鄭杰 宋來君

(1新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院神經外科，河南 新鄉(xiāng) 453000；2鄭州大學第一附屬醫(yī)院神經外科，河南 鄭州 450052)

大量研究發(fā)現，基因異常與腫瘤的發(fā)生關系密切，細胞異倍體的形成及染色體不穩(wěn)定由中心體的異常擴增導致，進一步導致癌基因激活或抑癌基因失活，是腫瘤發(fā)生的重要發(fā)病機制之一。在癌基因激活或抑癌基因失活時，其產物可使細胞無限制分裂。絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine threonine kinase, STK)15是Aurora激酶家族的重要成員，這種酶的擴增和過表達能誘導中心體異常并通過引起染色體不穩(wěn)定在腫瘤發(fā)生過程中起作用；有大量實驗證據[1-3]表明，這種酶在多種腫瘤中存在過表達，與細胞中心體的異常擴增及惡性轉化密切相關，且過表達與腫瘤的某些生物學行為關聯。該研究使用免疫組化技術，目的是進一步探討人腦星形細胞瘤中STK15蛋白的表達情況，分析其在人腦星形細胞瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及與病理分級關系等，為基礎臨床診治提供基本理論依據，同時揭示上述蛋白異常表達情況與腫瘤惡性分級程度之間的關系。

材料與方法

一、一般資料及分組

1.腫瘤組：系新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院神經外科 2010年1月至2017年1月住院手術的人腦星形細胞瘤患者60例。其中，女24例，男36例；年齡15～70歲，平均37.5歲。按Kernohan四級分類法又分為低級別亞組(Ⅰ、Ⅱ級，20例)、中級別亞組(Ⅲ級，19例)和高級別亞組(Ⅳ級，21例)。所有患者術后病理切片均經資深病理專家認定確診。

2.對照組：系同期本院收治的顱腦損傷且行內減壓切除術的10例患者。其中，女3例，男7例；年齡3～65歲，平均21.5歲。所有患者切除腦組織經切片檢查為正常腦組織。

二、方法

1.STK15表達檢測：分別取兩組術后切除腦組織標本，采用SP免疫組化法進行STK15表達的檢測，檢測過程嚴格按試劑盒操作步驟進行。兔抗人STK15 多克隆一抗及SP免疫組化試劑盒均為北京中杉金橋生物技術有限公司提供。STK15選取已知陽性乳腺癌切片作為陽性對照；PBS(phosphate buffer saline)代替一抗作空白對照。STK15陽性反應部位以細胞核為主，亦同時有胞漿著色的細胞。以細胞核出現明顯棕黃-棕褐色顆粒為陽性細胞，而胞漿出現棕黃色為非特異性染色。隨機選擇5個高倍視野(400倍)計數陽性細胞數，至少計數1 000個細胞。參照Fromowitz方法，在高倍鏡下對細胞內反應如下評分：①無著色為0，淡黃色為1，棕黃色為2，棕褐色為3；②陽性范圍：<5%為0，5%～25%為1，26%～50%為2，51%～75%為3，>75%為4。兩項結果相加記為標記指數(label index,LI)，并通過LI判斷表達強度和表達陽性率。LI<2為陰性(-)，2～3為弱陽性(+)，4～5為中度陽性(++)，6～7為強陽性(+++)。弱陽性例數、中度陽性例數和強陽性例數之和作為陽性總數。

2.統計學方法：采用SPSS 13.0統計軟件進行數據處理。統計方法采用卡方檢驗、四格表確切概率法及Spearman等級相關分析。P<0.05表示差異有統計學意義。

結 果

一、對照組和腫瘤組STK15表達的比較

對照組正常腦組織中STK15陰性表達(見圖1A)，而腫瘤組腦組織標本中STK15不同強度的陽性表達(見圖1B～D)，且STK15陽性表達率為55%。

二、腫瘤組患者不同病理級別亞組STK15表達的比較

腫瘤組低級別亞組的STK15表達陽性率為10%，中級別亞組為52.6%，高級別亞組為100%，三亞組間STK15表達陽性率的差異均有統計學意義(P<0.01，表1)。

三、腫瘤組患者STK15的表達強度與星形細胞瘤病理分級程度的關系

11Spearman等級相關分析顯示，STK15的表達強度與星形細胞瘤病理分級程度的呈正相關(r=1.000,P<0.05)。

圖1 STK15在正常腦組織及腫瘤組表達 (SP, ×400)

Fig 1 Expression of STK15 in normal brain tissues and tumor tissues (SP, ×400)

A: Expression of STK15 was negative in the control group; B: Expression of STK15 was weakly positive in tumor group; C: Expression of STK15 was moderately positive in tumor group; D: Expression of STK15 was strongly positive in tumor group.

表1 腫瘤組患者STK15 的強度與星形細胞瘤病理分級程度的關系(n, %)

Tab 1 The relationship between the intensity of STK15 and the pathological grades of astrocytomas in tumor patients (n, %)

Group-++++++TotalPositive rate Low grade subgroup181102010.0 Middle grade subgroup92441952.6a High grade subgroup057921100b Total27812136055.0

aP<0.01, middle grade subgroupvslow grade subgroup;bP<0.01, high grade subgroupvslow grade subgroup.

討 論

STK15是一種與中心體異常密切相關的癌基因；該基因定位于20q13.2，cDNA全長約2.2 kb，有9個外顯子，編碼一種分子量為46 kDa、403個氨基酸組成的激酶。它在細胞分裂過程中對中心體的成熟、紡錘體的建立及染色體的正常分離起著重要的調控作用[4]。STK15基因已被證實是一種癌基因[2]，該基因能誘導中心體復制-分離異常，引起中心體數目異常(增多)，導致染色體不穩(wěn)定和哺乳類細胞非整倍體及細胞轉化，但是它與G1/S期調控無明顯關系[5]。在許多腫瘤中(如乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌等)均報道證實STK15基因的過表達情況。正如下述：Miyoshi等[2]在62%的乳腺癌中檢測到STK15基因mRNA高表達，Li等[6]在58%的胰腺癌病例中發(fā)現STK15蛋白表達上調。目前已有對STK15基因在許多種腫瘤中的表達和臨床意義的研究[7-12]，結果都進一步證實該基因在腫瘤中的表達普遍高于癌旁正常組織，但腫瘤臨床病理因素與其表達之間的聯系并不一致。本研究結果表明，STK15基因在正常腦組織中表達陰性，而在人腦星形細胞瘤患者中STK15的表達強度與星形細胞瘤病理分級程度的呈正相關，其表達陽性率隨病理分級(惡性程度)的升高而增加，表明STK15基因的高表達可能是導致腦星形細胞瘤發(fā)生、發(fā)展的多個影響因素之一。

腦星形細胞瘤的預后與反映腫瘤惡性程度的病理分級有一定關系；而本研究顯示，STK15的過表達程度與腫瘤分級明顯相關，分級越高，STK15過表達越明顯。這提示STK15可能成為諸多反映腦星形細胞瘤惡性程度的分子生物學指標之一，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能起重要作用，有可能成為反映腦星形細胞瘤惡性程度新的標記物；可能成為腦星形細胞瘤治療的新靶點，可以開發(fā)以此分子為靶點的藥物。