李文云
(山東步長(zhǎng)神州制藥有限公司,山東菏澤274039)
明膠空心膠囊是由明膠加輔料制成的空心硬膠囊,膠囊用明膠為動(dòng)物的皮、骨、腱與韌帶中膠原蛋白經(jīng)適度水解后(酸法、堿法、酸堿混合法或酶法)純化得到的制品,或?yàn)樯鲜霾煌髂z制品的混合物。2012年央視《每周質(zhì)量報(bào)告》報(bào)道,由廢舊皮革等制成的工業(yè)明膠膠囊流入修正藥業(yè)、海外藥業(yè)等九大藥企,樣品被檢出鉻含量嚴(yán)重超標(biāo),最高鉻含量超標(biāo)達(dá)90余倍,涉及13個(gè)鉻超標(biāo)產(chǎn)品。鉻不僅會(huì)對(duì)肝臟、腎臟等器官產(chǎn)生危害,還會(huì)對(duì)血液系統(tǒng)及細(xì)胞造成破壞,導(dǎo)致骨骼方面的疾病,對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)也有影響,并有致癌隱患,甚至還會(huì)影響人的遺傳基因DNA。因此,國(guó)家食藥監(jiān)局強(qiáng)調(diào)對(duì)于明膠空心膠囊鉻的檢驗(yàn),要求企業(yè)必須具備明膠空心膠囊鉻檢驗(yàn)的能力,不能委托檢驗(yàn)。企業(yè)必須保證使用的明膠空心膠囊的鉻含量合格,如所抽樣品鉻含量檢測(cè)不合格,將對(duì)其立案查處。
我司產(chǎn)品輔料均含有明膠空心膠囊,檢驗(yàn)產(chǎn)品所用明膠空心膠囊中的鉻含量成為企業(yè)的一項(xiàng)重大任務(wù)。我司在鉻檢驗(yàn)過(guò)程中,通過(guò)多次試驗(yàn),研究出了快速、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單的樣品消解及鉻含量檢測(cè)方法。
FA2004N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);WX-8000微波消解儀(上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司);DKQ-1000智能控溫電加熱器(上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司);240ZAA安捷倫石墨爐原子吸收儀(安捷倫公司)。
硝酸(優(yōu)級(jí)純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。
試驗(yàn)用燒杯、容量瓶、滴定管、刻度吸管先用鹽酸溶液(濃鹽酸∶水=1∶1)浸泡1 h,后用硝酸溶液(濃硝酸∶水=1∶1)浸泡1 h,最后用超純水沖洗干凈。
原子吸收儀上的進(jìn)樣杯先放入盛有10%硝酸的燒杯中超聲30 min,后用超純水沖洗干凈。
消解罐使用前先用20%的硝酸浸泡24 h,后用超純水清洗干凈、晾干,備用。
精密稱(chēng)取0.3 g明膠空心膠囊(康婦炎膠囊、消乳散結(jié)膠囊、宮瘤消膠囊)分別放入0~7號(hào)消解罐內(nèi),用刻度吸管加入硝酸8 mL。另外,8、9號(hào)消解罐內(nèi)直接加硝酸8 mL,作為樣品空白。
把0~9號(hào)消解罐放入100℃水浴鍋中預(yù)消解30 min。預(yù)消解后取出,0號(hào)消解罐用帶有溫度和壓力傳感器的蓋子蓋好,安裝到框架中,放入消解儀內(nèi)的0號(hào)位置,并插入溫度探針和用于擰緊壓力傳感器導(dǎo)氣管的接頭。1~9號(hào)消解罐按上述步驟對(duì)應(yīng)裝入消解儀內(nèi)。
微波消解程序設(shè)置如表1所示。
對(duì)樣品進(jìn)行消解,消解結(jié)束后,確認(rèn)反應(yīng)罐體降溫到安全溫度(≤80℃)后將安全門(mén)打開(kāi),將標(biāo)準(zhǔn)罐(1~9號(hào)消解罐)移至通風(fēng)櫥內(nèi);在消解爐腔內(nèi)將控制罐(0號(hào)消解罐)的導(dǎo)氣管接頭擰松,等壓力降到零,再將控制罐移至通風(fēng)櫥內(nèi)。從框架中取出套筒和內(nèi)罐,打開(kāi)消解罐罐蓋,用少量的超純水將消解罐罐蓋上殘留的樣品洗入消解罐內(nèi),將消解罐放入智能控溫電加熱器(設(shè)置溫度150℃)上趕酸,直至紅棕色蒸汽揮盡并剩余樣品1~2 mL時(shí),用2%的硝酸轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,并用2%的硝酸定容,混勻,即得供試品溶液。
精密量取鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL,加入2%的硝酸溶液稀釋成50 mL,搖勻,再精密量取8~100 mL至容量瓶中,用2%的硝酸溶液稀釋?zhuān)靹?,即得含鉻80 ng/mL的對(duì)照品溶液。
開(kāi)機(jī)順序:打開(kāi)高純氬氣瓶的開(kāi)關(guān),打開(kāi)冷卻系統(tǒng)的開(kāi)關(guān)(溫度要求,夏天25℃、冬天20℃),打開(kāi)石墨爐儀器的開(kāi)關(guān),打開(kāi)計(jì)算機(jī)上的石墨爐軟件,調(diào)節(jié)氬氣壓力至0.2 MPa,按要求安上鉻元素?zé)簟?/p>
將自動(dòng)進(jìn)樣器取下,把石墨爐爐體搬出,優(yōu)化元素?zé)簦{(diào)節(jié)元素?zé)舻奈恢?,使光通量達(dá)到最大;把石墨爐爐體放回原來(lái)的位置,調(diào)節(jié)爐體位置,保證通過(guò)的光最多;把自動(dòng)進(jìn)樣器放回原位置,調(diào)節(jié)自動(dòng)進(jìn)樣器,保證進(jìn)樣針能準(zhǔn)確到達(dá)樣品杯的中心和石墨管的中心位置。
使用石墨爐原子吸收儀測(cè)定明膠空心膠囊中的鉻含量時(shí),打開(kāi)石墨爐工作站軟件,設(shè)定下列相應(yīng)參數(shù):
2.5.1 類(lèi)型/模式
類(lèi)型:Zeeman;元素:Cr;進(jìn)樣模式:自動(dòng)配置。
2.5.2 測(cè)量
測(cè)量模式:峰高;校正模式:濃度;讀數(shù)次數(shù):標(biāo)樣3次、樣品3次。
2.5.3 光學(xué)參數(shù)
燈電流:7.0 mA;波長(zhǎng):357.9 nm;狹縫:0.2 nm;扣背景:扣背景開(kāi)。
2.5.4 石墨爐
石墨爐軟件程序升溫過(guò)程參數(shù)如表2所示。
2.5.5 標(biāo)樣
各標(biāo)樣濃度如表3所示。
有效下線(xiàn)濃度:0.000 0μg/L;有效上線(xiàn)濃度:40.000 0 μg/L;濃度小數(shù)位:2。
2.5.6 校正
曲線(xiàn)擬合法:新合理;曲線(xiàn)重校頻率:20;重置斜率頻率:20;重置斜率標(biāo)樣點(diǎn):2。
表1 微波消解程序設(shè)置
表2 石墨爐軟件程序升溫過(guò)程參數(shù)
表3 各標(biāo)樣濃度
2.5.7 進(jìn)樣器
進(jìn)樣器程序參數(shù)如表4所示。
母液位置:51;制備液位置:52;母液濃度:80.000 0μg/L。
在母液位置51放80μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)樣杯,在制備液位置52放2%硝酸的進(jìn)樣杯,樣品杯(1~10)位置依次放0~9號(hào)消解罐內(nèi)的樣品。
點(diǎn)開(kāi)軟件上的石墨爐實(shí)用工具,對(duì)石墨爐高溫加熱進(jìn)行老化兩次,點(diǎn)“開(kāi)始”圖標(biāo)開(kāi)始進(jìn)樣。
明膠空心膠囊的鉻結(jié)果分析如表5所示。
表4 進(jìn)樣器程序參數(shù)
表5 明膠空心膠囊的鉻結(jié)果分析
根據(jù)2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定,藥用膠囊中鉻的含量不得超過(guò)百萬(wàn)分之二,即2 mg/kg。從表5可以看出,試驗(yàn)所用3個(gè)品種的明膠空心膠囊中的鉻含量均低于2 mg/kg,符合國(guó)家規(guī)定。
本文通過(guò)以上微波消解程序的設(shè)置,樣品消解時(shí)間大約在1 h左右,樣品不需要浸泡過(guò)夜,大幅節(jié)約了樣品處理所需的時(shí)間,同時(shí)減少了環(huán)境污染。此外,通過(guò)對(duì)石墨爐原子吸收儀硬件的優(yōu)化和軟件進(jìn)樣程序的研究,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r=1.000 0,表明鉻濃度在0~80 ng/mL之間具有良好的線(xiàn)性關(guān)系,能準(zhǔn)確檢測(cè)處理好的樣品鉻含量,得到相對(duì)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。該測(cè)量方法操作性強(qiáng),適用于明膠空心膠囊鉻元素的定量檢測(cè)。