劉毓民

[山西省化工研究所(有限公司)，太原 030021]

嘧霉胺是一種高效、低毒的苯胺基嘧啶類(lèi)殺菌劑，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)和熏蒸作用，主要用于防治番茄、黃瓜等作物的灰霉病病害，并且對(duì)非苯胺基嘧啶類(lèi)殺菌劑已產(chǎn)生抗藥性的灰霉病菌有效[1]。啶酰菌胺是由德國(guó)巴斯夫公司開(kāi)發(fā)的一種新型碳酰胺類(lèi)內(nèi)吸性殺菌劑，用于多種經(jīng)濟(jì)作物的灰霉病、菌核病、白粉病等病害的防治，與其他藥物無(wú)交互抗性[2]。兩者復(fù)配能克服單一制劑的局限性，提高藥效、降低成本。上述2種單劑有效成分的液相、氣相色譜檢測(cè)方法已有研究[1-4]，但對(duì)于嘧霉胺和啶酰菌胺復(fù)配制劑中2種有效成分在同一條件下進(jìn)行檢測(cè)的方法尚未見(jiàn)報(bào)道[5-6]。嘧霉胺和啶酰菌胺混配的農(nóng)藥制劑，對(duì)有效成分分析檢測(cè)方法的建立提出了新的要求。本文建立了在同一液相色譜條件下，同時(shí)測(cè)定嘧霉胺和啶酰菌胺的分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有快速、準(zhǔn)確、分離效果好、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，是一種對(duì)嘧霉胺和啶酰菌胺復(fù)配制劑中有效成分進(jìn)行檢測(cè)的較為理想的方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和儀器

高效液相色譜儀(UItiMate 3000)，具有紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；超聲儀(昆山超聲儀器有限公司，KQ-50B)；紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠，752)；過(guò)濾器(濾膜孔徑0.45 μm)；微量進(jìn)樣器(100 μL)；甲醇(色譜級(jí))；新蒸二次蒸餾水；啶酰菌胺標(biāo)樣(純度≥99.0%)；嘧霉胺標(biāo)樣(純度≥98.5%)；50%嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒劑(實(shí)驗(yàn)室留樣)。

1.2 高效液相色譜操作條件

色譜柱：250 mm×4.6 mm (i.d)不銹鋼柱，內(nèi)填Nove-Pak C18、5 μm填充物；柱溫：室溫；流動(dòng)相：甲醇+水=75+25 (體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣體積：20 μL；保留時(shí)間：嘧霉胺約為5.4 min，啶酰菌胺約為8.7 min。標(biāo)樣和樣品的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1、2。

圖1 嘧霉胺和啶酰菌胺標(biāo)樣的高效液相色譜圖

圖2 嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒劑的高效液相色譜圖

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的制備

稱(chēng)取嘧霉胺標(biāo)樣0.06 g (精確至0.000 2 g)和啶酰菌胺標(biāo)樣0.05 g (精確至0.000 2 g)，置于同一100 mL容量瓶中，加入適量甲醇，超聲儀震蕩5 min，使標(biāo)樣溶解，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度搖勻。準(zhǔn)確吸取10.0 mL該溶液于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱(chēng)取約0.22 g的試樣(精確至0.000 2 g)，置于另一 100 mL容量瓶中，加入適量甲醇，超聲儀震蕩5 min，使試樣溶解，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度搖勻。準(zhǔn)確吸取10.0 mL該溶液于另一50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾后備用。

1.3.3 測(cè)定

在上述的高效液相色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針的嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面積相對(duì)響應(yīng)值變化小于1.5%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中嘧霉胺(或啶酰菌胺)質(zhì)量分?jǐn)?shù)X (%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面積的平均值，A2為試樣溶液中嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面積的平均值，m1為嘧霉胺(或啶酰菌胺)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)，m2為樣品的質(zhì)量(g )，P為標(biāo)樣中嘧霉胺(或啶酰菌胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

在200～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，嘧霉胺在254 nm和280 nm處有紫外吸收，啶酰菌胺在210 nm、230 nm和254 nm處有紫外吸收。從這2組試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，在254 nm波長(zhǎng)下，嘧霉胺和啶酰菌胺均有紫外吸收，可以用該波長(zhǎng)進(jìn)行試驗(yàn)。在后續(xù)的試驗(yàn)中，從圖1和圖2可以看出，嘧霉胺和啶酰菌胺的響應(yīng)值和峰高比例都較為合適，并且雜質(zhì)也不影響有效成分測(cè)定，所以本文選擇254 nm作為試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別選用不同比例的甲醇+水與乙腈+水作為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)。從多次試驗(yàn)的結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)，用甲醇+水=75+25 (體積比)作為流動(dòng)相，流量為1.0 mL/min時(shí)，2個(gè)有效組分之間，以及組分與雜質(zhì)之間均有較好的分離，相互之間沒(méi)有干擾；2個(gè)有效組分的峰型尖銳、對(duì)稱(chēng)。由于分離效果及出峰形狀都比較滿意，符合要求，因此本文選用了甲醇+水=75+25(體積比)作為流動(dòng)相。

2.3 線性相關(guān)性測(cè)定

稱(chēng)取嘧霉胺標(biāo)樣0.06 g (精確至0.000 2 g)和啶酰菌胺標(biāo)樣0.05 g (精確至0.000 2 g)，置于同一100 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管準(zhǔn)確吸取上述混和標(biāo)樣溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 mL分別置于5個(gè)50 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度搖勻，在相同的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積(A·10-5)為縱坐標(biāo)(Y)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算其線性方程。嘧霉胺的線性方程為y=0.902 7x－2.834 8，相關(guān)系數(shù)r為0.999 0；啶酰菌胺的線性方程為y=0.666 2x+1.538 7，相關(guān)系數(shù)r為0.999 6。

2.4 方法的精密度試驗(yàn)

取同一個(gè)批次的樣品，在相同色譜條件下平行測(cè)定 5次，嘧霉胺和啶酰菌胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.089和0.097，變異系數(shù)分別為0.32%和0.42%。由表1的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，嘧霉胺和啶酰菌胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)都很小，表明本方法的精密度高，試驗(yàn)方法可行。

表1 嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒劑精密度測(cè)定結(jié)果

2.5 方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在已知含量的試樣中，同時(shí)加入一定量的嘧霉胺和啶酰菌胺標(biāo)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，嘧霉胺和啶酰菌胺的平均回收率分別為 99.51%和99.33%。由表2的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，嘧霉胺和啶酰菌胺加標(biāo)品回收率好，表明本方法的準(zhǔn)確度高。

表2 嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒劑準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果

3 結(jié) 論

通過(guò)以上一系列的試驗(yàn)可以看出，本試驗(yàn)方法的分離效果和線性關(guān)系良好，精密度和準(zhǔn)確度較高，能夠達(dá)到分析檢測(cè)的技術(shù)要求，并且具有操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)。因此，該方法可用于嘧霉胺和啶酰菌胺復(fù)配制劑中2種有效成分的同時(shí)定量分析，以及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)。

歐盟將不再批準(zhǔn)敵草快、草銨膦再評(píng)審申請(qǐng)，兩產(chǎn)品或?qū)⑼顺鰵W盟市場(chǎng)

近期從瑞典化學(xué)局獲悉，歐盟將不再批準(zhǔn)除草劑敵草快[Diquat (dibromide)]和草銨膦(glufosinate，glufosinate-ammonium)的再評(píng)審申請(qǐng)。這2種活性物質(zhì)在歐盟都屬于候選替代物質(zhì)(candidate for substitution，CfS)。

(摘自世界農(nóng)化網(wǎng))