申光輝，薛泉宏，趙 娟

(1. 西北農(nóng)林科技大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 ,陜西楊凌 712100；2. 西北農(nóng)林科技大學(xué) 資源環(huán)境學(xué)院 ,陜西楊凌 712100；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，四川雅安 625014；4. 北京市農(nóng)林科學(xué)院 植物保護(hù)環(huán)境保護(hù)研究所，北京 100097)

草莓酸甜可口，營養(yǎng)豐富，是中國廣泛栽培的重要小漿果。草莓根腐病是由土傳病原真菌及線蟲等因素單獨(dú)或共同引起的復(fù)合根部病害，世界范圍內(nèi)已報(bào)道的草莓根腐病病原物多達(dá)20余種[1]。不同地區(qū)或同一地區(qū)不同年份生態(tài)條件的差異性，導(dǎo)致草莓根腐病優(yōu)勢(shì)致病菌種類往往存在較大的地域差異，已報(bào)道從中國河北、湖北、北京、安徽、河南和山東等地分離確定的草莓根腐病病原差異很大，包括擬盤多毛孢屬(Pestalotiopsis)[2-3]、鐮刀菌屬(Fusarium)[4-9]、絲核菌屬(Rhizoctonia)[6,10]、疫霉屬(Phytophthora)[6,11]和鏈格孢屬(Alternaria)[2-3,12]等，其中鐮刀菌屬致病菌的報(bào)道較多。

長安區(qū)是陜西省重要的草莓栽培主產(chǎn)區(qū)，草莓種植已有30多年時(shí)間，近年來隨著設(shè)施栽培的快速推廣發(fā)展，當(dāng)?shù)夭葺『χ鹉昙又兀貏e是連作田塊，嚴(yán)重危害草莓苗的健康生長，導(dǎo)致減產(chǎn)，甚至絕收，已成為制約當(dāng)?shù)夭葺a(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要瓶頸。而目前鮮見對(duì)引起該地草莓根腐病發(fā)生的具體病原的詳細(xì)報(bào)道。為查明該地區(qū)草莓根腐病發(fā)生的主要病原真菌種類，本研究對(duì)采集到的草莓根腐病株進(jìn)行病原菌分離純化和柯赫氏法則驗(yàn)證，采用形態(tài)學(xué)特征，結(jié)合rDNA-ITS序列分析進(jìn)行病原菌鑒定，并探究其生物學(xué)特征，旨在為該地區(qū)草莓根腐病發(fā)生規(guī)律以及防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

草莓典型根腐病株于2010年4月采自西安市長安區(qū)。

1.2 病原菌的分離純化

用自來水沖洗草莓根腐病病株根系表面泥沙，選取發(fā)病根系，采用組織分離法進(jìn)行病原菌的分離[13]：剪取病健交界根系組織，以φ=70%乙醇消毒10 s，再用1 g/L升汞表面消毒20 s，無菌水反復(fù)沖洗5次，切成1 cm長度根段，置于PDA培養(yǎng)基平板25 ℃ 培養(yǎng)2～3 d，待組織塊表面長出菌落并產(chǎn)孢后，采用單孢分離法獲得純培養(yǎng)物[13]，純化后的菌株轉(zhuǎn)接于PDA斜面，25 ℃培養(yǎng)7 d，4 ℃冰箱保存。

1.3 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

采用插片法將病原菌接種于PDA平板，25 ℃培養(yǎng)3～7 d，鏡檢觀察記錄病原菌菌絲、產(chǎn)孢構(gòu)造及孢子形態(tài)特征。

1.4 病原菌致病性測(cè)定

將病原菌接種于PDA平板，25 ℃培養(yǎng)10 d，待大量產(chǎn)孢后用無菌水洗脫，采用血球板計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，制備成濃度為1.8×106mL-1的孢子懸浮液。采用根部離體接種法和活體傷根接種法測(cè)定病原菌致病性。根部離體接種法[13]：取健康草莓植株，自來水沖洗根系，剪至長約4～6 cm小根段，浸于φ=70%乙醇溶液中消毒30 s，再用無菌水沖洗3次。將取自于同一草莓植株的小根段隨機(jī)分成兩組，置于皿底鋪有滅菌濾紙的無菌培養(yǎng)皿中，其中一組加入3 mL病原菌孢子懸浮液，另一組加等體積無菌水作為對(duì)照，于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察根段發(fā)病狀況，定期補(bǔ)水以保持皿內(nèi)相對(duì)濕度≥85%?；铙w傷根接種法：選取根系發(fā)達(dá)程度較為一致的健康草莓苗，沖洗根系表面泥沙，無菌水反復(fù)沖洗3次，用無菌刀片切去根尖新生組織進(jìn)行傷根處理后，移栽于裝有無菌蛭石的營養(yǎng)缽中，沿根莖部位灌入10 mL病原菌孢子懸液，以灌入10 mL無菌水作對(duì)照，于25 ℃下室內(nèi)培養(yǎng)，常規(guī)方法進(jìn)行管理，各處理均重復(fù)6株。觀察記錄病原菌侵染草莓離體根段情況和營養(yǎng)缽內(nèi)草莓根系生長與發(fā)病情況。參照文獻(xiàn)[14]的病株分級(jí)方法：0級(jí)，根系健康無侵染褐變；1級(jí)，根系稍有侵染褐變，發(fā)病腐爛部分占全部根系比例<25%；2級(jí)，根系明顯腐爛褐變，發(fā)病腐爛部分占全部根系比例為25%～50%；3級(jí)，腐爛褐變根系占全部根系的51%～75%，并可見少量菌絲及孢子；4級(jí)，發(fā)病腐爛根系占全部根系的76%～90%，并產(chǎn)生大量孢子；5級(jí)，腐爛褐變根系占全部根系的比例>90%。病情指數(shù)(RDSI)=∑(Di×Ni)/(N×5) ×100，式中Di為病情級(jí)數(shù)，Ni為各病級(jí)株數(shù)，N為調(diào)查樣本數(shù)；5為最高病級(jí)。按照柯赫氏法則，從發(fā)病根系組織部位進(jìn)行致病菌再分離，通過菌落特征和顯微特征進(jìn)行比較，確定再分離菌株與接種病原菌是否相同。

1.5 病原菌分子生物學(xué)鑒定

采用CTAB法提取病原菌株基因組DNA，以ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4[15](5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)為引物，擴(kuò)增rDNA-ITS片段。25 μL PCR體系：Taq酶0.2 μL，10倍Buffer 2.5 μL，dNTP 2.0 μL，ITS1/ITS4引物各1.0 μL， ddH2O 16.3 μL，DNA模板2.0 μL。反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性 3 min；94 ℃變性30 s，50 ℃退火40 s，72 ℃ 延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)20 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)確認(rèn)，送交生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行純化并測(cè)序。登陸NCBI網(wǎng)站Nucleotide-nucleotide BLAST工具與GenBank數(shù)據(jù)庫中相似模式菌株序列進(jìn)行比對(duì)，獲得同源性較高的真菌rDNA-ITS序列，采用MEGA 5.1軟件，鄰接法(Neighbor-joining method)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[16]，自舉檢驗(yàn)次數(shù)(Bootstrap)1 000次。結(jié)合病原菌形態(tài)特征，參考魏景超《真菌鑒定手冊(cè)》[17]及相關(guān)參考文獻(xiàn)[18-20]確定病原真菌分類地位。

1.6 病原菌生物學(xué)特性的測(cè)定

1.6.1 培養(yǎng)基對(duì)病原菌菌絲生長的影響 病原菌接種于PDA培養(yǎng)基25 ℃培養(yǎng)3～5 d，沿菌落邊緣打取病原菌菌餅(直徑7.0 mm)，接于7種不同培養(yǎng)基平板中央[13]，25 ℃ 培養(yǎng)7 d后十字交叉法測(cè)量菌落直徑，每種培養(yǎng)基重復(fù)3次。

1.6.2 光照對(duì)病原菌菌絲生長的影響 設(shè)置24 h 全光照、12 h光照與12 h黑暗交替、24 h全黑暗3種不同的光照條件，按“1.6.1”方法將菌餅置于PDA平板培養(yǎng)并測(cè)量菌落直徑，各處理重復(fù)3次。

1.6.3 溫度對(duì)病原菌菌絲生長及孢子萌發(fā)的影響 設(shè)置20～35 ℃溫度條件，按“1.6.1”方法將菌餅置于PDA平板培養(yǎng)，每24 h測(cè)量菌落直徑，并計(jì)算菌絲平均生長速率。各溫度培養(yǎng)均重復(fù)3次。用馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基洗脫病原菌平板表面的孢子，制成孢子懸浮液，并調(diào)整至每個(gè)視野(15×10倍)25～30個(gè)孢子，采用懸滴法[13]測(cè)定各溫度條件下不同萌發(fā)時(shí)間的分生孢子萌發(fā)情況，并隨機(jī)鏡檢300個(gè)分生孢子萌發(fā)情況，計(jì)算分生孢子萌發(fā)率。

1.6.4 pH對(duì)病原菌菌絲生長及孢子萌發(fā)的影響 按“1.6.1”制備病原菌菌餅并接于不同pH的PDA平板中央，于25 ℃培養(yǎng)并測(cè)定菌落直徑，各處理均重復(fù)3次。用不同pH的PBS制備每視野(15×10倍)25～30個(gè)孢子的病原菌分生孢子懸浮液，25 ℃培養(yǎng)萌發(fā)，懸滴法[7]檢測(cè)萌發(fā)3 h和12 h的分生孢子萌發(fā)情況，并隨機(jī)鏡檢300個(gè)分生孢子，計(jì)算分生孢子萌發(fā)率。

1.6.5 分生孢子致死溫度測(cè)定 將病原菌分生孢子懸浮液分別置于35～50 ℃的恒溫水浴鍋中熱致死處理10 min，再置于25 ℃培養(yǎng)24 h，檢測(cè)分生孢子萌發(fā)情況，每處理隨機(jī)鏡檢300個(gè)分生孢子，計(jì)算分生孢子萌發(fā)率。

菌落平均生長速率(AGR)=(D-7)/d，式中D為菌落直徑大小(mm)，d為培養(yǎng)時(shí)間(以天表示)。

采用DPS 7.05軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用鄧肯氏(Duncan’s)新復(fù)極差法進(jìn)行不同處理間差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 草莓根腐病病害癥狀

通過病害病情調(diào)查，發(fā)現(xiàn)長安區(qū)連作草莓根腐病始發(fā)于3月底至4月份，4月下旬達(dá)到病害盛發(fā)期，植株死亡率在60%以上，對(duì)草莓生產(chǎn)危害嚴(yán)重。病株相對(duì)健康植株矮小、分蘗數(shù)少、發(fā)病初期老葉變黃、發(fā)病后期全株葉片萎蔫枯死、病株根系枯萎壞死、新生須根不發(fā)達(dá)、根系表面呈褐色至黑色銹斑腐爛癥狀、表皮與木質(zhì)部分嚴(yán)重分離(圖1-B)；而健康草莓植株新生毛細(xì)根發(fā)達(dá)，無腐爛褐變癥狀(圖1-A)。

A.健康草莓根系 Healthy strawberry roots; B.發(fā)病草莓根系 Symptoms on rot roots of strawberry

2.2 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

病原菌菌株CF9在PDA培養(yǎng)基上生長較為緩慢，菌落圓形，但邊緣不規(guī)則，培養(yǎng)初期邊緣菌絲呈乳白色絮狀絨毛狀，菌落由外向內(nèi)從米黃色漸變至褐黃色，整體呈氈狀(圖 2-A)。菌絲無色有隔，直徑2.0～4.9 μm，以單?；蚍稚咦幼绞疆a(chǎn)大型分生孢子或小型分生孢子(圖2-B)，分生孢子無色、壁光滑，粘質(zhì)狀。大型分生孢子(圖 2-C)圓柱狀，兩端鈍圓，直或彎曲，有1～3個(gè)橫隔膜，其中一隔膜分生孢子大小(20～40)μm×(5～10)μm，兩隔分生孢子大小(30～42)μm×(7～12)μm，三隔分生孢子大小(33～47)μm×(6～10)μm，偶見呈梨形的單胞小型分生孢子(17～37)μm×(5～9)μm，培養(yǎng)后期部分菌絲末端或中間細(xì)胞壁加厚形成厚垣孢子，成熟的厚垣孢子金黃色至棕褐色，單生或串生，近圓形，直徑8～14 μm(圖 2-D)。根據(jù)上述形態(tài)特性，將病原菌初步鑒定為土赤殼屬(Ilyonectriasp.)。

2.3 病原菌致病性測(cè)定

對(duì)草莓發(fā)病植株與健康植株根系及根域土壤真菌分離結(jié)果進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)，在發(fā)病植株樣品中分離獲得多株真菌，其中1株真菌菌株CF9在發(fā)病后期樣品中的數(shù)量占真菌總數(shù)的68.0%[21]，而在健康植株中并未分離到。初步認(rèn)為該菌株為疑似病原菌。致病性測(cè)定結(jié)果表明，離體根段接種和活體傷根接種草莓植株均表現(xiàn)出與田間病株相似的根系腐爛癥狀(圖3)。由圖3-B可見，草莓根系受病原菌侵染后呈棕褐色至黑色，后期表皮呈現(xiàn)典型腐爛癥狀，部分根系表面有明顯淺褐色病原菌菌絲，而未接種離體根系腐爛褐變明顯低于接種根系(圖3-A)。由圖3-D可見，活體傷根接種處理草莓植株生長矮小，新生白色毛狀根數(shù)量減少，地上部葉片萎蔫癥狀明顯，而未接種對(duì)照植株根系相對(duì)較發(fā)達(dá)，毛狀根數(shù)量多(圖3-C)。由表1可知，未接種草莓根系(對(duì)照組)在離體狀態(tài)下僅有兩端小部分由于切傷而發(fā)生輕微褐變，其腐爛率和病情指數(shù)分別為13.2%和29.1，但根部離體接種處理草莓根系腐爛率和病情指數(shù)明顯高于對(duì)照組，分別達(dá)73.7%和73.0，表明病原菌分生孢子對(duì)草莓離體根系的侵染致腐能力較強(qiáng)?；铙w傷根未接種草莓植株根系腐爛率及病情指數(shù)分別為7.3%和17.9，而活體傷

A.PDA平板上菌落形態(tài) Colony of mycelia on PDA plate (5 d); B.分生孢子梗 Conidiophor；C.分生孢子 Macroconidia and microconidia; D.厚垣孢子 Chlamydospore

圖2草莓根腐病原真菌CF9形態(tài)特征
Fig.2MorphologicalcharacteristicsofIlyonectriamacrodidymaCF9

A.未接種離體草莓根段 Control roots in vitro; B.孢子懸浮液離體接種草莓根段 Rot roots inoculated with pathogen conidia suspension in vitro; C.活體對(duì)照草莓植株 Control strawberry plants; D.孢子懸浮液活體傷根接種草莓植株 Strawberry plants inoculated with pathogen conidia suspension

圖3 草莓根腐病病原真菌致病性Fig.3 Symptom of strawberry root rot caused by Ilyonectria macrodidyma CF9

根接種草莓植株根系腐爛率及病情指數(shù)顯著高于未接種對(duì)照，分別為57.7%和60.4，表明病原菌分生孢子對(duì)草莓活體根系也具有較強(qiáng)的侵染致腐能力。從上述2種致病性測(cè)定方法的根系病健交界處重新分離得到與接種病原菌相同的病原菌。

2.4 病原菌分子生物學(xué)鑒定

將病原菌菌株CF9的rDNA-ITS基因測(cè)序結(jié)果(GenBank登錄號(hào)：JN641882)提交GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)病原菌CF9與大雙孢土赤殼(Ilyonectriamacrodidyma) isolate REF202(GenBank登錄號(hào)：JN859422)的序列相似度高達(dá)99.79%，與模式菌株(N.macrodidyma) CBS 112615T(GenBank登錄號(hào)：AY677290)序列相似度達(dá)到99.76%，且均與其位于系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹同一分支 (圖4)，并以100%的高支持率與其他(I.macrodidyma)聚為一支，而與其他近緣種距離較遠(yuǎn)。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征，確定引起陜西長安草莓根腐病的病原為土赤殼屬(Ilyonectria)大雙孢土赤殼(Ilyonectriamacrodidyma)，其無性型為大雙孢柱孢(Cylindrocarponmacrodidymum)。

2.5 病原菌生物學(xué)特性

2.5.1 培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長的影響 由圖5可見，病原菌在不同培養(yǎng)基上的菌絲生長速度存在明顯差異。在CMA培養(yǎng)基上病原菌菌絲生長最快，培養(yǎng)至第7天時(shí)，菌落直徑可達(dá)58.17 mm，菌絲平均生長速率為7.31 mm/d。在PDA和PSA上病原菌氣生菌絲較發(fā)達(dá)，培養(yǎng)至第7天表面產(chǎn)生大量孢子，而在其他培養(yǎng)基上氣生菌絲稀疏，孢子產(chǎn)量較低，尤以CMA培養(yǎng)產(chǎn)孢最少。

圖4 基于rDNA-ITS序列的草莓根腐病原真菌CF9系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree of Ilyonectria macrodidyma CF9 and related strains based on rDNA-ITS sequence

圖5 不同培養(yǎng)基上草莓根腐病原真菌CF9菌落直徑Fig.5 Colony diameter of pathogen strain CF9 on different growth media

2.5.2 光照對(duì)菌絲生長的影響 由圖6可知，病原菌CF9菌絲在不同光照條件生長速度存在明顯差異。在全黑暗(24D)條件下培養(yǎng)7 d菌落直徑最大，可達(dá)43.83 mm，菌絲平均生長速率為5.26 mm/d，顯著大于全光照(24L)和光暗交替(12L/12D)條件(P<0.05)，全光照和光暗交替之間無顯著差異(P>0.05)，全黑暗條件利于菌絲生長。

24L為24 h全光照 24L indicates 24 hours light;12L/12D為12 h光照與12 h黑暗交替 12L/12D indicates 12 hours light each day;24D為24 h全黑暗 24D indicates 24 hours darkness one day

圖6不同光照條件下草莓根腐病原真菌CF9菌落直徑
Fig.6ColonydiameterofpathogenstrainCF9underdifferentlighthours

2.5.3 溫度對(duì)菌絲生長及孢子萌發(fā)的影響 由圖7可見，草莓根腐病病原菌CF9在20～30 ℃ 范圍內(nèi)均可生長。在25 ℃下菌落直徑最大，培養(yǎng)至第7天時(shí)，菌落直徑為52.7 mm。在35 ℃下菌落大小未見變化，未見菌絲生長。

由圖8可知，30 ℃條件下病原菌孢子萌發(fā)率最高，12 h孢子萌發(fā)率為68.0%，25 ℃ 12 h的孢子萌發(fā)率為66.2%。表明25～30 ℃是CF9孢子萌發(fā)的最適溫度。

2.5.4 培養(yǎng)基pH對(duì)菌絲生長及孢子萌發(fā)的影響 由圖9可知，培養(yǎng)基pH對(duì)病原菌菌絲生長速度影響顯著。病原菌CF9在培養(yǎng)基pH 3～8內(nèi)均可生長，生長范圍較寬，其中菌絲在pH為4的培養(yǎng)基上生長蔓延最快，至第7天菌落直徑可達(dá)44.67 mm，菌絲平均生長速率為5.38 mm/d，表明菌絲生長嗜酸性。在培養(yǎng)基pH 5～7時(shí)菌落直徑差異不顯著(P>0.05)，菌絲生長速率略低于pH 4條件，第7天菌落直徑可達(dá)34.7～36.3 mm，菌絲平均生長速率為3.95～4.19 mm/d。

圖7 不同培養(yǎng)溫度下草莓根腐病原真菌CF9菌落直徑Fig.7 Colony diameter of pathogen under different temperatures

圖8 不同溫度下病原真菌CF9孢子萌發(fā)率Fig.8 Conidia germination rate of pathogen under different temperatures

圖9 不同培養(yǎng)基pH條件下原真菌CF9菌落直徑Fig.9 Colony diameter of pathogen under different pH conditions

由圖10可見，pH為5、6、7條件下病原菌孢子萌發(fā)率和芽管平均長度均高于其他pH條件，其中pH 7時(shí)最有利于孢子萌發(fā)及芽管伸長，培養(yǎng)3 h和12 h后，孢子萌發(fā)率分別為34.6%和94.8%，芽管平均長度分別可達(dá)33.8 μm和207.9 μm，芽管伸長速率為19.34 μm/h，表明中性偏酸環(huán)境利于病原菌CF9孢子萌發(fā)及芽管生長。

2.5.5 分生孢子致死溫度 由表2可知，病原菌CF9分生孢子在45 ℃條件下處理10 min即失去萌發(fā)能力，因此分生孢子的致死溫度為45 ℃，作用10 min。

圖10 不同pH條件下病原菌CF9孢子萌發(fā)率和芽管長度Fig.10 Conidia germination rate and germ tube length of pathogen under different pH values

溫度/℃ Temperature3540414243444550孢子萌發(fā)率/%Conidia germination rate 76.3±0.537.7±0.330.5±0.421.2±0.68.2±0.52.5±0.200

3 討 論

根腐病是長期危害中國各大草莓種植區(qū)的重要土傳根部病害。草莓根腐病的致病菌種類多，包括絲核菌屬、鐮刀菌屬、輪枝菌屬等20多種[1]。不同地域氣候及土壤栽培環(huán)境下主要致病菌種類往往不同，因此明確不同地域生產(chǎn)環(huán)境中導(dǎo)致草莓根腐病發(fā)生的主要致病菌是實(shí)現(xiàn)草莓栽培可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵問題之一。而目前對(duì)陜西長安區(qū)草莓根腐病發(fā)生的主要病原種類尚不清楚，明確該地區(qū)草莓根腐病的病原對(duì)進(jìn)行病害有效防控具有重要意義。本試驗(yàn)基于病原菌形態(tài)學(xué)特征、rDNA-ITS序列分析及致病性測(cè)定，證明土赤殼屬大雙孢土赤殼(Ilyonectriamacrodidyma)是陜西省長安區(qū)草莓根腐病的主要病原菌，與已報(bào)道的國內(nèi)其他地區(qū)草莓根腐病病原菌不同。土赤殼屬(IlyonectriaP. Chaverri & C. Salgado)及其無性型柱孢屬(CylindrocarponWollenw.)真菌分布廣泛，常見于木本和草本植物根內(nèi)或土壤中[22]，屬于腐生真菌或弱寄生真菌，該屬大多數(shù)種類為植物病原菌，可引起根腐病和黑腐病等[23]。已有研究發(fā)現(xiàn)，土赤殼屬真菌(Ilyonectriaspp.)可導(dǎo)致葡萄藤黑腳病[18-19]、蘋果莖腐病[20]、高麗參銹腐病[24]、三七銹斑病[25]和獼猴桃根腐病[26]等多種作物病害的發(fā)生，但尚未見關(guān)于此菌引起草莓根腐病的報(bào)道。本研究在國內(nèi)首次報(bào)道大雙孢土赤殼對(duì)草莓根系具有較強(qiáng)侵染能力，可引起連作草莓栽培過程中根腐病發(fā)生，而在國內(nèi)其他地區(qū)尚未見報(bào)道，該病原菌是否來源于種苗或周邊其他栽培作物等問題尚需進(jìn)一步研究。

病原菌的生物學(xué)特性與病害發(fā)生規(guī)律密切相關(guān)，是進(jìn)行病害爆發(fā)預(yù)測(cè)與控制的前提。本研究表明，病原菌大雙孢土赤殼營養(yǎng)要求低，在所有供試培養(yǎng)基上均可生長，在CMA培養(yǎng)基上生長最快，但菌絲稀疏較薄，產(chǎn)孢能力弱，在其他培養(yǎng)基上生長速度無顯著差異；黑暗條件培養(yǎng)利于菌絲生長，菌絲最適生長溫度和pH分別為25 ℃和4，分生孢子最適萌發(fā)溫度和pH分別為30 ℃和7，這與長安地區(qū)4月份前后設(shè)施栽培環(huán)境條件較為一致。草莓是一種極易受連作影響的經(jīng)濟(jì)作物，長期單一種植易導(dǎo)致土壤酸化等問題，給病原真菌提供更適宜的土壤環(huán)境，同時(shí)連作土壤肥料不平衡導(dǎo)致植株生長障礙，更易受病原菌侵染。因此，生產(chǎn)上降低棚內(nèi)溫濕度，施用有機(jī)肥調(diào)節(jié)土壤酸堿度可能有助于減輕草莓根腐病發(fā)生。申光輝等[21]在開展本研究的同時(shí)，還從健康草莓植株根際土壤中分離獲得2株具有很好應(yīng)用前景的防病促生真菌灰黃青霉素HF3和土曲霉HF7，并通過盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其防效分別為53.0%和46.9%。