型低溫冰箱（天肯貿(mào)易有限公司）。

1．2 試藥

ANIT（純度98%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；橄欖油（上海佳格食品有限公司）；桃仁 Prunus persica L．Batsch，紅花 Carthamus tinctorius L．，金錢草 Lysimachia christinae Hance，桂枝 Cinnamomum cassia Presl，虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb．et Zucc，梔子 Gardenia jasminoides Ellis購自北京同仁堂西大街店，盤龍七Hemsleya panlongqi購自西安市藥材市場，均由張瑞霞主任醫(yī)師鑒定為正品；生理鹽水（西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司，批號為051005122）；10%水合氯醛（陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心，批號為20040420）；金虎退黃湯組方由薛敬東主任醫(yī)師提供，藥物由陜西省中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備。

1．3 動物

SPF級健康雄性SD大鼠，4～5周齡，體質(zhì)量130～180 g，共21只。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（陜）2013－003。

2 方法與結(jié)果

2．1 方法

藥液制備：將ANIT溶于橄欖油中，配成質(zhì)量分數(shù)為1．6%的ANIT橄欖油溶液。按照1／2處方量稱取藥材，分別按照8倍、6倍、4倍量加水煎煮3次，合并水煎液，濃縮，得質(zhì)量濃度為1 g／mL的處方提取液。因?qū)嶒炛芷谳^長，處方提取液每周制備1次，于4℃冷藏保存，用前自然晾至室溫，備用。

實驗方法：將21只健康SD大鼠隨機分為空白組、模型組、實驗組，各7只，ANIT橄欖油量造模劑量為80 mg／kg。處方提取液成人給藥劑量為 110 g／d，按體表面積折合成的大鼠給藥量為9．9 g／kg。造模前，大鼠禁食過夜，造模后 2 h給藥。于0，7，14，21 d時空白組給予橄欖油（5 mL／kg），模型組給予ANIT橄欖油（劑量為 80 mg／kg），實驗組給予 ANIT 橄欖油（80 mg／kg）造模 ＋ 處方提取液（9．9 g ／kg）。期間，每天稱體質(zhì)量，實驗組每天給藥1次；23 d時，空白組和模型組取血＋摘取各臟器稱質(zhì)量，實驗組給藥2 h后取血＋摘取各器官稱質(zhì)量。實驗期間，每天觀察各組大鼠的一般狀況，包括毛色、活動、飲水等，每天稱體質(zhì)量，記錄其變化。末次造模后48 h，以10%水合氯醛（每100 g體質(zhì)量0．33 mL）腹腔麻醉，腹主動脈采血4～5 mL，離心分離血清，采用全自動生化分析儀檢測血清相關(guān)生化指標，即丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （ALT）、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （AST）、GGT、ALP、TBil、直接膽紅素（DBil）、總膽汁酸（TBA）。取血后處死大鼠，摘取所有大鼠肝臟，每塊肝臟取1 cm大小肝組織3塊，10%甲醛固定，包埋切片，常規(guī)HE染色，光鏡觀察病理變化。

2．2 結(jié)果

一般狀況：實驗中大鼠的造模、給藥全過程均順利進行，未發(fā)生大鼠死亡等不良情況。實驗前，所有大鼠呼吸、行為活動、腺體分泌、糞便均正常，實驗期間未見顯著變化；除空白組外，其余大鼠造模后均出現(xiàn)毛色偏黃、無光澤。

體質(zhì)量：每天稱體質(zhì)量，記錄其變化，詳見表1?？梢?，各組大鼠體質(zhì)量均緩慢增加，經(jīng)方差齊性檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0．05）。

表1 各組大鼠體質(zhì)量變化比較（X ± s，g）

血清學(xué)指標：結(jié)果見表2。模型組與空白組生化指標相比，經(jīng)方差齊性檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01），表明造模成功。與模型組相比，經(jīng)方差齊性檢驗，實驗組TBil，DBil，TBA，AST，ALP 均顯著降低（P ＜ 0．05），但ALT與 GGT無顯著差異（P ＞0．05）。

肝組織病理變化光鏡觀察：由圖1可知，空白組大鼠肝臟組織病理未見異常，小葉及細胞形態(tài)未見異常，匯管區(qū)未見炎性細胞浸潤，未見肝竇擴張，毛細膽管未見膽汁淤積。模型組大鼠肝臟組織病理存在明顯異常，小葉壞死灶較多，細胞存在明顯的變性，且排列紊亂，匯管區(qū)可見大量炎性細胞浸潤，毛細膽管可見明顯的膽汁淤積，且存在膽管增生。實驗組大鼠肝臟組織病理存在異常，小葉可見少量壞死灶，膽管增生，毛細膽管膽汁淤積明顯，匯管區(qū)有少量炎性細胞浸潤。

表2 大鼠血液生化指標變化比較（X ± s）

圖1 各組大鼠肝組織形態(tài)學(xué)切片（HE染色，10×10）

3 討論

ANIT是一種肝毒性物質(zhì)，主要影響膽管上皮細胞和肝細胞，導(dǎo)致肝內(nèi)膽汁淤積性肝損傷，表現(xiàn)為血液中膽紅素和轉(zhuǎn)氨酶的顯著增高［7］，符合臨床患者膽汁淤積表現(xiàn)。本研究結(jié)果表明，金虎退黃湯能有效改善ANIT誘導(dǎo)的急性膽汁淤積肝損傷，包括減少AST與ALP活性，降低血清中DBil，TBil，TBA的含量，減輕肝臟的病理性改變。

方中虎杖性微寒，味微苦，歸肝、膽經(jīng)，利濕退黃，活血化瘀，是治膽退黃的專藥，為君藥［8］。金錢草性微寒，歸肝、膽經(jīng)，清熱利濕，活血退黃，臨床多用于各型黃疸病及肝病的治療［9］；梔子性寒，味苦，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血散瘀的功效，與君藥配伍，可加強利濕、退黃、散瘀；桃仁與紅花，均入肝經(jīng)，均具有活血祛瘀之功效。四者為臣藥，有助君藥利濕退黃、活血化瘀之功效。盤龍七［10］是陜西民間用藥，性平，味澀、微苦，入肝經(jīng)，活血除濕，補脾健胃，為佐藥，一可取其活血利水之功效，以增強療效，二是因肝病常易犯脾胃，故應(yīng)注重補脾健胃，收治肝之病，當(dāng)先實脾之功［10］。桂枝性溫，味辛，行血脈，消瘀血，助氣化而行津液的作用，為使藥［9，11］。方中7味中藥配伍運用，可獲良效。

本研究結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠膽紅素升高以DBil為主，伴ALP，GGT，TBA的升高，具有膽汁淤積的特征；肝臟組織病理切片可見模型組大鼠肝臟組織病理存在明顯異常，表明膽汁淤積模型造模成功。與模型組比較，實驗組能有效降低膽汁淤積大鼠AST，ALP，TBil，DBil等相關(guān)生化指標水平；同時，肝臟組織病理顯示，實驗組大鼠肝小葉可見少量壞死灶，匯管區(qū)有少量炎性細胞浸潤，表明金虎退黃湯能有效減少大鼠炎性細胞浸潤，并有抑制肝細胞壞死的作用。

綜上所述，金虎退黃湯可能通過抑制炎性反應(yīng)及肝細胞壞死達到退黃、降酶、修復(fù)肝細胞損傷的作用。但具體是何種炎性因子參與調(diào)節(jié)作用，以及其分子生物學(xué)機制，仍有待后續(xù)研究進一步探索。