喻 琴，王東升，張世棟，董書偉，呂鳳霞，劉 升，那立冬，閆寶琪，嚴(yán)作廷*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省中獸藥工程技術(shù)研究中心，甘肅蘭州 730050；2.河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司,河南新鄭 451100)

畜禽外感發(fā)熱是獸醫(yī)臨床常見(jiàn)病癥之一，多見(jiàn)于急、慢性疾病過(guò)程，主要在機(jī)體本身正氣不足的前提下，受六淫之邪或溫?zé)嵋叨局畾馇謹(jǐn)_，導(dǎo)致?tīng)I(yíng)衛(wèi)失和，臟腑陰陽(yáng)失調(diào)，出現(xiàn)病理性體溫升高，伴有惡寒、流涕、咽喉部充血紅腫、糞干等主要臨床癥狀的一類外感病證[1-2]。獸醫(yī)臨床上治療外感發(fā)熱常用化學(xué)藥品有安乃近、氨基比林、乙酰水楊酸等，中藥制劑有荊防敗毒散、銀翹散等，但隨著這些藥物的長(zhǎng)期使用，化學(xué)藥品的耐藥性越來(lái)越嚴(yán)重，廣泛應(yīng)用臨床的中藥制劑也較少，中草藥具有毒副作用低，不易產(chǎn)生耐藥性，無(wú)或低殘留，低成本等特點(diǎn)，在畜禽疾病防治中越來(lái)越受到養(yǎng)殖戶的青睞[3-4]。魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液由魚(yú)腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹和金銀花炮制后制成，具有清熱解毒等作用，主要用于外感風(fēng)熱引起的咽喉腫痛，急性咽炎、扁桃體炎及風(fēng)熱等癥候。目前，已開(kāi)展了魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液的毒理學(xué)研究，而對(duì)其藥理學(xué)研究尚未進(jìn)行。為此，本試驗(yàn)采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加、醋酸致小鼠扭體反應(yīng)建立炎癥、疼痛模型，進(jìn)行了魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液的抗炎、鎮(zhèn)痛作用研究，以期為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠150只，雌雄各半，體重18 g～22 g，購(gòu)自蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK(甘)2009-0004。小鼠飼養(yǎng)在22℃±2℃，相對(duì)濕度為50%±5%的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，每次試驗(yàn)前先適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d。

1.1.2 儀器與設(shè)備 JM5102電子天平,余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；CP223C電子天平,上海奧豪斯儀器有限公司產(chǎn)品；6 mm打孔器；UV-BlueStar Plus紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)，北京萊伯泰科儀器有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 藥物與試劑 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液，河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司的中試產(chǎn)品，規(guī)格為每100 mL相當(dāng)于原生藥量為170 g；雙黃連口服液，河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，規(guī)格無(wú)100 mL/瓶；二甲苯天津市化學(xué)試劑二廠產(chǎn)品；伊文思藍(lán)，F(xiàn)luka進(jìn)口分裝，上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站產(chǎn)品；冰醋酸，天津市巴斯夫化工有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[5-7]，選取健康昆明小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，即陰性對(duì)照組(生理鹽水20 mL/kg)、陽(yáng)性對(duì)照組(雙黃連口服液20 mL/kg體重)、魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中、低劑量組(34、17、8.5 g/kg體重)，灌胃給藥，灌胃容積為20 mL/kg，每天1次，連續(xù)5 d，末次給藥30 min后，在小鼠右耳的前后兩面均勻涂抹30 μL的二甲苯致炎，左耳作對(duì)照。30 min后頸椎脫臼處死，立即沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑6 mm的打孔器分別在兩耳片同一部位打孔，精密稱重，并計(jì)算耳腫脹度和腫脹度抑制率。

1.2.2 醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加試驗(yàn) 醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加試驗(yàn)的分組及給藥方案同1.2.1。參照文獻(xiàn)[8-9]，末次給藥1 h后，尾靜脈注射5 mg/mL伊文思藍(lán)生理鹽水溶液(10 mL/kg)，隨即腹腔注射新鮮配置的7 mg/mL的醋酸溶液(10 mL/kg)，20 min后，頸椎脫臼處死，剖開(kāi)腹腔，用生理鹽水溶液沖洗腹腔，沖洗3次，每次3 mL，收集腹腔洗液,并3 000 r/min離心10 min，吸取上清液，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在620 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(OD)，并計(jì)算各組抑制率。

1.2.3 醋酸扭體試驗(yàn) 醋酸扭體試驗(yàn)的分組及給藥方案同1.2.1。參照文獻(xiàn)[10-11]，末次給藥1 h后，腹腔注射新鮮配制的7 mg/mL醋酸溶液(10 mL/kg)，注射5 min后，觀察并記錄20 min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)，并計(jì)算疼痛抑制率。

2 結(jié)果

2.1 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響

魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹的影響見(jiàn)表1。從表1可知，與陰性對(duì)照組相比，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中、低劑量組和藥物對(duì)照組均可極顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹(P<0.01)。與藥物對(duì)照組相比，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液中、低劑量組抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹無(wú)顯著差異(P>0.05)，高劑量組可顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹(P<0.05)，且高劑量組的效果優(yōu)于中、低劑量組(P<0.05)，這表明不同劑量的魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液均能極顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，以高劑量效果最好。

2.2 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響

魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響見(jiàn)表2。由表2可知，與陰性對(duì)照組相比，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中劑量組可顯著抑制醋酸引起的毛細(xì)血管通透性增加(P<0.05)，且高劑量組效果優(yōu)于中劑量組，抑制率分別為38.10%和29.10%；魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液低劑量組對(duì)醋酸引起的毛細(xì)血管通透性的增加也有抑制作用，抑制率為20.11%，但差異不顯著(P>0.05)；藥物對(duì)照組能極顯著抑制醋酸引起的小鼠毛細(xì)血管通透性增加(P<0.01)，抑制率為46.03%。與藥物對(duì)照組相比，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中、低劑量組抑制醋酸引起的小鼠毛細(xì)血管通透性增加差異不顯著(P>0.05)。這表明高、中、低劑量的魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液能不同程度的抑制醋酸引起的小鼠毛細(xì)血管通透性增加。

表1 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹的影響

注：同列肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

Note: Different small letters in the same column mean significant difference (P<0.05),and different capital letters indicate extremely significant difference (P<0.01).

表2 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)醋酸致毛細(xì)血管透性增加的影響

注：同列肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

Note: Different small letters in the same column mean significant difference (P<0.05),and different capital letters indicate extremely significant difference (P<0.01).

2.3 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用

魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)醋酸致小鼠扭體影響見(jiàn)表3。由表3可知，與陰性對(duì)照組相比，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高劑量組和雙黃連口服液能極顯著抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)(P<0.01)；魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液中劑量組能顯著抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)(P<0.05)；而魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液低劑量組雖能減少小鼠的扭體次數(shù)，但與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。隨著劑量的增加，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)的抑制作用依次增強(qiáng)，然而與陽(yáng)性對(duì)照組相比，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中劑量組對(duì)醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)抑制作用不明顯(P>0.05)，低劑量組的效果較差(P<0.05)。這表明魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中、低劑量組能劑量依賴性的減少扭體次數(shù)，抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)，以高劑量效果最好。

表3 魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)醋酸致小鼠扭體影響

注：同列肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

Note: Different small letters in the same column mean significant difference (P<0.05),and different capital letters indicate extremely significant difference (P<0.01).

3 討論

炎癥是動(dòng)物機(jī)體局部損傷所產(chǎn)生的具有防御意義的應(yīng)答性反應(yīng)。二甲苯引起的血管舒張、皮膚水腫[5]以及醋酸致毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加是急性炎癥的標(biāo)示性變化[12-13]，為經(jīng)典的急性炎癥模型。為此，本試驗(yàn)選用二甲苯致小鼠耳廓腫脹和醋酸致毛細(xì)血管通透性增加模型，研究魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液對(duì)急性炎癥的抗炎作用。結(jié)果表明，在急性炎癥動(dòng)物動(dòng)物模型中，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液可顯著抑制小鼠耳廓腫脹及毛細(xì)血管通透性增加且呈劑量依賴效應(yīng)。

前期相關(guān)研究證實(shí)，魚(yú)腥草水提物能抑制腫瘤壞死因子α(TNF-α)的分泌[14]；黃芩素和黃芩苷可通過(guò)干擾花生四烯酸代謝發(fā)揮抗炎作用，且黃芩素能抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌[15-16]；板藍(lán)根500、700 mL/L乙醇提取物在細(xì)胞中能夠抑制脂多糖(LPS)所誘導(dǎo)產(chǎn)生的TNF-α[17]；連翹的乙酸乙酯、正丁醇、乙醇提取物能抑制TNF-α、IL-1β、 IL-6的分泌[18]；金銀花中的酚酸類物質(zhì)在細(xì)胞中能抑制LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO、TNF-α和 IL-6[19]。魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液由魚(yú)腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹和金銀花炮制后制成，而組成制劑的每一味中藥是其發(fā)揮作用的重要組成部分，推測(cè)魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液可能是通過(guò)抑制致炎因子的釋放，減少炎性物質(zhì)的滲出，從而發(fā)揮其抗炎作用。

鎮(zhèn)痛研究常采用動(dòng)物模型對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物施加傷害性刺激引起疼痛反應(yīng)，通過(guò)監(jiān)測(cè)動(dòng)物對(duì)疼痛反應(yīng)的程度來(lái)評(píng)價(jià)藥效。醋酸扭體試驗(yàn)常用來(lái)研究外周鎮(zhèn)痛藥物的鎮(zhèn)痛效果[20]，試驗(yàn)結(jié)果表明，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液高、中劑量均能顯著減少小鼠的扭體次數(shù)，抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)。醋酸腹腔注射能夠間接誘導(dǎo)五羥色胺、組胺、前列腺素和緩釋肽的釋放，刺激傷害感受器[21]，從而產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，這種急性發(fā)作的疼痛被認(rèn)為是非選擇性鎮(zhèn)痛模型。醋酸誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的這些內(nèi)源性物質(zhì)與疼痛的產(chǎn)生存在緊密聯(lián)系，通過(guò)對(duì)這些物質(zhì)的抑制可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果。研究表明，黃芩素和黃芩苷能抑制前列腺素的分泌[15]；板藍(lán)根700 mL/L乙醇提取物能夠抑制LPS所誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的前列腺素[17]。因此，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液的鎮(zhèn)痛作用可能是通過(guò)抑制前列腺素產(chǎn)生，使致痛因子的釋放減少，從而阻斷了傷害性刺激。

綜上所述，魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且與劑量成正相關(guān)，這為魚(yú)腥草芩藍(lán)口服液的臨床應(yīng)用提供了藥效依據(jù)，而該制劑的抗炎、鎮(zhèn)痛作用的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。