吳文波，王超，牛德旺，胡超勝

(安陽(yáng)地區(qū)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 安陽(yáng) 455000)

帕金森病的發(fā)生主要考慮與遺傳、環(huán)境等因素有關(guān)，疾病的發(fā)生發(fā)展可以導(dǎo)致患者神經(jīng)系統(tǒng)功能退化等臨床癥狀的發(fā)生[1]。流行病學(xué)研究顯示，帕金森病的發(fā)病率可達(dá)223～445/10萬(wàn)人左右，病情進(jìn)展較為隱匿，臨床預(yù)后較差[2，3]。在探討帕金森病的發(fā)病機(jī)制的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生物學(xué)因子活信號(hào)通路相關(guān)分子的改變，能夠通過(guò)影響到神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡，增加神經(jīng)元細(xì)胞的氧化應(yīng)激性損傷，促進(jìn)患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能退化。磷脂酰肌醇 3 激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin，p-mTOR)等，是 PI3K-AKT 信號(hào)通路的重要中間蛋白，其表達(dá)濃度的改變能夠提高局部神經(jīng)元細(xì)胞膜的炎癥因子的浸潤(rùn)，促進(jìn)自身免疫性損傷，增加患者神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的β-淀粉樣蛋白的沉積，促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡及退行性改變[4，5]。 部分研究揭示了 PI3K、p-mTOR 蛋白在帕金森病患者體內(nèi)的異常表達(dá)情況，但缺乏對(duì)于其與患者生存預(yù)后或者診斷學(xué)價(jià)值的分析。為了進(jìn)一步評(píng)估PI3K、p-mTOR蛋白與帕金森病的關(guān)系，本次研究選取2014年1月至2017年6月來(lái)我院診斷為帕金森病的160例，探討了相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)，并分析了其診斷學(xué)靈敏度或者特異度等指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2017年6月在河南省安陽(yáng)地區(qū)醫(yī)院診斷為帕金森病的160例患者作為PD組，同期160例健康體檢者作為對(duì)照組，PD組男性94例，女性66例；年齡 54～86歲，平均年齡(64.46±12.12)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合帕金森病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病導(dǎo)致的癡呆患者，不伴有心、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重障礙，患者或家屬對(duì)本次研究知情，并簽署知情同意書，一般資料和病理資料完整；治療后按照并按照帕金森評(píng)分表(UPDRS)分為預(yù)后良好組（UPDRS＜35）和預(yù)后不良組（UPDRS≥35）。對(duì)照組男性91例，女性69例，年齡 55～82歲，平均年齡(61.76±10.13)歲，納入標(biāo)準(zhǔn)：自愿參與本次研究，并簽署知情同意書，一般資料完整。兩組受檢者年齡、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法 無(wú)菌采集空腹靜脈血各5ml，低溫離心(離心條件為3000rpm)，吸取血清，置－20℃凍存?zhèn)溆?。采用ELISA Kit，嚴(yán)格按試劑盒步驟檢測(cè)所有受試者血清PI3K、p－mTOR蛋白質(zhì)量濃度，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：血清 PI3K＞5．5ng/ml，p－mTOR＞3．0ng/ml。 敏感性=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%，特異性=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16．0，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P值＜0．05或P＜0．01表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 帕金森病患者與健康人群血清PI3K、p－mTOR蛋白水平比較 與對(duì)照組相比，PD患者組血清中PI3K、p－mTOR蛋白水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。 見表 1。

表1 帕金森病患者與健康人群血清PI3K、p-mTOR蛋白水平比較

2．2 帕金森病患者不同預(yù)后人群血清 PI3K、pmTOR蛋白水平比較 與預(yù)后良好人群相比，帕金森患者預(yù)后不良組血清中PI3K、p－mTOR蛋白水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表2。

2．3 帕金森病患者不同預(yù)后人群血清 PI3K、p－mTOR蛋白水平與評(píng)分相關(guān)性分析 PI3K、pmTOR蛋白水平與帕金森病預(yù)后評(píng)分相關(guān)性分析結(jié)果顯示二者與UPDRS評(píng)分之間均呈正相關(guān) (r=0．798，P=0．025；r=0．659，P=0．031)。 見表 3。

表2 帕金森病患者不同預(yù)后人群血清PI3K、p-mTOR蛋白水平比較

表3 三帕金森病患者不同預(yù)后人群血清PI3K、p-mTOR蛋白水平與評(píng)分相關(guān)性分析

2．4 血清PI3K、p－mTOR蛋白水平對(duì)帕金森早期診斷和預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性和特異性 以血清PI3K＞5．5ng/ml，p－mTOR＞3．0ng/ml作為陽(yáng)性檢測(cè)線評(píng)價(jià)血清PI3K、p－mTOR蛋白診斷帕金森的準(zhǔn)確性和特異性，PI3K單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)帕金森的敏感度為 74．38%， 特異性為 88．75%，p－mTOR 單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)帕金森的敏感度為82．5%，特異性為84．38%，聯(lián)合各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)準(zhǔn)確度高于任一單項(xiàng)指標(biāo)。見表4。

表4 血清PI3K、p-mTOR蛋白水平對(duì)帕金森早期診斷的準(zhǔn)確性和特異性

3 討論

帕金森病的發(fā)生能夠?qū)е禄颊哒J(rèn)知、空間定向或者記憶等功能的障礙，在合并有高血壓或者糖尿病等基礎(chǔ)性疾病的人群中，帕金森病的發(fā)病率可進(jìn)一步上升[6]。一項(xiàng)包含了114例樣本量的帕金森病的臨床治療隨訪研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)階段臨床上帕金森病的病情控制率較低，治療后的神經(jīng)系統(tǒng)的認(rèn)知等功能障礙的緩解率仍然可達(dá)15%以上[7]，整體治療效果不佳。本次通過(guò)對(duì)于帕金森病發(fā)病過(guò)程中相關(guān)信號(hào)通路蛋白的研究，可以為臨床上帕金森病的病情隨訪、生物學(xué)治療或者免疫治療等提供理論依據(jù)。

PI3K/AKT信號(hào)通路是廣泛存在的效應(yīng)通路，其能夠參與到細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、壞死或者細(xì)胞器的損傷等病理過(guò)程中，PI3K/AKT能夠參與到惡性腫瘤的發(fā)生、炎癥反應(yīng)的進(jìn)展或者部分自身免疫性疾病的發(fā)生過(guò)程中。PI3K/AKT激活過(guò)程中對(duì)于下游p－mTOR蛋白的上調(diào)作用，能夠在影響到神經(jīng)元生長(zhǎng)因子的釋放，增加中樞神經(jīng)元細(xì)胞的異常蛋白的沉積，影響到多巴胺能神經(jīng)元的功能[8]。同時(shí)近年來(lái)相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究也顯示，p－mTOR蛋白或者PI3K蛋白的高表達(dá)能夠影響到神經(jīng)元細(xì)胞的自噬，促進(jìn)線粒體氧化，并降低破碎細(xì)胞器的清除，增加毒性蛋白的表達(dá)濃度，特別是p-mTOR蛋白的異常表達(dá)能夠增加海馬神經(jīng)元的凋亡的風(fēng)險(xiǎn)[9]。部分研究揭示了PI3K/AKT信號(hào)通路蛋白的表達(dá)與帕金森病的關(guān)系，認(rèn)為高表達(dá)的相關(guān)信號(hào)通路蛋白能夠?qū)е禄颊哒J(rèn)知功能或者記憶能力的下降，并認(rèn)為高表達(dá)的相關(guān)蛋白是影響到疾病治療敏感性的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在帕金森病患者血清中存在明顯的相關(guān)指標(biāo)的高表達(dá)，其中PI3K、p-mTOR蛋白的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示其可能均參與到了帕金森病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，二者的高表達(dá)能夠通過(guò)影響到下列幾個(gè)方面的機(jī)制，促進(jìn)患者認(rèn)知或者記憶能力的喪失[10，11]：⑴PI3K對(duì)于β-卷曲蛋白的促沉積作用，能夠?qū)е禄颊呱窠?jīng)元細(xì)胞的淀粉樣變性，增加患者神經(jīng)元細(xì)胞電沖動(dòng)傳導(dǎo)的異常；⑵p-mTOR蛋白能夠增加單核細(xì)胞或者巨噬細(xì)胞等對(duì)于神經(jīng)元細(xì)胞的浸潤(rùn)，促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞軸突末梢神經(jīng)遞質(zhì)的釋放異常，增加以囊泡為主的神經(jīng)遞質(zhì)的異常合成。郭旭堂等[12]研究者探討了63例樣本量的帕金森病患者血清學(xué)蛋白譜的異常表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，PI3K、p-mTOR蛋白的陽(yáng)性率表達(dá)率可平均上升25%以上，同時(shí)治療敏感性較差、治療后病情進(jìn)展率較高的患者中，相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)可進(jìn)一步上升。UPDRS評(píng)分能夠通過(guò)綜合性評(píng)估患者的影像學(xué)檢查、臨床癥狀、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能評(píng)分等，進(jìn)而評(píng)估患者的生存預(yù)后，本次研究發(fā)現(xiàn)在臨床預(yù)后較差的患者中，特別是在UPDRS評(píng)分較高的患者中，PI3K、p-mTOR蛋白的表達(dá)上升趨勢(shì)較為明顯，這可能與相關(guān)蛋白的異常表達(dá)增加患者下列幾個(gè)方面的臨床癥狀的加重有關(guān)：⑴PI3K的上升增加了神經(jīng)元細(xì)胞的壓力性應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，降低了神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)因子a或者生長(zhǎng)因子的釋放，導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞凋亡增多、再生減少，導(dǎo)致患者記憶能力、語(yǔ)言能力的下降[13]；⑵p-mTOR蛋白對(duì)于BCL-2等凋亡基因的激活作用，能夠增加紋狀體致密部神經(jīng)元細(xì)胞的損傷，影響到超氧化物歧化酶的活性[14，15]。在診斷學(xué)價(jià)值方面，可以發(fā)現(xiàn)的聯(lián)合PI3K、p-mTOR蛋白進(jìn)行早期帕金森病的診斷具有重要的價(jià)值，聯(lián)合診斷的價(jià)值較單獨(dú)指標(biāo)指標(biāo)可有明顯的準(zhǔn)確性的上升。

綜上所述，PI3K、p-mTOR蛋白在帕金森病患者血清中存在明顯的高表達(dá)，相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)能夠在疾病的臨床預(yù)后評(píng)估或者診斷方面發(fā)揮一定的參考價(jià)值。