沈俊逸，趙智明，劉春麗，壯雨雯，徐文俊，蔡 輝

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，江蘇 南京 210002

腦梗死是目前繼癌癥和心血管疾病之后危害人類(lèi)生命健康的第三大疾病。每年全球約有1 500萬(wàn)人發(fā)病，死亡率高達(dá)17%～35%，而存活下來(lái)的患者中3%～6%遺留殘疾［1-3］。糖尿病致代謝紊亂是引發(fā)腦梗死的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素［4-7］。正常機(jī)體如果長(zhǎng)期處在高血糖環(huán)境中脂類(lèi)的代謝過(guò)程會(huì)發(fā)生紊亂、異常，進(jìn)而引起蛋白質(zhì)過(guò)度糖基化。而蛋白質(zhì)的過(guò)度糖基化會(huì)使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、溶解性、配位結(jié)合等理化性質(zhì)發(fā)生改變。這些過(guò)度糖基化的蛋白終產(chǎn)物不能在體內(nèi)有效代謝降解，沉積于血管內(nèi)壁，久之，加速了血管病變［8-11］。中藥復(fù)元醒腦湯在治療糖尿病腦梗死中顯示出了良好的治療效果，本研究通過(guò)糖尿病腦梗死大鼠模型觀察復(fù)元醒腦湯對(duì)其血糖、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的調(diào)節(jié)作用以及對(duì)神經(jīng)缺損行為的影響，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1動(dòng)物與試劑健康雄性SD大鼠150只，體質(zhì)量(250±25)g，購(gòu)自上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證：SCXK(滬)2011-009；2，3，5- 氯化三苯基四氮唑(TTC)購(gòu)于正大青春寶藥業(yè)；水合氯醛購(gòu)于上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司；鏈脲佐菌素(STZ)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司。

1.2動(dòng)物分組將實(shí)驗(yàn)大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)均分為正常組、假手術(shù)組、模型組、西藥治療組、中藥治療組，每組30只。

1.3模型制備腹腔注射STZ 50 mg/kg后采用高能量高脂肪食物飼養(yǎng)2周復(fù)制糖尿病大鼠模型。

1.4腦梗死模型制備在STZ致糖尿病模型的基礎(chǔ)上，采用線(xiàn)栓法制備糖尿病腦梗死動(dòng)物模型［11］。

1.5灌胃給藥中藥治療組大鼠灌胃復(fù)元醒腦湯［人參(單煎)10 g，三七 10 g，石菖蒲 12 g，水蛭10 g，益母草 30 g，生南星 15 g，制大黃(后下)9 g，濃度 388 g/L］10.4 g/kg(體質(zhì)量)/d，2 次 /d，連續(xù)14天。西藥治療組灌胃二甲雙胍(君力達(dá)制藥有限公司，批號(hào)：H20058567，規(guī)格：0.5g×12 ?！?板)27 mg/kg(體質(zhì)量)，2 次 /d；尼莫地平(中美上海施貴寶制藥有限公司，批號(hào)：11080056，規(guī)格：20mg×12片×2板)2.16 mg/kg(體質(zhì)量)，2次 /d，連續(xù) 14天。模型組、假手術(shù)組灌胃等容量生理鹽水。

1.6血糖、膽固醇和甘油三酯檢測(cè)注射STZ 1周后大鼠尾靜脈采血測(cè)血糖值。腦梗死造模前后測(cè)定各組大鼠血脂水平，應(yīng)用氧化酶法測(cè)定大鼠血清總膽固醇濃度；使用甘油磷酸氧化酶法測(cè)定大鼠血清中TG的濃度。

1.7神經(jīng)缺損行為體征評(píng)價(jià)造模成功后大鼠完全清醒，術(shù)后3小時(shí)及7天根據(jù)Bederson神經(jīng)缺損行為體征評(píng)分法對(duì)大鼠神經(jīng)缺損行為體征進(jìn)行綜合等級(jí)評(píng)分。將大鼠提尾懸空1米，觀察前肢屈曲情況，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)(0分)：無(wú)明顯神經(jīng)缺損癥狀；Ⅰ級(jí)(1分)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦梗死對(duì)側(cè)前肢回收屈曲內(nèi)收，同時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同側(cè)前肢向地面伸展；Ⅱ級(jí)(2分)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Ⅰ級(jí)體征+實(shí)驗(yàn)動(dòng)物俯臥于桌面時(shí)，從腦梗死側(cè)向?qū)?cè)推動(dòng)大鼠時(shí)阻力降低；Ⅲ級(jí)(3分)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Ⅱ級(jí)體征+實(shí)驗(yàn)大鼠行走時(shí)向腦梗死對(duì)側(cè)肢體旋轉(zhuǎn)(呈追尾狀)，甚至?xí)A倒。分值大于或等于Ⅰ級(jí)時(shí)表明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制作成功。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以(±s)表示，不同組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1大鼠造模生存例數(shù)入組150只大鼠，每組30只，正常組死亡2只。另外120只大鼠在糖尿病造模成功后，在高脂飼料喂養(yǎng)的條件下死亡20只。剩余糖尿病模型大鼠100只分為4組，每組25只。假手術(shù)組2只死亡；模型組10只死亡；西藥治療組9只死亡；中藥治療組7只死亡。因此各實(shí)驗(yàn)組入組數(shù)據(jù)例數(shù)分別為正常對(duì)照組28例，假手術(shù)組23例，模型組15例，西藥治療組16例，中藥治療組18例。

2.2復(fù)元醒腦湯對(duì)糖尿病腦梗死大鼠血糖水平的影響注射STZ 1周后，各組大鼠空腹血糖高于正常組；手術(shù)(線(xiàn)栓)后7天，糖尿病模型(假手術(shù)組、模型組、中藥治療組、西藥治療組)與正常組相比，血糖濃度顯著升高(P＜0.01)；手術(shù)后7天，與模型組相比，中藥治療組和西藥治療組大鼠血糖濃度降低(P＜0.01)，說(shuō)明西藥和中藥均有降低糖尿病模型大鼠血糖的作用，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠手術(shù)前后血糖變化情況(±s) mmol/L

表1 各組大鼠手術(shù)前后血糖變化情況(±s) mmol/L

注：＊＊表示與正常組比較，P＜0.01；##表示與模型組比較，P＜0.01；△表示與術(shù)前比較，P＜0.01

組別 只數(shù) 術(shù)前 術(shù)后7天正常組 28 8.03±1.27 7.71±1.20假手術(shù)組 23 24.60±4.36 28.29±3.65＊＊△模型組 15 24.26±3.53 32.35±4.12＊＊△西藥治療組 16 26.76±5.08 22.13±3.71##＊＊△中藥治療組 18 24.01±4.87 20.72±3.44##＊＊△

2.3復(fù)元醒腦湯對(duì)糖尿病腦梗死大鼠血清TC水平的影響與正常組相比，各組大鼠腦梗死術(shù)前血清中TC濃度提升(P＜0.01)。手術(shù)后7天假手術(shù)組、模型組、西藥治療組大鼠血清TC含量未降低，與模型組相比，中藥治療組TC濃度下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠手術(shù)前后TC變化情況 mmol/L

2.4復(fù)元醒腦湯對(duì)糖尿病腦梗死大鼠血清TG的影響與正常組大鼠相比，各組大鼠腦梗死術(shù)前血清TG濃度提升(P＜0.01)。手術(shù)后7天假手術(shù)組、模型組、西藥治療組大鼠血清中TG未降低，與模型組相比，中藥治療組大鼠血清TG濃度降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠手術(shù)前后TG變化情況 mmol/L

2.5復(fù)元醒腦湯對(duì)糖尿病腦梗死大鼠神經(jīng)缺損行為的影響造模結(jié)束后假手術(shù)組和正常組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分均為0分；模型組、中藥治療組及西藥治療組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)行為學(xué)異常，主要表現(xiàn)為右側(cè)霍納征(上瞼下垂，瞳孔散大)和左側(cè)前肢為主的癱瘓，表現(xiàn)為提尾時(shí)左側(cè)肢體屈曲內(nèi)收緊貼胸壁，行走時(shí)失去正常的狀態(tài)，呈現(xiàn)出左側(cè)轉(zhuǎn)圈，或向左側(cè)傾倒等。各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分均高于正常組、假手術(shù)組，提示腦梗死模型造模成功；灌胃治療7天后中藥治療組與西藥治療組大鼠Bederson評(píng)分降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表 4。

表4 各組大鼠手術(shù)后Bederson評(píng)分比較 分

3 討論

糖尿病并發(fā)腦梗死以其居高不下的致殘率和病死率嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。糖尿病會(huì)增加腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)，糖尿病患者血糖控制受損，腦梗死灶更容易擴(kuò)大，持續(xù)高血糖條件下糖類(lèi)的有氧代謝過(guò)程發(fā)生障礙，生成大量有害物質(zhì)乳酸，造成乳酸性酸中毒，最終誘發(fā)正常細(xì)胞內(nèi)的高滲狀態(tài)，細(xì)胞缺氧，從而加劇缺血腦組織損害［12］。Kwon 等［13］報(bào)道，相比于糖尿病患者，糖尿病腦卒中患者發(fā)病率更高，同時(shí)腦卒中會(huì)引發(fā)認(rèn)知障礙［14］。丁承宗等［15］通過(guò)大量CT分析顯示糖尿病引發(fā)的腦梗死患者中超過(guò)一半伴隨多發(fā)腔梗灶，并累及大腦中動(dòng)脈支配區(qū)。

清代醫(yī)家沈金鰲認(rèn)為“元?dú)馓摓橹酗L(fēng)之根也。”腦梗死的發(fā)病主要以元?dú)馓摀p為本,痰瘀互結(jié)及痰熱生風(fēng)為核心病機(jī)。痰、瘀為元?dú)馓搶?dǎo)致的中間病理產(chǎn)物，貫穿中風(fēng)始終,痰瘀互阻，生熱化風(fēng)，風(fēng)火相煽，乃發(fā)“風(fēng)”。據(jù)此，本研究以補(bǔ)益元?dú)鉃橹?，佐逐瘀化痰、泄熱熄風(fēng)、醒腦開(kāi)竅之法，自擬復(fù)元醒腦湯，方中人參大補(bǔ)元?dú)鉃榫稣钚?，為治本之藥；石菖蒲芳香走竄，功擅豁痰辟穢，開(kāi)竅寧神；膽南星清熱化痰之力強(qiáng)，且能熄風(fēng)定驚，擅祛頑痰、風(fēng)痰；三七化瘀止血，活血定痛；水蛭為化瘀峻品，消癥破結(jié)通經(jīng)。張錫純認(rèn)為本品“破瘀血而不傷新血，專(zhuān)入血分而不損氣分”，以上共為臣藥。大黃苦降，功專(zhuān)通腑瀉下，又具有清熱瀉火，涼血解毒之功，且有逐瘀通經(jīng)之功效，與三七通澀并用，活血止血，導(dǎo)濕熱、瘀熱外出，熱毒下泄，使氣血調(diào)達(dá)，經(jīng)絡(luò)通暢；益母草為血家圣藥，不僅能活血調(diào)經(jīng)，且有利尿消腫，清熱解毒之功，尤善解郁平肝，活血祛風(fēng)，均為佐藥。諸藥合用，方小力專(zhuān)，共奏“復(fù)元醒腦，逐瘀化痰，泄熱熄風(fēng)”之功。

本研究表明復(fù)元醒腦湯對(duì)糖尿病腦梗死大鼠的神經(jīng)缺損有修復(fù)作用。很多學(xué)者認(rèn)為血脂的增高是腦梗死的誘發(fā)因素，但是血脂異常與腦梗死之間的關(guān)系尚未闡明。高TC和TG易誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化引起血栓形成，進(jìn)而引起腦梗死。高血脂會(huì)引起多種凝血因子升高，增加血小板凝集，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)會(huì)引發(fā)血栓形成［16-18］。STZ誘導(dǎo)聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)的糖尿病腦梗死大鼠血脂水平較高［19］，降低中藥治療組大鼠血清TG和TC低于模型組，提示復(fù)元醒腦湯對(duì)血脂有較好的干預(yù)作用，與模型組相比復(fù)元醒腦湯能夠降低糖尿病腦梗死大鼠的血糖水平。