周偉新 凌學(xué)民 王建蔚

子宮內(nèi)膜異位癥是婦科臨床上的常見病和多發(fā)病,雖然子宮內(nèi)膜異位癥是良性病變,但在某種程度上存在惡性行為,VEGF是血管形成的關(guān)鍵促進(jìn)因子,可直接作用在血管內(nèi)皮細(xì)胞,通過對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的刺激形成新生血管,為異位內(nèi)膜的存活和發(fā)展提供營(yíng)養(yǎng)支持［1］。nm23是一種重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,有可能對(duì)腫瘤血管的形成起到抑制性作用。本研究以30例子宮內(nèi)膜異位癥患者和30例子宮內(nèi)膜正常者為研究對(duì)象,對(duì)VEGF及nm23在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)進(jìn)行探討和評(píng)價(jià),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究選取2014年8月～2017年8月在本院接受治療的30例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為觀察組,另選取同期不孕癥或流血查因等30例正常內(nèi)膜者作為對(duì)照組。對(duì)照組年齡23～48歲,平均年齡(35.26±4.33)歲。觀察組年齡24～49歲,平均年齡(35.38±4.54)歲；根據(jù)美國(guó)生育協(xié)會(huì)AFS修正的子宮內(nèi)膜異位癥分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期,Ⅰ～Ⅱ期患者10例,Ⅲ～Ⅳ期患者20例；增生期18例,分泌期12例。納入標(biāo)準(zhǔn)［2］：①觀察組患者均經(jīng)手術(shù)確診為子宮內(nèi)膜異位癥,對(duì)照組均經(jīng)病理證實(shí)子宮內(nèi)膜正常,且無器質(zhì)性疾?。虎诎肽陜?nèi)均未服用過激素類藥物；③知情、自愿參與。

1.2 研究方法 刮取觀察組25例患者的在位內(nèi)膜、30例患者的異位內(nèi)膜及對(duì)照組的正常內(nèi)膜組織標(biāo)本。所有標(biāo)本均在手術(shù)時(shí)獲取,使用10%甲醛溶液進(jìn)行常規(guī)固定,常規(guī)脫水,使用石蠟包埋,4 μm連續(xù)切片,染色,在光鏡下對(duì)標(biāo)本的組織學(xué)形態(tài)進(jìn)行觀察,篩選組織標(biāo)本。采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè),VEGF為兔抗人多克隆抗體,nm23為鼠抗人單克隆抗體,SP試劑盒和DNA顯色液均由湖州英創(chuàng)生物科技有限公司提供。SP法步驟：脫蠟至水后抗原修復(fù),冷卻后磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗3次,3 min/次。除去PBS,加氧化物酶阻斷劑,阻斷30 min,用PBS沖洗。將PBS除去,加Triton透化15 min,除去Triton后,加入非免疫血清封閉液,封閉30 min。除去血清,加1抗,室溫下孵育2 h,用PBS洗3次。除去PBS后,加入2抗,室溫下孵育10 min,PBS洗3次。除去PBS后,切片滴加DNA染色。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜VEGF及nm23表達(dá)情況。以內(nèi)膜細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒為VEGF、nm23陽性染色,綜合細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占面積的得分進(jìn)行評(píng)估：①細(xì)胞染色強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)［3］：0分表示不著色,1分表示黃色,2分表示棕黃色,3分表示黃褐色。②染色細(xì)胞所占面積標(biāo)準(zhǔn)［4］：0分為無陽性細(xì)胞染色,1分為面積≤25%,2分表示面積為26%～50%,3分表示面積＞50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜VEGF陽性表達(dá)率比較 子宮異位內(nèi)膜陽性表達(dá)率為86.67%,高于在位內(nèi)膜的64.00%、正常內(nèi)膜的36.67%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 子宮異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜nm23陽性表達(dá)率比較 子宮異位內(nèi)膜nm23陽性表達(dá)率為33.33%,明顯低于在位內(nèi)膜的72.00%、正常內(nèi)膜的93.33%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。見表 2。

2.3 子宮內(nèi)膜異位癥中VEGF和nm23表達(dá)的相關(guān)性分析在子宮內(nèi)膜異位癥中VEGF和nm23無明顯相關(guān)性(r=0.251,P＞0.05)。見表 3。

表1 子宮異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜VEGF陽性表達(dá)率比較(n,%)

表2 子宮異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜nm23陽性表達(dá)率比較(n,%)

表3 子宮內(nèi)膜異位癥中VEGF和nm23表達(dá)的相關(guān)性分析(n)

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥常見于育齡期女性,雖然是一種良性疾病,但異位的內(nèi)膜有侵襲、種植、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)行為,病理見圖1。隨著分子生物學(xué)的進(jìn)一步和發(fā)展和血管生成理論的完成,血管生成在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用得到了更多證明,新生血管可以為異位內(nèi)膜在盆腔局部和病灶的種植提供營(yíng)養(yǎng)。因此,對(duì)VEGF和nm23在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中起到的作用和相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究意重大。

本次研究結(jié)果顯示,從子宮異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜的VEGF表達(dá)情況來看,子宮異位內(nèi)膜陽性表達(dá)率為86.67%,高于在位內(nèi)膜的64.00%、正常內(nèi)膜的36.67%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。子宮異位內(nèi)膜nm23陽性表達(dá)率為33.33%,明顯低于在位內(nèi)膜的72.00%、正常內(nèi)膜的93.33%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在子宮內(nèi)膜異位癥中VEGF和nm23無明顯相關(guān)性(r=0.251,P＞0.05),本結(jié)果與相關(guān)報(bào)道相符［5］。子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中的VEGF水平提高,可增加腹壁微血管生成量,導(dǎo)致盆腔局部對(duì)異位內(nèi)膜的種植接受能力提高,在孕卵植入和發(fā)育中有重要作用［6-8］。此外,VEGF有可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的生成,見圖2。nm23在疾病的發(fā)病和進(jìn)展中起到重要作用,nm23是一種重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,其表達(dá)水平降低可能與異位內(nèi)膜存活和轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等變化有關(guān),但具體的影響機(jī)制尚不明確,仍需要深入研究［10］。

圖2 HE染色,X10：子宮肌層見異位宮內(nèi)膜形態(tài)及間質(zhì)成分

綜上所述,在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展過程中,VEGF和nm23起到重要作用,對(duì)兩者進(jìn)行深入研究,可用于了解子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生機(jī)制,為臨床治療提供指導(dǎo)性建議。