江 歡， 李曉紅， 朱偉杰

(1深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院生殖內(nèi)分泌科， 廣東 深圳 518172;2暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生殖免疫研究所， 廣東 廣州 510632)

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)是育齡婦女常見(jiàn)的內(nèi)分泌及代謝紊亂性疾病，大多數(shù)患者表現(xiàn)為持續(xù)性不排卵的生殖障礙。PCOS介導(dǎo)不孕的發(fā)病機(jī)制尚未充分認(rèn)識(shí)，近年來(lái)研究顯示炎癥免疫與PCOS的發(fā)生發(fā)展聯(lián)系密切，PCOS婦女體內(nèi)的炎癥因子和免疫因子表達(dá)增加[1-3]，抗卵巢抗體、抗甲狀腺抗體和抗核抗體等陽(yáng)性率較高[4-5]，表明機(jī)體免疫防御機(jī)制有不同程度紊亂，對(duì)自身抗原易于發(fā)生免疫應(yīng)答。精子對(duì)女性是一個(gè)同種異體抗原，產(chǎn)生的抗精子抗體(antisperm antibody, ASA)可降低女性生育力[6]。PCOS婦女處于低度慢性炎癥的免疫功能紊亂狀態(tài)[7-8]，是否對(duì)精子抗原的易感性增高尚需充分評(píng)價(jià)。

高雄激素血癥和胰島素抵抗是PCOS婦女的病理生理基本特征。過(guò)高雄激素和胰島素抵抗加重使PCOS婦女肥胖的發(fā)生率增加。脂肪細(xì)胞具有內(nèi)分泌作用，可分泌多種脂肪細(xì)胞因子參與免疫細(xì)胞活動(dòng)及炎性反應(yīng)過(guò)程。肥胖改變了機(jī)體脂肪細(xì)胞因子的分泌平衡，可以加劇PCOS婦女的免疫功能紊亂狀態(tài)，但肥胖及非肥胖PCOS不孕婦女與精子抗原有否聯(lián)系尚無(wú)資料。在先前研究的基礎(chǔ)上[9]，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肥胖型及非肥胖型PCOS不孕婦女的ASA水平，以期闡明PCOS與精子同種免疫的相互關(guān)系，為深入認(rèn)識(shí)PCOS介導(dǎo)不孕的發(fā)病機(jī)制提供參考資料。

材 料 和 方 法

1 材料

ASA免疫珠(抗IgG和IgA型)購(gòu)于Irvine Scientific；牛血清白蛋白和DMEM培養(yǎng)液購(gòu)于Gibco。

選擇2017年1月～12月于深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院生殖內(nèi)分泌科就診的127例原發(fā)不孕的PCOS患者，年齡26～35歲，不孕1～5年。PCOS診斷參照鹿特丹診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，按體質(zhì)量指數(shù)(body mass index, BMI)分成2組：肥胖型PCOS組(BMI≥25 kg/m2,42例,obese組)和非肥胖型PCOS組(18 kg/m2

2 方法

于月經(jīng)期第2～4天做性激素測(cè)定的同時(shí)獲取入組對(duì)象的血清標(biāo)本。按WHO精液分析手冊(cè)操作方法，采用間接免疫珠試驗(yàn)(indirect immunobead test, iIBT)檢測(cè)ASA水平[11]。血清標(biāo)本經(jīng)56 ℃、30 min滅活，用洗滌后的精子懸液按1∶5比例稀釋，37 ℃孵育60 min后，用含0.3%牛血清白蛋白的DMEM培養(yǎng)液洗滌精子2次，調(diào)整精子懸液濃度為2.0×1010/L。取5 μL精子懸液與5 μL免疫珠于玻片上混勻，用相差顯微鏡放大400倍檢查濕片，觀察200個(gè)活動(dòng)精子，以>50%活動(dòng)精子黏附有免疫珠為陽(yáng)性[11]，本實(shí)驗(yàn)室設(shè)20%～49%為弱陽(yáng)性，<20%為陰性[12-14]。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陽(yáng)性及陰性對(duì)照。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間比較采用方差分析，ASA陽(yáng)性率的比較采用2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 3組患者一般資料的比較

Obese組患者平均年齡(31.0±3.1)歲，平均不孕(3.4±1.2)年，BMI≥25 kg/m2，平均BMI 為(28.5±1.6) kg/m2；non-obese組患者平均年齡(30.7±2.7)歲，平均不孕(3.3±1.1)年，18 kg/m2

表1 3組患者一般資料的比較

*P<0.05vsobese group.

2 3組患者血清ASA水平的比較

Obese組和non-obese組患者均未檢出ASA-IgG陽(yáng)性，control組檢出2例ASA-IgG陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.2%，2例陽(yáng)性均為原發(fā)不孕患者。Obese組、non-obese組和control組分別檢出1、2和2例弱陽(yáng)性，弱陽(yáng)性率分別為2.4%、2.4%和2.2%，其中control組1例弱陽(yáng)性為原發(fā)不孕患者，另1例為早孕人流后繼發(fā)不孕患者。3組弱陽(yáng)性率的比較沒(méi)有差異。3組均未檢出ASA-IgA陽(yáng)性，見(jiàn)表2。

表2 3組患者血清ASA水平比較

討 論

PCOS是臨床表現(xiàn)高度異質(zhì)性的疾病，在育齡婦女的發(fā)病率為5%～10%[15]，導(dǎo)致女性不孕。PCOS的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜并呈多因性，以往認(rèn)識(shí)到PCOS不孕婦女的下丘腦-垂體-卵巢軸抑制了卵泡發(fā)育和排卵，近年研究揭示PCOS不孕婦女的免疫功能紊亂，易于激起自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生自身抗體干擾女性生殖[1-5]。精子對(duì)女性是同種異體抗原，ASA是引起女性免疫不孕的常見(jiàn)因素[6,16]。本研究中PCOS婦女ASA的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，提示PCOS狀態(tài)下的免疫功能紊亂并未增加這些婦女對(duì)精子抗原的易感性。根據(jù)WHO精液檢查與處理手冊(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，50%以上的活動(dòng)精子黏附有ASA免疫珠時(shí)，才診斷為精子抗原導(dǎo)致的免疫不孕[11]。故此，ASA沒(méi)有參與介導(dǎo)PCOS不孕婦女的生育力下降。

女性體內(nèi)ASA產(chǎn)生的確切途徑尚未完全闡明。女性生殖道黏膜上皮的屏障作用是構(gòu)成黏膜局部免疫防御的重要因素。當(dāng)生殖道炎癥或損傷時(shí)，正常的免疫屏障或防御機(jī)制受到破壞，精子抗原與機(jī)體免疫系統(tǒng)接觸后，可能誘發(fā)女性的同種免疫反應(yīng)，產(chǎn)生ASA[6, 17]。目前研究認(rèn)為，炎癥免疫與PCOS的發(fā)病機(jī)制相關(guān)，但本課題組先前研究顯示，PCOS并不增加?jì)D女ASA的生成[9]。由于胰島素抵抗，PCOS婦女多合并肥胖[18]。肥胖通常伴隨機(jī)體的慢性炎癥狀態(tài)，可加重PCOS婦女的免疫功能紊亂[19]。因此，肥胖型PCOS婦女在慢性炎癥因子的協(xié)同刺激下，對(duì)自身或同種抗原的易感性可能增加，但ASA是否參與介導(dǎo)肥胖型PCOS婦女的不孕發(fā)病機(jī)制未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，肥胖型PCOS不孕婦女體內(nèi)未檢測(cè)出ASA陽(yáng)性，表明PCOS婦女合并肥胖亦沒(méi)有增加對(duì)精子抗原的易感性，可能涉及的因素：(1)PCOS婦女體內(nèi)激素環(huán)境復(fù)雜，性激素是參與調(diào)控免疫反應(yīng)的因素之一[20]。雌激素可增加外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平，增強(qiáng)免疫抑制功能[21]。雄激素可抑制B淋巴細(xì)胞增殖和抗體生成，發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用[22]。PCOS婦女體內(nèi)雄激素和雌激素水平升高，通過(guò)直接抑制B細(xì)胞的抗體合成功能或增加Treg數(shù)量等多種途徑可抑制免疫應(yīng)答，減弱了精子抗原對(duì)女性免疫系統(tǒng)的刺激作用；(2)本研究所納入的PCOS對(duì)象均已排除生殖道異常及感染等病變，即女性生殖道上皮完整性未受破壞或損傷，避免了精子抗原與女性生殖道免疫活性細(xì)胞的接觸；(3)女性生殖道局部免疫防御機(jī)制相對(duì)獨(dú)立，不受機(jī)體炎癥狀態(tài)的影響。故此，沒(méi)有引起針對(duì)精子抗原的免疫應(yīng)答。

人工流產(chǎn)對(duì)子宮內(nèi)膜和子宮頸會(huì)造成損傷，生殖道感染是人流術(shù)后常見(jiàn)的并發(fā)癥。流產(chǎn)后如果過(guò)早有頻繁的無(wú)屏障性交，可能使精子抗原易于與生殖道免疫活性細(xì)胞發(fā)生相互作用，誘導(dǎo)了ASA產(chǎn)生。本研究結(jié)果顯示，非PCOS不孕組有流產(chǎn)史的婦女沒(méi)有檢出ASA陽(yáng)性，該組的2例ASA陽(yáng)性均為原發(fā)不孕患者，表明人工流產(chǎn)的規(guī)范操作及術(shù)后注意避免過(guò)早接觸精子抗原，不會(huì)導(dǎo)致ASA的產(chǎn)生。根據(jù)本研究結(jié)果，非PCOS不孕組婦女中檢測(cè)出2例(2.2%)ASA陽(yáng)性，此外，3組婦女均有個(gè)別標(biāo)本顯示ASA弱陽(yáng)性，提示不論機(jī)體免疫狀態(tài)如何，性交行為的存在使婦女均有被精子抗原致敏的可能性[6]。因此，ASA作為引起女性免疫不孕的常見(jiàn)因素，在不孕婦女的常規(guī)檢測(cè)中仍是必要的。

綜上所述，ASA不是介導(dǎo)肥胖型及非肥胖型PCOS婦女生育力下降的主要因素。但PCOS婦女機(jī)體的免疫功能紊亂，特別對(duì)于肥胖型患者，慢性炎癥可能促使其它潛在的免疫因素共同參與PCOS不孕的致病機(jī)制，今后需加強(qiáng)相關(guān)的研究。