王一強(qiáng)，張玉香，姜德民，王鳳麗，史曉偉，陳有源，王俊喹

( 1. 甘肅衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2. 甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050; 3. 蘭州市安寧區(qū)醫(yī)院，甘肅蘭州 730060；4.西和縣中醫(yī)院，甘肅 西和 742100)

非酒精性脂肪肝(non alcohol fatty liver disease，NAFLD)是一種除酒精和肝特異性病因，由其他致病因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過多的病理改變[1],是臨床最常見的慢性肝病之一，也是肝臟相關(guān)惡性疾病發(fā)生的重要誘因。目前尚無確切療效的藥物用于NAFLD的治療。隨著臨床實踐和科學(xué)研究的深入，中醫(yī)藥在防治NAFLD方面突顯出了優(yōu)勢。清肝祛濕活血方在臨床應(yīng)用多年，前期研究[2]表明其能夠改善非酒精性脂肪肝患者臨床癥狀，降低體重指數(shù)、腰圍，改善肝功能，調(diào)節(jié)血脂代謝；動物實驗[3]認(rèn)為其改善血脂代謝與下調(diào)大鼠肝臟固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c表達(dá)相關(guān)。胰島素抵抗是多種代謝性疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)，而很多代謝性疾病的發(fā)生與NAFLD相關(guān)，NAFLD被認(rèn)為是代謝綜合征的肝臟表現(xiàn)[4-6]。本研究采用高脂飲食誘發(fā)大鼠建立NAFLD大鼠模型，觀察該方對空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)和胰島素抵抗的影響，從而探討該中藥組方改善非酒精性脂肪肝的機(jī)制，為防治NAFLD提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動 物

清潔級SD大鼠，雄性，90只，體質(zhì)量130～170 g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，動物生產(chǎn)許可證號: SYXK(甘)2011-0001。為使動物適應(yīng)環(huán)境，提前將其放置在18～20 ℃的實驗室內(nèi)，飲用水自來水，自由進(jìn)食，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)1周。

1.2 藥品、試劑與儀器

清肝祛濕活血方藥物組成：茵陳10 g，郁金10 g，青葙子10 g，丹參15 g，夏枯草10 g，密蒙花10 g，垂盆草10 g。煎劑由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)實驗室制備。羅格列酮片，商品名為太羅，太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司提供，批號31288；四環(huán)素，四川顯華動物藥業(yè)有限公司提供，批號20160112。Rat Insulin ELISA試劑盒，購自上海藍(lán)基生物科技有限公司，批號E02I0004。TBA-120FR全自動生化分析儀，日本東芝(TOSHIBA)公司產(chǎn)品；OHAUS1/1000型電子天平，美國BECKANCOULTER公司產(chǎn)品；HH-S型數(shù)顯水浴箱，金壇醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；5417R型低溫離心機(jī)，德國艾本德公司產(chǎn)品；TC-120型生物組織自動脫水機(jī)，孝感泰維電子設(shè)備有限公司產(chǎn)品。

1.3 動物分組與模型的建立

將動物隨機(jī)分為正常對照組，模型對照組，羅格列酮片組，清肝祛濕活血方高、中、低劑量組6組，每組15只。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，常規(guī)飲食，自由飲水。第8天開始造模：正常對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，連續(xù)60 d。其余各組按照聶文山等[7]的造模方法，給予高脂飼料(84%基礎(chǔ)飼料+10%豬油+5%蛋黃粉+1%膽固醇)喂養(yǎng)，連續(xù)60 d；并于造模第1天腹腔注射四環(huán)素150 μg/g，之后于第6，12，18，24，30天分別腹腔注射1次氧四環(huán)素100 μg/g，每次注射四環(huán)素前稱量SD大鼠的體質(zhì)量，依據(jù)造模大鼠的體質(zhì)量的變化來改變給藥量，造模時間30 d。

1.4 給藥方法

造模結(jié)束，各組按相應(yīng)藥品、劑量灌胃給藥。參考《藥理實驗方法學(xué)》[8]，按照人與大鼠的體質(zhì)量換算法，大鼠的等效劑量為11.25g生藥/kg，清肝祛濕活血方低、中、高劑量組用藥劑量依次為5.63，11.25，22.50 g生藥/kg。根據(jù)文獻(xiàn)[9]報道，羅格列酮組的用藥劑量為5 μg/(g·d)。按照大鼠灌藥容積20 μL/g計算，清肝祛濕活血方低、中、高劑量組的藥液分別以蒸餾水配制為0.28，0.56，1.13 g/mL。低、中、高劑量組分別給予清肝祛濕活血方生藥5.63，11.25，22.5 g/(kg·d)灌胃；羅格列酮組給予羅格列酮片5μg/(g·d)灌胃；模型對照組和正常對照組予生理鹽水10 μL/(g·d)灌胃。各組大鼠連續(xù)灌胃30 d。

1.5 檢測指標(biāo)

末次灌胃后將大鼠空腹8 h，鼠尾采血測定FPG；經(jīng)眶后靜脈叢以采血管采血300 μL，離心后凍存上清，采用ELISA法檢測FINS，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行；根據(jù)胰島素水平和血糖值計算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)[10]，HOMA-IR=胰島素水平(μIU/L)×空腹血糖(mmol/L)/22.5 。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

與正常對照組對比，模型對照組大鼠FPG、FINS及 HOMA-IR均明顯升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型對照組對比，羅格列酮組、清肝祛濕活血方各劑量組大鼠HOMA-IR、FPG及FINS均顯著較低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。與羅格列酮組對比，清肝祛濕活血方中、高劑量組大鼠HOMA-IR、FPG及FINS明顯降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)，而清肝祛濕活血方低劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明清肝祛濕活血方能夠顯著改善非酒精性脂肪肝大鼠胰島素抵抗。見表1。

分組FPG/ (mmol·L-1)FINS/(μIU·L-1)HOMA-IR正常對照組4.62±1.537.97±0.441.75±0.33模型對照組12.05±1.48***43.05±12.72***21.98±6.19***羅格列酮組8.21±1.74###28.65±10.55###13.92±3.75###清肝祛濕活血方低劑量組9.33±1.62##△29.06±11.37##△14.86±3.51##△清肝祛濕活血方中劑量組7.23±1.55###△△24.76±8.23###△△10.34±2.26###△△清肝祛濕活血方高劑量組6.45±1.02###△△△20.49±7.61###△△△6.97±1.47###△△△

注：與正常對照組對比，***P<0.01；與模型對照組對比，##P<0.05，###P<0.01；與羅格列酮組對比，△P>0.05，△△P<0.05，△△△P<0.01

3 討 論

非酒精性脂肪肝屬中醫(yī)學(xué)“脂滿”“肝著”“積聚”“痰證”等范疇。針對其病因病機(jī)，譚遠(yuǎn)忠等[11]認(rèn)為本病多由飲食不節(jié)所致，過食辛辣刺激、肥甘厚膩之品導(dǎo)致邪氣阻滯中焦而肝失疏泄，脾失健運(yùn)，痰濕蘊(yùn)結(jié)體內(nèi)，瘀血阻滯，形成脂肪肝；遲蕾等[12]認(rèn)為本病是本虛標(biāo)實之證，多由脾腎虧虛、肝郁氣滯導(dǎo)致痰濕瘀互結(jié)體內(nèi)而使肝脈受損；趙文霞等[13]認(rèn)為該病因飲食不節(jié)、體虛久病、情志失調(diào)而發(fā)，病位在肝，與脾、腎、胃關(guān)系密切，致病因素主要是氣機(jī)阻滯，痰濕瘀互結(jié)；劉平等[14]認(rèn)為本病的主要病因是濕濁內(nèi)生，屬本虛標(biāo)實之證；呂嬌嬌等[15]認(rèn)為本病因濕濁內(nèi)蘊(yùn)而致氣虛毒蘊(yùn)，屬本虛標(biāo)實之證。本課題組根據(jù)NAFLD的臨床表現(xiàn)和病理特點，認(rèn)為肝火旺盛、濕熱瘀結(jié)為其主要病機(jī)，遂立清肝祛濕、活血化瘀之法，并依法擬清肝祛濕活血方。方中夏枯草清肝散郁；密蒙花清熱瀉火、養(yǎng)肝明目，青葙子清肝、涼血、祛風(fēng)熱，兩藥配伍可增清肝經(jīng)實熱之功；茵陳苦、辛，微寒，歸脾、胃、肝、膽經(jīng)，清熱利濕、退黃，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)[16]其有利膽、降血脂等顯著功效；垂盆草清熱解毒、利膽，臨床上常被用于治療濕熱黃疸、小便不利、癰腫瘡瘍等疾病；丹參、郁金相配，可散結(jié)化瘀、行氣通絡(luò)。

本研究結(jié)果表明，清肝祛濕活血方能改善NAFLD大鼠胰島素抵抗，這可能是中醫(yī)藥治療NAFLD的機(jī)制之一，但具體的分子機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。