李國(guó)成

山東省菏澤市牡丹區(qū)中醫(yī)醫(yī)院外科,菏澤 274000

前列腺癌是影響男性生命健康的惡性腫瘤,其發(fā)病率僅低于肺癌,占男性惡性腫瘤的30%,死亡率占11%。前列腺癌的發(fā)病過程隱匿,進(jìn)程較慢,且發(fā)病早期無明顯癥狀,一旦發(fā)現(xiàn),往往已發(fā)展到晚期或已發(fā)生轉(zhuǎn)移[1]。因此,前列腺癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療具有顯著的意義。免疫組化染色是診斷前列腺癌的必要方法,其中α-甲酰基輔酶A消旋酶(又稱P504S)是近年來研究較為廣泛的前列腺癌重要標(biāo)志物,有報(bào)道指出[2],P504S對(duì)于前列腺癌的診斷具有顯著的特異性。P63和Ck34βE12是前列腺中基底細(xì)胞的陽性標(biāo)志物,對(duì)前列腺的惡性癌變及良性病變具有較為靈敏的診斷[3]。前列腺特異性膜抗原(PSMA)在前列腺上皮細(xì)胞表面特異表達(dá),在前列腺癌細(xì)胞上的表達(dá)顯著增加[4]。本研究探究P504s、P63、PSMA及Ck34βE12在前列腺良惡性病變鑒別中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月—2016年12月收治的菏澤市牡丹區(qū)中醫(yī)醫(yī)院直腸B超引導(dǎo)下的手術(shù)切除標(biāo)本112例,前列腺穿刺活檢標(biāo)本89例及經(jīng)尿道電切除標(biāo)本23例,共224例作為研究對(duì)象?；颊吣挲g55～ 81歲,平均(70.54±4.27)歲;經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),前列腺癌(PCa)51例,前列腺非典型腺瘤性增生(AAH)12例,高級(jí)別前列腺上皮內(nèi)瘤變(HGPIN)15例,基底細(xì)胞增生(BCH)9例及良性前列腺瘤樣增生(BPH)21例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意,患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)方法

所獲標(biāo)本均進(jìn)行石蠟切片,行蘇木精-伊紅(HE)染色。于10%的中性福爾馬林中固定24 h,進(jìn)行石蠟切片。切片置于65 ℃孵箱過夜,經(jīng)過抗原修復(fù)和封閉后,加入P504S單克隆抗體、p63 單克隆抗體、PSA單克隆抗體或Ck34βE12單克隆抗體于4 ℃過夜,洗滌,加入二抗,洗滌后加入ABC復(fù)合物,并進(jìn)行DAB顯色。本研究所用一抗均購(gòu)自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司,所有操作按照說明書嚴(yán)格進(jìn)行,且每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置陽性及陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

P504S主要存在于細(xì)胞胞質(zhì)中,陽性細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色;P63主要分布在細(xì)胞核中,陽性細(xì)胞細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色;PSMA在細(xì)胞膜及胞質(zhì)中分布,陽性細(xì)胞的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)棕黃色顆粒;Ck34βE12存在于細(xì)胞質(zhì)中,呈現(xiàn)棕黃色;根據(jù)陽性細(xì)胞比例分級(jí):陰性(-):視野中無陽性細(xì)胞出現(xiàn);(+):陽性細(xì)胞比例<10%;(++):陽性細(xì)胞比例在10%～50%;(+++):陽性細(xì)胞比例在50%～100%。對(duì)單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)P504S、P63、PSMA及Ck34βE12的準(zhǔn)確度,靈敏性及特異性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 P504S在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

P504S主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi),51例Pca患者中32例顯示出強(qiáng)的棕黃色彌散性胞質(zhì)染色,彌散陽性率為62.75%,陽性率為100.00%;12例HGPIN患者中11例出現(xiàn)彌散性或散在陽性,陽性率為91.67%;而AAH、BCH及BPH患者標(biāo)本中P504S的陽性率分別為6.67%、11.11%及0.00%,與Pca和HGPIN患者的P504S相比,具有顯著性差異(P< 0.05),見表1。

2.2 P63在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

P63在Pca的陽性率為0%,而在HGPIN,AAH,BCH和BPH中的表達(dá)量均為100.00%,Pca中P63的表達(dá)量顯著低于其他種類的前列腺病變(P< 0.05),見表2。

2.3 PSMA在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

PSMA在Pca和HGPIN的陽性率為98.04%和90.91%,在AAH,BCH和BPH中的表達(dá)量分別為13.33%,11.11%和9.52%,Pca,HGPIN的陽性率顯著高于AAH、BCH和BPH(P<0.05),見表3。

表1 P504S在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

注:與Pca相比,(1)P< 0.05;與HGPIN相比,(2)P< 0.05。

表2 P63在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

注:與Pca相比,(1)P< 0.05。

表3 PSMA在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

注:與Pca相比,(1)P< 0.05;與HGPIN相比,(2)P< 0.05。

2.4 Ck34βE12在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

Ck34βE12在Pca中陽性率為0.00%,在HGPIN、AAH,BCH和BPH中的陽性率均為100.00%,Pca陽性率顯著低于HGPIN、AAH、BCH和BPH(P< 0.05),見表4。

表4 Ck34βE12在前列腺良惡性病變組織中的表達(dá)

注:與Pca相比,(1)P< 0.05。

2.5 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)P504S、P63、PSMA及Ck34βE12對(duì)前列腺癌診斷的準(zhǔn)確度,靈敏性及特異性

P504S、P63、PSMA及Ck34βE12聯(lián)合檢測(cè)對(duì)前列腺癌診斷的準(zhǔn)確度,靈敏度及特異性分別達(dá)到100.00%,97.85%和98.24%,均高于單獨(dú)檢測(cè),具有一定的臨床診斷價(jià)值,見表5。

表5單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)P504S、P63和PSMA對(duì)前列腺癌診斷的準(zhǔn)確度,靈敏度及特異性(%)

Tab.5Theaccuracy,sensitivity,andspecificityofseparateandjointdetectionofP504S,P63,PSMAandCk34βE12,inthediagnosisofprostatecancer(%)

指標(biāo)準(zhǔn)確度特異性靈敏度P504S90.3596.5289.66P6385.3480.6383.46PSMA92.6794.0195.24Ck34βE1283.4785.4487.25聯(lián)合檢測(cè)100.0097.8598.24

3 討論

目前臨床上對(duì)于前列腺癌的診斷主要通過其結(jié)構(gòu)、浸潤(rùn)方式的改變及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的異型性等,但一些微小的形態(tài)差別,如前列腺非典型腺瘤性增生,高級(jí)別前列腺上皮內(nèi)瘤變,基底細(xì)胞增生及良性前列腺瘤樣增生等與惡性前列腺癌變具有的差別甚微,HE染色比較難以區(qū)分[5],因此,尋找有效的標(biāo)志物進(jìn)行區(qū)分,提高前列腺癌的診斷準(zhǔn)確性及特異性具有重要意義。

P63和Ck34βE12均為基底細(xì)胞的特異性標(biāo)記物,定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,通過對(duì)P63和Ck34βE12染色強(qiáng)度的分析,能夠清楚分辨基底細(xì)胞的存活狀態(tài)及是否缺失,而基底細(xì)胞的缺失是前列腺癌變的重要指征,前列腺癌變時(shí),P63和Ck34βE12的染色強(qiáng)度顯著降低,許多報(bào)道指出P63和Ck34βE12可以作為特異性標(biāo)記物對(duì)前列腺癌進(jìn)行檢測(cè)[6]。本研究結(jié)果顯示,P63和Ck34βE12在Pca的陽性率為0%,而在其他前列腺病變中陽性率為100.00%,與以前研究的結(jié)果相似。由此可見,P63和Ck34βE12可以作為特異性標(biāo)志物用于分辨前列腺的癌性病變和良性增生。有研究結(jié)果顯示,良性前列腺增生的細(xì)胞中含有少數(shù)的腺泡和導(dǎo)管周圍,存在P63和Ck34βE12間斷的陽性或陰性,此結(jié)果表明了單獨(dú)檢測(cè)P63和Ck34βE12的局限性,對(duì)于穿刺活檢的標(biāo)本,存在一定的視野限制,更容易出現(xiàn)假陽性或假陰性的結(jié)果[7]。因此,P63和Ck34βE12應(yīng)與其他檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用來對(duì)前列腺癌進(jìn)行診斷。

P450S作為一種高度敏感的前列腺癌的陽性標(biāo)志物,主要存在于線粒體及過氧化物酶體中,有報(bào)道稱P450S在前列腺癌組織中高表達(dá),但是在正常前列腺組織中幾乎不表達(dá)[8]。本研究結(jié)果與以前的報(bào)道相似,P504S在前列腺癌中的表達(dá)顯著升高。PSMA在前列腺上皮組織中表達(dá),在胞漿近腔緣側(cè)的染色較深,且其表達(dá)量隨著上皮細(xì)胞形狀改變程度的加重而增加,在正常前列腺組織中表達(dá)較低。有研究顯示,PSMA在前列腺癌中的表達(dá)程度與年齡,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織分化程度具有密切的關(guān)系[9]。也有報(bào)道稱 99mTc-PSMA全身平面顯像結(jié)合局部SPECT/CT斷層顯像對(duì)前列腺癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的探測(cè)有較高應(yīng)用價(jià)值,靈敏度及特異度均較高[10]。本研究結(jié)果顯示,PSMA在Pca,HGPIN中的表達(dá)顯著增加。因此,PMSA是一種診斷前列腺癌較為特異的標(biāo)志物,能夠作為靶向物,與其他技術(shù)結(jié)合,作為前列腺癌診斷與治療的新手段。

針對(duì)以上原因,本研究對(duì)單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)P504S、P63、PSMA及Ck34βE12的準(zhǔn)確度,靈敏性及特異性進(jìn)行評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)以上指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè),對(duì)前列腺癌診斷的準(zhǔn)確度、靈敏性及特異性均得到了增加。