肖蒙蒙

摘 要：本實(shí)驗(yàn)研究制霉素搽劑質(zhì)量控制與穩(wěn)定性。方法：采用安捷倫十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（218mm×4.6mm，5μm），醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（40∶60），檢測(cè)波長為306nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。制霉素在50～250μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。制霉素平均回收率為99.3%。結(jié)論：本測(cè)定方法簡便、準(zhǔn)確。30℃的恒溫箱內(nèi)制霉素搽劑在第二個(gè)月就開始分解。冷處保存放置3個(gè)月后，制霉素搽劑未發(fā)生明顯變化，表明制霉素搽劑可以冷處保存3個(gè)月。

關(guān)鍵詞：制霉素；質(zhì)量；穩(wěn)定性

制霉素為黃色或棕黃色粉末；有類似谷物氣味，有引濕性，對(duì)光，空氣，酸和堿均不穩(wěn)定。制霉素主要用于內(nèi)服治療消化道真菌感染或外用于表面皮膚真菌感染，如新型隱球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌、莢膜組織漿胞菌、皮炎芽生菌及皮膚癬菌等[1-5]。搽劑最早出現(xiàn)于我國現(xiàn)存最早的出土于馬王堆漢墓的古醫(yī)方《五十二病方》，在我國有著悠久的歷史。本實(shí)驗(yàn)研究制霉素搽劑質(zhì)量控制與穩(wěn)定性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：長城獅鼎SHB-III型臺(tái)式循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；XH-2008DE智能溫控雙頻超聲波萃取儀（北京祥鵠科技發(fā)展有限公司）；600220液相保護(hù)柱（天津琛航科苑科技發(fā)展有限公司）；GX-2050高溫循環(huán)器（上海市百典儀器廠）；JY-M-800S恒溫恒濕試驗(yàn)箱價(jià)格（上海巨怡環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；電子分析天平（上海魅宇儀器設(shè)備有限公司）；GI-3000-12二元高壓梯度液相色譜儀（通用（深圳）儀器有限公司）；GENESYS180紫外可見分光光度計(jì)（上海力晶科學(xué)儀器有限公司）；蘭博OV3000大容量柱溫箱（天津市蘭博實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 色譜柱：安捷倫十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（218mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：制霉素 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇（北京天安聯(lián)合科技有限公司）、冰醋酸（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）磷酸氫二鈉（北京天安聯(lián)合科技有限公司）、磷酸（北京天安聯(lián)合科技有限公司）、醋酸鈉（北京天安聯(lián)合科技有限公司）、乙腈（北京天安聯(lián)合科技有限公司）。

2 穩(wěn)定性考察方法

將本品置于30℃的恒溫箱內(nèi)，分別于第1、2、3、4、5、6個(gè)月末取樣并測(cè)定，考察外觀、生物限度、含量的測(cè)定結(jié)果做比較。另取樣品在冷處保存，分別于第1、2、3、4、5、6個(gè)月末取樣并測(cè)定，考察外觀、生物限度、含量的測(cè)定結(jié)果做比較。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為黃色或淡棕色黏稠性混懸液。符合《中國藥典》2015年版對(duì)搽劑的要求。

3.2 含量測(cè)定

3.2.1 流動(dòng)相的選擇。分別考察0.01mol/L磷酸氫二鈉-磷酸緩沖液（p H=2.2）-水（80：20）；醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-甲醇（40∶60）；醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（40∶60）；醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（50∶50）；乙腈-0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）磷酸（體積比25：75）；醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（40∶60）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（40∶60）；為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（40∶60）為流動(dòng)相。依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[6]。流動(dòng)相：醋酸鈉緩沖液（PH4.4）-乙腈（40∶60），檢測(cè)波長：306nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按制霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取制霉素對(duì)照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含100μg的溶液，即得。

3.2.3 供試品溶液的制備

取適量供試品精密稱定，置具小燒杯中，精密加入甲醇10mL，用甲醇轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中并稀釋定容，超聲處理5分鐘，放冷，濾過。取續(xù)濾液，即得。

3.2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取除制霉素，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照3.2.4項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在制霉素出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

3.2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取制霉素對(duì)照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為100μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。

3.2.6 對(duì)照品的線性考察

精密稱取制霉素對(duì)照品50mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照3.2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，制霉素在50～250μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的制霉素搽劑樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.81%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

3.2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的制霉素對(duì)照品，上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.5%，RSD=0.76%，結(jié)果表明樣品加樣回收率良好。

3.3 微生物限度檢查

按照《中國藥典》2015年版附錄所載方法測(cè)定，結(jié)果符合規(guī)定。

4 討論

此測(cè)定方法可用于制霉素搽劑中制霉素的含量測(cè)定。制霉素有引濕性，對(duì)光，空氣，酸和堿均不穩(wěn)定。所以本實(shí)驗(yàn)對(duì)制霉素搽劑質(zhì)量控制與穩(wěn)定性進(jìn)行考察。30℃的恒溫箱內(nèi)制霉素搽劑在第二個(gè)月就開始分解。冷處保存放置3個(gè)月后，制霉素搽劑未發(fā)生明顯變化。經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，外觀、微生物限度、含量均穩(wěn)定，表明制霉素搽劑可以冷處保存3個(gè)月。

參考文獻(xiàn)

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