文/Thomas Brenn

美國(guó)藥典重新修訂的第857章，規(guī)定了紫外/可見(jiàn)光譜的檢測(cè)方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn) // 美國(guó)藥典是歐洲藥典的對(duì)照版。重新修訂的檢測(cè)方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)際上所有的制藥企業(yè)都可能受到它的影響。具體都是些什么規(guī)定呢？

縮寫(xiě)為USP的美國(guó)藥典是美利堅(jiān)合眾國(guó)的官方藥典。其新修訂的第857章規(guī)定了紫外/可見(jiàn)光譜的測(cè)試方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。自2016年5月1日起，這一章節(jié)的規(guī)定對(duì)所有向美國(guó)市場(chǎng)出口藥物的國(guó)際制藥公司都開(kāi)始生效了。

新版美國(guó)藥典第857章的既定目標(biāo)是：確定用戶(hù)使用紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)時(shí)的檢測(cè)方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，確保符合預(yù)期用途（OQ，操作認(rèn)證）。另外，這些檢驗(yàn)方法應(yīng)保證所使用的檢測(cè)儀在使用期間能夠提供正確的檢測(cè)數(shù)據(jù)（PQ，性能認(rèn)證）。

美國(guó)藥典第857章中規(guī)定的檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)如下：

■驗(yàn)證波長(zhǎng)的準(zhǔn)確性：240～650納米波長(zhǎng)用鈥，//730～870納米波長(zhǎng)用釹鐠化合物（新）

圖1 利用液體濾光片檢驗(yàn)分光光度計(jì)。

■驗(yàn)證光度計(jì)的準(zhǔn)確性，至3吸收等級(jí)：//紫外線(xiàn)波長(zhǎng)范圍內(nèi)用高氯酸中的重鉻酸鉀（0-200mg / l），//可見(jiàn)光范圍用帶中性玻璃的濾波光片

■ 散射光檢查：//190～205納米波長(zhǎng)時(shí)用溶于水中的氯化鉀，//210～259納米波長(zhǎng)時(shí)用 溶 于水中的碘化鉀或者碘化鈉，//250～320納米波長(zhǎng)用丙酮，//300～385納米波長(zhǎng)用溶于水的亞硝酸鈉

■分辨率驗(yàn)證：//0.5～3.0納米光譜范圍內(nèi)用乙烷中的甲苯

■美國(guó)藥典建議：使用生產(chǎn)廠(chǎng)家推薦的、經(jīng)過(guò)認(rèn)證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)執(zhí)行這些檢測(cè)認(rèn)證。例如Hellma分析技術(shù)公司的產(chǎn)品和諸如國(guó)家計(jì)量機(jī)構(gòu)（美國(guó)）NIST和（德國(guó)）PTB推薦的方法。

新版藥典沒(méi)有為某種檢查方法定義一種必須使用的檢查方案，相反是列出了每種測(cè)試方法可能的解決方案。這就賦予用戶(hù)一項(xiàng)責(zé)任：自己選擇檢測(cè)驗(yàn)證時(shí)所需的解決方案。藥典規(guī)定的要求就是：應(yīng)定期的檢測(cè)驗(yàn)證規(guī)定的操作領(lǐng)域（在預(yù)先設(shè)定的操作范圍內(nèi)）。這樣一來(lái)，用戶(hù)的紫外線(xiàn)和可見(jiàn)光分光光度計(jì)的驗(yàn)證就會(huì)因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和檢驗(yàn)方法的不同組合而各不相同了；并且有下列兩個(gè)基本問(wèn)題：預(yù)期應(yīng)用領(lǐng)域的檢測(cè)分析包括了...

■哪個(gè)波長(zhǎng)范圍？

■哪個(gè)吸收區(qū)域？

圖2 兩個(gè)分辨率完全一樣的濾光片，層厚不同，但外形尺寸相同。

LP本刊提示

美國(guó)藥典857章

美國(guó)藥典857章的既定目標(biāo)是：建立測(cè)試方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，確保用戶(hù)使用的紫外線(xiàn)/可見(jiàn)光分光光度計(jì)適用于在規(guī)定的用途中使用（OQ，操作認(rèn)證）。另外，這些檢測(cè)方法也應(yīng)該是有保證的。所使用的光學(xué)檢測(cè)設(shè)備在使用操作期內(nèi)應(yīng)能提供正確的檢測(cè)值（PQ，性能認(rèn)證）。美國(guó)藥典規(guī)定的檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為：

1.驗(yàn)證波長(zhǎng)準(zhǔn)確度;

2.驗(yàn)證光度精度達(dá)3 級(jí)吸收等級(jí);

3.檢查雜散光;

4.分辨率檢驗(yàn)。

表1 要求的精度取決于波長(zhǎng)范圍

表2 要求的精度取決于吸收和波長(zhǎng)范圍

表3 標(biāo)準(zhǔn)偏差

波長(zhǎng)準(zhǔn)確性的檢測(cè)驗(yàn)證

波長(zhǎng)準(zhǔn)確性檢測(cè)驗(yàn)證的目的是確保預(yù)期應(yīng)用領(lǐng)域中的（X軸）波長(zhǎng)標(biāo)度在規(guī)定的公差范圍之內(nèi)。不同波長(zhǎng)范圍內(nèi)用戶(hù)所有檢測(cè)儀要求的波長(zhǎng)公差參見(jiàn)表1。

■在波長(zhǎng)240～640納米范圍內(nèi)，美國(guó)藥典第857章建議使用高氯酸溶液濾光片（溶解在高氯酸中的氧化鈥），并在下列峰值處檢測(cè)波長(zhǎng)的準(zhǔn)確性：241,250,278,287,33 3,345,361,386,416,451,468,485,536,640納米。

■波長(zhǎng)范圍大于640納米時(shí)，美國(guó)藥典第857章建議使用高氯酸溶液（溶解在高氯酸中的釹鐠化合物），并在下列峰值處檢測(cè)波長(zhǎng)的準(zhǔn)確性：732,740,794,799和864納米。

光度計(jì)的準(zhǔn)確性的檢測(cè)驗(yàn)證

這一檢測(cè)驗(yàn)證的目的是：驗(yàn)證在預(yù)期應(yīng)用領(lǐng)域至3吸收等級(jí)時(shí)吸收值的正確性、精度和線(xiàn)性度。美國(guó)藥典第857章要求的、與吸收值和波長(zhǎng)范圍有關(guān)的準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)參見(jiàn)表2。

■美國(guó)藥典第857章建議采用重鉻酸鉀液體濾光片（溶解在高氯酸中的重鉻酸鉀）來(lái)檢查紫外線(xiàn)范圍內(nèi)的光度測(cè)量精度。應(yīng)根據(jù)需要使用濃度0-200mg / l（相當(dāng)于0-3 吸收等級(jí)）。在下列峰值處檢測(cè)紫外線(xiàn)的范圍：235, 257, 313, 350納米。

■為了檢測(cè)可見(jiàn)光范圍內(nèi)的光度計(jì)測(cè)量精度，美國(guó)藥典第857章建議使用中性玻璃濾光片，根據(jù)需要最多可以使用3個(gè)吸收等級(jí)。在系列峰值處檢測(cè)可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍：440, 465, 546,1, 590, 635納米。

為測(cè)定所有儀器的光度精度，美國(guó)藥典建議在兩個(gè)或者更多的吸收等級(jí)（在規(guī)定的使用范圍內(nèi)）進(jìn)行至少六次重復(fù)檢測(cè)，并確定每一次檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。在這種情況下應(yīng)滿(mǎn)足表3規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差值。

表4 散射光檢測(cè)時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

美國(guó)藥典第857章規(guī)定的散射光檢查

不希望出現(xiàn)的散射光可以對(duì)光的吸收檢測(cè)帶來(lái)不利影響。經(jīng)驗(yàn)表明：隨著光度計(jì)中光學(xué)元器件和發(fā)光燈泡的老化，散射光的比例會(huì)不斷增大。散射光檢測(cè)的目的是：定期的監(jiān)測(cè)散射光值，以便在必要時(shí)及時(shí)的采取有效措施。

美國(guó)藥典第857章規(guī)定：為了檢測(cè)散射光值，用戶(hù)必須檢測(cè)規(guī)定應(yīng)用范圍內(nèi)的光波波長(zhǎng)。檢測(cè)散射光時(shí)，美國(guó)藥典第857章規(guī)定的、在一定波長(zhǎng)范圍允許使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)參見(jiàn)表4。也就是說(shuō)：如果用戶(hù)在波長(zhǎng)范圍190至400納米內(nèi)檢測(cè)散射光值時(shí)就要定期的列出的四個(gè)波長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的散射光值。

藥典還介紹了一種全新的散射光值檢測(cè)方法：這種方法需要兩個(gè)分辨率完全一樣的濾光片，一個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)的濾光片，層厚10毫米；另一個(gè)是參考濾光片，層厚5毫米。

應(yīng)按照美國(guó)藥典857章規(guī)定的計(jì)算公式計(jì)算散射光值：

Sλ=光線(xiàn)波長(zhǎng)λ計(jì)算確定的散射光值

Aλ=光線(xiàn)波長(zhǎng)λ時(shí)檢測(cè)到吸收量

驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：

Sλ≤0.01和Aλ≥0.7吸收等級(jí)

日常實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)證明：這種方法檢測(cè)到的數(shù)據(jù)與檢測(cè)儀器設(shè)備之間有著很強(qiáng)的依賴(lài)性；即：峰值作用的波長(zhǎng)取決于檢測(cè)儀器設(shè)備的類(lèi)型和功率。因此，對(duì)用戶(hù)來(lái)講最重要的是要知道：檢測(cè)區(qū)域內(nèi)測(cè)得的最大吸收率對(duì)這種檢測(cè)方法有著決定性的意義，并且應(yīng)該≥0.7吸收等級(jí)。

分辨率的驗(yàn)證

如果分光光度計(jì)的分辨率受損，兩個(gè)彼此靠近的峰值可能會(huì)出現(xiàn)混合峰值，從而導(dǎo)致讀數(shù)錯(cuò)誤。因此，定期審核驗(yàn)證是至關(guān)重要的。

美國(guó)藥典857章建議：用甲苯溶解在乙烷中的溶液作為乙烷的參照溶液進(jìn)行檢測(cè)，建議采用的檢測(cè)方法如下：

■波長(zhǎng)大約269和266納米時(shí)，在甲苯-乙烷溶液和參照液體乙烷液中檢測(cè)得到的最大值和最小值之間的比例。

■測(cè)得的吸收比取決于檢測(cè)儀表的光譜帶寬。美國(guó)藥典第857章規(guī)定：大多數(shù)醫(yī)用分析的光譜帶寬采用2納米就足夠了。驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是：最大吸收比為1.3。