陳萬進(jìn)　雷冰

【摘要】 肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其具有病理機(jī)制復(fù)雜、發(fā)病率高、早期癥狀無特異性、治療效果差等特征。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物有利于協(xié)助臨床診斷，其具有無創(chuàng)性、操作簡單、可重復(fù)性等優(yōu)點，故筆者特進(jìn)行此次綜述，具體內(nèi)容如下。

【關(guān)鍵詞】 肺癌； 液體活檢； 循環(huán)腫瘤細(xì)胞； 循環(huán)腫瘤DNA； 外泌體

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.12.088 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1674-6805（2018）12-0182-03

Progress in Liquid Biopsy of Lung Cancer/CHEN Wanjin，LEI Bing//Chinese and Foreign Medical Research，2018，16（12）：182-184

【Abstract】 Lung cancer is one of the most common malignant tumors in China.It has the characteristics of complex pathological mechanism， high incidence，early symptoms，and poor treatment effect.With the development of medical technology，it is found that tumor markers are helpful for clinical diagnosis.They are non-invasive，simple and repeatable.Therefore，the author carried out the research as follows.

【Key words】 Lung cancer； Liquid biopsy； Circulating tumor cells； Circulating tumor DNA； Exocrine body

First-authors address：Red Cross Hospital of Yulin City，Yulin 537000，China

原發(fā)性肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率、病死率均較高，據(jù)文獻(xiàn)[1]報道，全世界每年大概新發(fā)1 800萬例肺癌，且患者的預(yù)后較差，患者的5年生存率在15%左右。病理活檢作為目前診斷肺癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，診斷準(zhǔn)確性高，但其是一種有創(chuàng)性診斷方法，患者可能會出現(xiàn)氣胸、出血等并發(fā)癥，使其臨床發(fā)展受到一定程度的限制[2]。癌胚抗原、鱗狀細(xì)胞癌抗原等腫瘤標(biāo)志物在臨床應(yīng)用廣泛，但其診斷的特異性、敏感度較低。活檢組織標(biāo)本肺癌病理診斷的作用主要是明確患者是否存在腫瘤、腫瘤的類型[3]。隨著醫(yī)療的發(fā)展，對于液體活檢的研究深入，發(fā)現(xiàn)其是一種無創(chuàng)、可重復(fù)、有效的檢查手段，有利于協(xié)助早期診斷肺癌[4]。目前臨床液體活檢主要包括循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）、外泌體、循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA），具體內(nèi)容見下文。

1 肺癌的概述

近年來，隨著生活節(jié)奏加快，生活習(xí)慣不規(guī)律，致使罹患肺癌的人數(shù)呈直線上升。肺癌具有較高的發(fā)病率和死亡率，對人們的身體健康和日常生活造成嚴(yán)重威脅。尤其是近50年以來，大多數(shù)國家患有肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位。目前肺癌的病因尚未完全查明，大量資料表明，長期大量吸煙患者罹患肺癌的概率較常人要高，是不吸煙者的10～20倍，開始吸煙的年齡越小，患肺癌的概率越高。此外，吸煙不僅對本人的身體健康造成影響，還會對周圍人群的健康產(chǎn)生不良影響，致使被動吸煙者肺癌發(fā)病率明顯增加。另外，城市居民肺癌的發(fā)病率比農(nóng)村高，這可能與城市大氣污染和煙塵中含有致癌物質(zhì)有關(guān)。除此之外，所處的職業(yè)環(huán)境、電離輻射、慢性肺部感染、遺傳等因素都是誘發(fā)肺癌的緣由之一。其臨床表現(xiàn)也較為復(fù)雜，初期患者并無明顯特征，還要取決于腫瘤病變位置，患者會出現(xiàn)咳嗽、痰中帶血、胸痛、胸悶、聲帶嘶啞等癥狀；并經(jīng)病情長時間發(fā)展累及全身，會伴有發(fā)熱、消瘦等癥狀，甚至出現(xiàn)肺源性關(guān)節(jié)增生癥及異位激素分泌綜合征；待發(fā)展到終末期，腫瘤會擴(kuò)散到淋巴、胸膜、消化道、腎臟等處，嚴(yán)重危及患者的生命安全。目前，臨床中針對肺癌患者除基本的體格檢查外，還采用X線、CT檢查、MRI檢測、細(xì)胞學(xué)檢驗等手段，雖然可為肺癌的診斷和進(jìn)一步的治療提供依據(jù)，但對患者都會造成不同程度的創(chuàng)傷。因此，采用無創(chuàng)、快捷、便宜、有效的檢測手段對肺癌患者進(jìn)行檢查是非常重要的，不僅可提高疾病診斷效率，而且減少對患者的損傷。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，肺癌液體活檢逐漸走到相關(guān)患者和檢驗醫(yī)生的眼中，這種液體活檢的方式通過對肺癌患者液體中腫瘤細(xì)胞的檢驗，不僅縮短檢驗時間，為患者治療提供充分時間，而且減少其他檢查對患者的創(chuàng)傷，成為肺癌檢驗中常用的方式之一。

2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究進(jìn)展

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）是原發(fā)肺癌細(xì)胞脫落進(jìn)入到血液循環(huán)中，作為潛在的生物標(biāo)志物，其可作為評價療效的指標(biāo)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，對于非小細(xì)胞癌的患者，在行放射治療前對CTCs的數(shù)量進(jìn)行了檢測，放射治療后CTCs的數(shù)目隨著腫瘤的縮小而減少，有明顯的相關(guān)性，故可把CTCs當(dāng)成評價療效的指標(biāo)[5]。還有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，CTCs在肺癌診斷的特異性為84.1%～100%，敏感性為30.4%～89.0%[6]。有學(xué)者采取熒光原位雜交技術(shù)檢測50例非小細(xì)胞癌患者的CTCs，臨界值為3.2 ml/2細(xì)胞單位，特異性為97.60%，敏感性為84.0%[7]。文獻(xiàn)[8]報道，采取PCR檢測225例非小細(xì)胞癌患者CTCs，將臨界值設(shè)置為8.64～8.65單位CTCs，發(fā)現(xiàn)其特異性為84.10%和93.20%，敏感性為73.20%和81.80%。CTCs在血液中的含量非常少，在每毫升血液中大約含有100萬血細(xì)胞，但其中大約混雜有1個腫瘤細(xì)胞[9]。故進(jìn)行CTCs檢測時需要富集，可采取RT-PCR、干細(xì)胞計數(shù)、免疫磁珠標(biāo)志等方法進(jìn)行富集。CTCs的檢測方法主要有免疫熒光法、細(xì)胞計數(shù)法、核酸檢測法、CTC-chip法、CellSearch系統(tǒng)法、酶聯(lián)免疫斑點法、原位雜交法、測序法等。

3 外泌體的研究進(jìn)展

外泌體是細(xì)胞主動朝細(xì)胞外分泌的囊泡樣小體，且大小一致，具有促進(jìn)血管新生和抗腫瘤免疫等功能[10]。外泌體主要包括miRNA、脂類、mRNA、蛋白質(zhì)等[11]。外泌體可協(xié)助肺癌的臨床診斷、預(yù)測預(yù)后[12]。來自于腫瘤的外泌體會促進(jìn)癌細(xì)胞的生長繁殖。有學(xué)者認(rèn)為外泌體可以對核酸物質(zhì)進(jìn)行有效的保護(hù)，可以使ctDNA易降解的問題得到有效解決[13]。外泌體比較容易富集，臨床常用的檢測技術(shù)有色譜法、納米微粒追蹤分析術(shù)、免疫磁珠法等[14]。

4 循環(huán)腫瘤DNA的研究進(jìn)展

攜帶腫瘤特有突變信息的血漿游離DNA即為循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）。其主要存在源于凋亡或是壞死的腫瘤細(xì)胞[15]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，對于ctDNA是EGFR基因突變檢測中十分有效、具有特異性的生物標(biāo)志物，其對于非小細(xì)胞肺癌的診療具有重要價值[16]。在非小細(xì)胞肺癌血液ctDNA中，可發(fā)現(xiàn)雜合性缺失、基因甲基化、基因突變、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性等多基因改變[17]。有學(xué)者認(rèn)為ctDNA檢測腫瘤變異的敏感性遠(yuǎn)超過CTCs，其可作為有效的手段監(jiān)測非小細(xì)胞型肺癌[18]。ctDNA在肺癌患者體內(nèi)的含量特別少，大約占血漿游離DNA的1%，其半衰期非常短[19]。故對檢測的靈敏度有較高要求。目前臨床多采取測序、digital PCR法[20]。

5 液體活檢的優(yōu)勢和局限性

隨著醫(yī)療的發(fā)展進(jìn)步，對于腫瘤的診斷，不僅需要結(jié)合臨床癥狀、還需要腫瘤位于組織、細(xì)胞、分子層面的技術(shù)檢測，進(jìn)行綜合考慮[21]。雖然病理組織活檢診斷價值較高，但是腫瘤的異質(zhì)性導(dǎo)致其檢查結(jié)果不可全面揭示腫瘤基因圖譜，在一定程度上可出現(xiàn)誤診[22]。且對于晚期肺癌患者、不宜手術(shù)的患者組織取樣較為困難。液體活檢技術(shù)是抽取肺癌患者體內(nèi)的外周血進(jìn)行檢測分析，是一種無創(chuàng)性、可重復(fù)取樣的檢測手段[23]。且可以有效地反映腫瘤基因圖譜全貌。

但液體活檢也存在一定的局限性。進(jìn)行CTCs分離必須采取特殊設(shè)備，很難鑒定和確認(rèn)真正的腫瘤細(xì)胞，需對測序技術(shù)有所依賴[24]。且以上報道中不同的研究方法，特異性和敏感性有所不同，說明PCR檢測、熒光原位雜交技術(shù)等檢測方法不同，數(shù)據(jù)存在一定的誤差。選取的樣本數(shù)量、納入的腫瘤分期均可有效檢測差異，故CTCs檢測具有一定的局限性。外泌體檢測亦具有一定的局限性，進(jìn)行外泌體分離時需要特殊設(shè)備，且無法進(jìn)行細(xì)胞層面的深入研究。ctDNA檢測因體內(nèi)ctDNA含量特別少，且非常容易被正常血漿游離DNA所掩蓋，無法從細(xì)胞層面進(jìn)行深入研究[25]。

綜上所述，腫瘤液體活檢具有無創(chuàng)、操作簡便、可展示腫瘤基因圖譜全貌，但也具有局限性，對測序技術(shù)有一定依賴性，故需要進(jìn)一步在臨床進(jìn)行探討。

參考文獻(xiàn)

[1]黃璜，陳虹.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌診斷中的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2016，32（16）：2521-2523.

[2]任麗娜，劉春芳，徐健，等.超聲支氣管鏡引導(dǎo)下支氣管針吸活檢在肺癌及縱隔肺門病變診斷中的應(yīng)用價值[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2017，24（2）：63-65.

[3]劉子鑫，石潔，李楠，等.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在原發(fā)性肝癌診斷、預(yù)后及療效評價中的應(yīng)用進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥，2016，56（27）：110-112.

[4] Jay F D，Gary D K，Kelly M M，et al.Tracking Viable Circulating Tumor Cells（CTCs） in the Peripheral Blood of Non-Small Cell Lung Cancer Patients Undergoing Definitive Radiation Therapy： Pilot Study Results[J].Cancer，2015，121（1）：139-149.

[5] Chen Y Y，Xu G B.Effect of circulating tumor cells combined with negative enrichment and CD45-FISH identification in diagnosis，therapy monitoring and prognosis of primary lung cancer[J].Medical Oncology，2015，32（7）：190.

[6] Wilson T R，Lackner M R.Changing the paradigm：circulating tumor DNA as a ‘liquid biopsy for clinical biomarker assessments[J].Clinical Investigation，2014，4（12）：1083-1093.

[7] Wei Z，Xia W，Lv Z，et al.Liquid Biopsy for Cancer： Circulating Tumor Cells，Circulating Free DNA or Exosomes？[J].Cellular Physiology & Biochemistry International Journal of Experimental Cellular Physiology Biochemistry & Pharmacology，2017，41（2）：755-768.

[8] Zhou C.Blood-based Tumor Markers in Lung Cancer[J].Chinese Journal of Lung Cancer，2015，18（12）：770.

[9] Pantel K，Alix-Panabières C.Liquid biopsy in 2016： Circulating tumour cells and cell-free DNA in gastrointestinal cancer[J].Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology，2017，14（2）：73.

[10] Hünten S，Kaller M，Drepper F，et al.p53-regulated networks of protein，mRNA，miRNA and lncRNA expression revealed by integrated pSILAC and NGS analyses[J].Molecular & Cellular Proteomics，2015，33（2）：305-307.

[11]王超群，孫豪庭.外泌體與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)研究進(jìn)展[J].復(fù)旦學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2016，43（1）：99-103.

[12]王瑩.表皮生長因子受體基因敏感突變表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D].長春：吉林大學(xué)，2015，19（6）：394-398.

[13]段新春，劉志東，許紹發(fā).循環(huán)腫瘤細(xì)胞在早期肺癌診療中的研究進(jìn)展[J].中國肺癌雜志，2017，20（10）：703-709.

[14]鄭迪凡，陳海泉.液體活檢及其在非小細(xì)胞肺癌診治中的研究進(jìn)展[J].中國肺癌雜志，2016，19（6）：394-398.

[15]喻珣，陳建華.循環(huán)腫瘤DNA在非小細(xì)胞肺癌中的研究進(jìn)展[J].國際呼吸雜志，2016，36（11）：859-864.

[16] Sposito A，Criscitiello C，Trapani D，et al.The Emerging Role of “Liquid Biopsies” Circulating Tumor Cells，and Circulating Cell-Free Tumor DNA in Lung Cancer Diagnosis and Identification of Resistance Mutations[J].Current Oncology Reports，2017，19（1）：1.

[17] Alix-Panabières C，Pantel K.Clinical Applications of Circulating Tumor Cells and Circulating Tumor DNA as Liquid Biopsy[J].Cancer Discovery，2016，6（5）：479.

[18]王鵬.組織EGFR突變型晚期NSCLC患者血液檢測ctDNA EGFR突變狀態(tài)臨床研究[D].濟(jì)南：濟(jì)南大學(xué)，2016.

[19]巴雅力格，李卉，孫巖巖，等.液體活檢技術(shù)在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2017，49（8）：920-922.

[20]康艷麗，曹穎平.肺癌的液體活檢和檢測技術(shù)進(jìn)展[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（17）：2429-2431.

[21]沈曉燕，章杭，楊楊，等.液體活檢在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2017，25（1）：160-164.

[22]閔夢云，尹宜發(fā)，趙新程，等.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌中的臨床研究進(jìn)展[J].腫瘤學(xué)雜志，2018（1）：110-111.

[23]吳飛，婁加陶.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌診治中的應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，36（11）：983-986.

[24]夏雨婷，張志偉，宋鑫.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌個體化診療中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中國腫瘤生物治療雜志，2017，24（4）：367-372.

[25]李媛，宋麗華，宋現(xiàn)讓.小細(xì)胞肺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測技術(shù)及應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中華腫瘤防治雜志，2013，20（10）：793-796.

（收稿日期：2018-03-23）