黃凌萍 宋佳 丁潔瓊(通訊作者) 羅斌華(通訊作者)

（1湖北科技學(xué)院藥學(xué)院 湖北 咸寧 437100）

（2咸寧市中心醫(yī)院湖北科技學(xué)院附屬第一醫(yī)院 湖北 咸寧 437100）

（3湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 湖北 咸寧 437100）

臨床超聲成像使用的對(duì)比劑是SonoVue脂質(zhì)微泡，粒徑為2～8μm，由于不能穿越血管壁內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入到組織，不能增強(qiáng)血管外組織病變區(qū)域的超聲成像，所以它們屬于血池顯影對(duì)比劑[1-2]。近年來(lái)，隨著納米技術(shù)的廣泛應(yīng)用，納米泡作為新型超聲成像對(duì)比劑的研究引起人們的重視[3-4]。腫瘤血管壁間隙大約在380～780nm，納米泡就有可能穿越腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)入腫瘤實(shí)體，并在靶向基團(tuán)特異性的作用下長(zhǎng)時(shí)間停留在腫瘤病灶組織，因而可以增強(qiáng)血管外微小腫瘤病灶組織超聲成像，改善腫瘤組織超聲診斷效果。

1.儀器與藥品

高剪切乳化機(jī)（上海弗魯克有限公司），細(xì)胞超聲破碎儀（賽飛有限公司），超聲成像系統(tǒng)（美國(guó) philips公司），全氟戊烷（北京百靈威科技有限公司），聚乳酸（濟(jì)南正罡科技有限公司）。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 聚乳酸納米泡的制備

聚乳酸用適量二氯甲烷溶解，然后向溶液中加入0.5mL全氟戊烷（PFP），在10000 rpm條件下，高剪切形成O1/O2型初乳；將初乳加入到聚乙烯醇（PVA）水溶液中，在攪拌的作用下形成O1/O2/W型預(yù)復(fù)乳；然后超聲處理形成納米乳。攪拌過(guò)夜，固化形成納米泡，放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 納米泡的粒徑表征

動(dòng)態(tài)光散射法測(cè)定納米泡的粒徑及多分散系數(shù)。測(cè)定條件為溫度為25℃，激光粒度儀參數(shù)為He-Ne激光（λ=633nm），4mW，角度為90°。

2.3 納米泡的體外穩(wěn)定性研究

取4℃冰箱中保存的納米泡溶液適量，用生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)∵m量進(jìn)行測(cè)定粒徑，測(cè)定時(shí)間分別為0，5，10，15，20，25，30，60，90天，將得到的粒徑數(shù)據(jù)根據(jù)時(shí)間繪制曲線，通過(guò)不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定粒徑數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)納米泡在儲(chǔ)存過(guò)程中的穩(wěn)定性。

2.4 納米泡的體外超聲成像研究

2.4.1 超聲成像研究 取4℃冰箱中保存的納米泡溶液適量，加入到乳膠手套中，手套放在37℃恒溫水浴中，進(jìn)行成像研究，對(duì)照品分別是生理鹽水和耦合劑。

2.4.2 納米泡的擊破試驗(yàn) 取4℃冰箱中保存的納米泡溶液適量，加入到乳膠手套中，手套放在37℃恒溫水浴中，用超聲波（較強(qiáng)的機(jī)械指數(shù)）瞬間將聚乳酸納米泡進(jìn)行擊破，擊破之前和之后分別進(jìn)行一次成像。

3.結(jié)果與討論

3.1 聚乳酸納米泡的制備

本研究采用乳化溶劑揮發(fā)法制備聚乳酸納米泡，囊心是液態(tài)的全氟戊烷。

3.2 納米泡的粒徑

納米泡外觀呈乳白色，稀釋后有明顯藍(lán)色乳光，納米泡的平均粒徑為318.4±5.1 nm，PDI為0.167±0.020。

3.3 納米泡的體外穩(wěn)定性研究

檢測(cè)的納米泡粒徑在這段時(shí)間內(nèi)變化較小，且粒子的多分散系數(shù)也都小于0.1，表明納米泡在儲(chǔ)存的這段時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性。

3.4 納米泡的體外超聲成像研究

3.4.1 納米泡的超聲成像 如下圖1所示，在超聲波的輻照下，納米泡在手套中呈現(xiàn)出一個(gè)個(gè)亮點(diǎn)(如圖2C所示)，這些均勻密集的亮點(diǎn)形成了超聲高信號(hào)，能增強(qiáng)超聲成像，而對(duì)照品生理鹽水和耦合劑中，未見(jiàn)到亮點(diǎn)(如圖2AB所示)。

圖1 納米泡體外成像A 生理鹽水，B耦合劑，C聚乳酸納米泡

圖2

3.4.2 納米泡的擊破試驗(yàn) 聚乳酸納米泡在擊破之前與之后的超聲成像結(jié)果如圖1所示，可以發(fā)現(xiàn)，在擊破之后的整個(gè)視野內(nèi)，納米泡出現(xiàn)的亮點(diǎn)明顯減少，而且，在擊破之后成像的圖片上，明顯發(fā)現(xiàn)乳膠手套的底部，有很多較大的亮點(diǎn)出現(xiàn)，其產(chǎn)生的原因是擊破之后的納米泡會(huì)釋放出全氟戊烷氣體，這些氣體分散在液體中，會(huì)聚集增大，產(chǎn)生較大的氣泡，所以成像的圖片上亮點(diǎn)增大。