占欣璐 譚布珍 鐘焰英 劉文成 胡 輝 曹 青 何遠(yuǎn)橋

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，南昌 334000)

卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，死亡率卻居于首位。上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer，EOC)是卵巢癌中最主要的組織學(xué)類型，最大限度的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)以及術(shù)后紫杉醇和順鉑(DDP)為主的聯(lián)合化療方案是晚期上皮性卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，超過 25% 的患者在開始治療后6個月復(fù)發(fā)[1]。由于化療的高耐藥率，晚期上皮性卵巢癌患者的5年復(fù)發(fā)率高達70%。研發(fā)新型靶向化療藥物或化療增敏藥物已成為研究熱點。P13K/AKT信號通路在腫瘤細(xì)胞中呈激活狀態(tài)，多項研究證明其與腫瘤多重耐藥性高度相關(guān)，但其具體調(diào)控機制尚不明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯醇(TP)與DDP聯(lián)合應(yīng)用可促進人卵巢癌細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生協(xié)同抗癌作用[2]。TP屬于試驗用品尚未應(yīng)用于臨床，是雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Hook.F.,GTW)的主要活性成份。雷公藤多甙具有抗炎、免疫抑制的作用，是否具有和TP類似的抗腫瘤作用尚待研究。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，集中探討GTW對SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響及其與P13K/Akt/NF-κB信號通路的關(guān)系，從而為GTW應(yīng)用于晚期耐藥性卵巢癌提供更多證據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 SKOV3/DDP細(xì)胞購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫；順鉑購于江蘇豪森藥業(yè)有限公司(國藥準(zhǔn)字：H20040813)；雷公藤多甙購于成都格力普公司；RMPI1640培養(yǎng)基、PBS購于北京索萊寶科技有限公司；胎牛血清購于美國Gibco 公司；細(xì)胞周期試劑盒及Hoechst 33258染色試劑盒購于萬類生物技術(shù)有限公司；總蛋白提取試劑盒及核蛋白提取試劑盒購于賽爾科學(xué)儀器有限公司；BCA蛋白定量試劑盒購于北京普利萊基因技術(shù)有限公司；PI3K、T-Akt、IκBα、NF-κB、Bcl-2抗體購于美國Abcom公司；p-Akt(ser-473)購于美國Cell Signaling Technology公司；ECL發(fā)光試劑盒購于康為世紀(jì)有限公司 。

1.2方法

1.2.1藥液配制及藥物作用濃度的確定 用適量RPMI1640溶液將2 mg/ml的順鉑母液稀釋至10 μg/ml的藥液，包錫紙避光保存于-20℃冰箱備用。稱取適量的雷公藤多苷藥粉,先用適量二甲基亞砜(DMSO)將其溶解,用適量 RPMI1640將 DMSO濃度稀釋至0.1%以下,配制為濃度為3 200 μg/ml的母液,包錫紙避光保存于-20℃ 冰箱備用，臨用前將母液用RPMI1640培養(yǎng)基稀釋成所需濃度。將不同濃度的GTW(0、50、200、800、1 600、3 200 μg/ml)分別處理SKOV3/DDP細(xì)胞24 h，CCK8法檢測SKOV3/DDP細(xì)胞的存活率，利用半數(shù)抑制濃度(IC50)計算出IC50值為1 463 μg/ml，設(shè)置GTW低濃度為50 μg/ml，中濃度為800 μg/ml(接近IC50)，高濃度為3 200 μg/ml,進行藥物干預(yù)實驗。

1.2.2SKOV3/DDP細(xì)胞培養(yǎng)及實驗分組 將人上皮性卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV3/DDP培養(yǎng)于含0.5 μg/ml順鉑、10% 胎牛血清、青霉素和鏈霉素各100 U/ml的RPMI1640培養(yǎng)液中，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶或6孔板中，于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。1～2 d換液或傳代1次，取對數(shù)期細(xì)胞進行后續(xù)實驗。將細(xì)胞隨機分為以下8組：RPMI1640組、10 μg/ml DDP組、50 μg/ml GTW組、800 μg/ml GTW組、3 200 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組。

1.2.3倒置相差顯微鏡下觀察不同濃度GTW及DDP作用24 h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 以每孔約 9×106個細(xì)胞接種于6孔板中,約24 h后細(xì)胞融合度達40%～50%時，按照1.2.2中試驗組藥物度進行加藥處理，藥物作用24 h后在倒置相差顯微鏡下觀察不同試驗組SKOV3/DDP細(xì)胞形態(tài)的變化,并拍照記錄。實驗重復(fù)3次 。

1.2.4Hochest 33258染色法觀察不同濃度GTW及DDP作用24 h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡率 藥物作用細(xì)胞24 h后，用PBS洗2～3遍,棄PBS,于暗室內(nèi)避光將6孔板每孔中加入1 ml染色液,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中30 min。棄染色液,用PBS或培養(yǎng)液洗滌2～3次即可進行熒光檢測。激發(fā)波長為350 nm,發(fā)射波長為460 nm。在倒置熒光顯微鏡下觀察并拍照。于高倍鏡下隨機選取10個高倍視野，每個視野統(tǒng)計500個細(xì)胞中凋亡細(xì)胞數(shù)量,計算其平均值作為每組細(xì)胞的凋亡率。實驗重復(fù)3次。

1.2.5流式細(xì)胞法檢測不同濃度GTW及DDP作用24 h后細(xì)胞周期變化 藥物作用細(xì)胞24 h后，用PBS洗2～3遍,棄PBS，用胰酶消化細(xì)胞,將消化好的細(xì)胞收集至離心管內(nèi),1 000 g 離心5 min,沉淀細(xì)胞;PBS重懸細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106ml-1,1 000 g 離心5 min,沉淀細(xì)胞;加入1 ml 70%的冷乙醇固定過夜,染色前用預(yù)冷的PBS洗去固定液。加入100 μl RNase A,37℃水浴30 min;再加入500 μl Propidium Iodide 染色液混勻,4℃避光30 min。用流式儀檢測分析,記錄激發(fā)波長488 nm處熒光。實驗重復(fù)3次。

1.2.6Western blot檢測各組細(xì)胞PI3K、T-Akt、p-Akt(ser473)、IκBα、NF-κB、Bcl-2蛋白的表達 將約6×106個細(xì)胞接種于90 mm 培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞密度及狀態(tài)良好時，按照1.2.2中試驗組藥物濃度進行加藥處理。收集藥物處理24 h后的細(xì)胞，分別提取細(xì)胞總蛋白及細(xì)胞核蛋白；使用BCA蛋白定量試劑盒及酶標(biāo)儀測出各組蛋白OD值，根據(jù)公式計算SDS的體積，將蛋白濃度調(diào)整至1 000 μg/ml 左右，加入6×loading buffer配成終濃度為1×的蛋白上樣液；在EP管壁上標(biāo)記各組組號，于沸水中煮10 min，置于-20℃冰箱中保存待用；配置6%或10%的分離膠及5%的濃縮膠，4℃冰箱過夜，將蛋白樣品及蛋白Marker按順序上樣，細(xì)胞總蛋白上樣量約20 μg、細(xì)胞核蛋白上樣量約50 μg；以80 V 進行電泳，當(dāng)?shù)鞍譓arker較分散時，調(diào)整電壓為120 V;電泳結(jié)束后，以恒流260 mA進行轉(zhuǎn)膜1.5 h；用TBST配制含10% Difco Skim Milk的封閉液，封閉2 h；漂洗PVDF膜，分別加入含兔抗人PI3K、T-Akt、p-Akt(ser473)、IκBα、NF-κB、Bcl-2、鼠抗人GAPDH、Histone H3的抗體袋中(一抗稀釋比例為1∶1 000)，4℃反應(yīng)過夜；將PVDF膜用TBST洗膜 10 min×3次；用10%脫脂奶粉封閉液配置含羊抗兔、羊抗鼠的二抗孵育液(二抗稀釋比例為1∶10 000)，于室溫孵育1 h；將PVDF膜用TBST洗膜10 min×3次；采用ECL發(fā)光試劑，使用圖像采集儀內(nèi)成像，條帶分析應(yīng)用Quantity One圖像分析軟件?？偟鞍變?nèi)參為GAPDH、核蛋白內(nèi)參為Histone H3。實驗重復(fù) 3 次。

2 結(jié)果

2.1不同濃度GTW及DDP作用24 h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

2.1.1倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 藥物作用24 h，與空白對照組及DDP組相比藥物組可見部分細(xì)胞發(fā)生凋亡樣改變：細(xì)胞皺縮、偽足消失、細(xì)胞由短梭形變?yōu)閳A形、細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮，并可見壞死細(xì)胞脫落漂浮于培養(yǎng)基上；DDP組與空白對照組相較無明顯差異；單藥組及藥物聯(lián)合組與空白對照組相比，發(fā)生凋亡樣改變的細(xì)胞明顯增多，且隨藥物濃度增高而增多；藥物聯(lián)合組發(fā)生凋亡樣改變的細(xì)胞均多于相應(yīng)單藥組，見圖1。

圖1 倒置顯微鏡下觀察不同藥物組作用24 h后SKOV3/DDP細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化(×400)Fig.1 Morphological changes of different drug groups on SKOV3/DDP cells after 24 h under inverted microscope (×400)Note:A.RPMI1640;B.10 μg/ml DDP;C.50 μg/ml GTW;D.800 μg/ml GTW;E.3 200 μg/ml GTW;F.10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW;G. 10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW;H.10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW.

2.1.2熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 藥物作用24 h后，熒光倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，空白對照組細(xì)胞及DDP組細(xì)胞狀態(tài)良好，偽足清晰，淡染、偶可見少量致密濃染細(xì)胞；藥物組細(xì)胞變小、細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度濃縮、凝集、可見細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體；單藥組及藥物聯(lián)合組與空白對照組相比較，濃染細(xì)胞明顯增多，且隨藥物濃度升高而增加；藥物聯(lián)合組濃染細(xì)胞均多于相應(yīng)單藥組，見圖2。

2.2不同濃度GTW及DDP作用24 h后各組平均凋亡率 Hochest染色實驗結(jié)果顯示，10 μg/ml DDP組凋亡率(3.33±0.61)%及50 μg/ml GTW組凋亡率(4.27±0.66)%與空白對照組細(xì)胞凋亡率(2.20±0.20)%相比差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),800 μg/ml GTW組凋亡率(9.67±0.70)%及3 200 μg/ml GTW組凋亡率(17.60±1.20)%與空白對照組凋亡率相比差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，單藥組凋亡率呈濃度依賴性(P<0.05);10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組凋亡率(18.27±1.01)%、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組凋亡率(24.20±0.80)%及10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組凋亡率(38.33±0.50)%與空白對照組凋亡率相比較，凋亡率明顯升高(P<0.001),藥物聯(lián)合組凋亡率均呈濃度依賴性；各藥物聯(lián)合組與相應(yīng)單藥組相比凋亡率明顯升高(P<0.001),見圖3。

圖2 Hochest 33258染色觀察不同藥物組作用24 h后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化(×200)Fig.2 Morphological changes of different drug groups on SKOV3/DDP cells after 24 h by ochest 33258(×200)Note:A.RPMI1640;B.10 μg/ml DDP;C.50 μg/ml GTW;D.800 μg/ml GTW;E.3 200 μg/ml GTW;F.10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW;G.10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW;H.10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW.

圖3 不同藥物組對 SKOV3/DDP 細(xì)胞凋亡率的影響Fig.3 Effect of apoptosis rate of different drug groups on SKOV3/DDP cellsNote:▲.P<0.05;***.P<0.001.

圖4 流式細(xì)胞儀檢測不同藥物組作用24 h后細(xì)胞周期變化Fig.4 Cell cycle changes of different drug groups on SKOV3/DDP cells after 24 h by flow cytometryNote:A.RPMI1640;B.10 μg/ml DDP;C.50 μg/ml GTW;D.800 μg/ml GTW;E.3 200 μg/ml GTW;F.10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW;G.10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW;H.10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW.

圖5 不同藥物組對SKOV3/DDP細(xì)胞周期中S期比例的影響Fig.5 Effects of different drug groups on cell cycle S phase ratio in SKOV3/DDP cellsNote:▲.P<0.05;***.P<0.001.

2.3不同濃度GTW及DDP作用24 h后各組細(xì)胞周期變化 圖4所示，單用GTW、GTW聯(lián)合DDP均可使耐藥性卵巢癌細(xì)胞SKOV3/DDP發(fā)生S期阻滯。10 μg/ml DDP組S期細(xì)胞比例(24.24±2.40)%與空白對照組(19.34±2.83)%相比無明顯差異(P>0.05),50 μg/ml GTW組S期細(xì)胞比例(37.23±0.97)%、800 μg/ml GTW組(38.86±1.71)%、3 200 μg/ml GTW組(43.40±2.09)%、10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組(51.51±0.82)%、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組(53.10±0.48)%及10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組(59.52±2.34)%與空白對照組相比明顯升高(P<0.001);藥物聯(lián)合組S期細(xì)胞比例與相應(yīng)單藥組相比明顯升高(P<0.001)；各組S期細(xì)胞比例升高程度呈濃度依賴性(P<0.05),見圖5。

2.4不同濃度GTW及DDP作用24 h后各組細(xì)胞PI3K、T-Akt、p-Akt(ser473)、 IκBα、NF-κB、Bcl-2蛋白的表達 Western blot結(jié)果顯示：各組細(xì)胞PI3K、T-Akt、IκBα蛋白表達一致，無明顯差異；p-Akt(ser473)、NF-κB、Bcl-2蛋白的表達隨GTW濃度升高，總體呈下降趨勢(P<0.05),GTW與DDP聯(lián)合組表達量顯著低于相應(yīng)單用GTW的藥物組(P<0.05)。其中p-Akt(ser473)蛋白在800 μg/ml GTW組、3 200 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組、 10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組相對表達量均較空白對照組降低(P<0.05)，藥物聯(lián)合組蛋白相對表達量與相應(yīng)單藥組相比較均明顯降低(P<0.01);NF-κB蛋白在800 μg/ml GTW組、3 200 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組、 10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組相對表達量均較空白對照組降低(P<0.05)，其中藥物聯(lián)合組蛋白相對表達量與相應(yīng)單藥組相比較均降低(P<0.05)；Bcl-2蛋白在10 μg/ml DDP組、10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組相對表達量較空白對照組降低(P<0.05)，其中800 μg/ml GTW組與10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組、3 200 μg/ml GTW組與10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW相對表達量比較顯著降低(P<0.01)，見圖6。

圖6 不同藥物組對SKOV3/DDP細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT/NF-κB信號通路的影響Fig.6 Effects of different drug groups on PI3K/AKT/NF-κB signaling pathway in SKOV3/DDP cellsNote:A.RPMI1640;B.10 μg/ml DDP;C.50 μg/ml GTW;D.800 μg/ml GTW;E.3 200 μg/ml GTW;F;10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW;G.10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW;H.10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW.Compared with control group,▲.P<0.05,*.P<0.05;**.P<0.01;***.P<0.001.

3 討論

腫瘤的多重耐藥性是晚期上皮性卵巢癌患者化療失敗的主要原因，近年來，尋求新型化療藥物或提高化療敏感性已成為研究熱點。雷公藤多甙是一種從雷公藤根部提取的脂溶性混合物[3]，雷公藤甲素(TP)[4-6]、雷公藤紅素及雷公藤氯內(nèi)酯醇是其公認(rèn)的抗癌抗炎活性成份。在我國，TP僅被允許作為實驗用品應(yīng)用于科研，以其為主要活性成份的GTW在臨床上廣泛應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎和自身免疫性皮膚病，具有抗炎及免疫抑制作用，安全可靠。近年來多項研究發(fā)現(xiàn)，GTW具有抗腫瘤的作用。Wang等[7]通過體內(nèi)外試驗研究發(fā)現(xiàn)雷公藤多甙可克服前列腺癌多西他賽耐藥并抑制前列腺腫瘤的生長。Zhou等[8]通過體外結(jié)合實驗和酶活性技術(shù)發(fā)現(xiàn)了雷公藤提取物對宮頸癌Hela細(xì)胞作用的特殊靶點。雷公藤多甙是否可抑制耐藥性卵巢癌尚待研究。

本研究選取不同濃度的GTW單藥、順鉑和GTW聯(lián)合給藥作用于人順鉑耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV3/DDP，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定濃度的GTW有誘導(dǎo)耐藥性卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用，隨濃度增加誘導(dǎo)凋亡作用也增強；且GTW有明顯的化療增敏作用，與順鉑聯(lián)用時誘導(dǎo)凋亡作用顯著增強。細(xì)胞周期是細(xì)胞最基本的生命活動，分為G1、 S、G2、M、G0期，腫瘤細(xì)胞中G0期～S期的細(xì)胞周期進程加快,細(xì)胞DNA合成加速,從而使細(xì)胞出現(xiàn)惡性增殖，繼而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。多種化療藥物及輔助化療藥物的作用機制為使腫瘤細(xì)胞阻滯于不同細(xì)胞周期繼而誘發(fā)細(xì)胞程序性死亡。Zhang等[9]研究發(fā)現(xiàn)蘆薈苦素可將卵巢癌細(xì)胞周期阻滯于S期，誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長。Qu等[10]發(fā)現(xiàn)葫蘆素B可將對紫杉醇耐藥的卵巢癌A2780/Taxol細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，可用于紫杉醇耐藥卵巢癌的輔助治療。已有研究表明[11]，順鉑可使SKOV3/DDP細(xì)胞阻滯于S期。本研究結(jié)果中單用順鉑組細(xì)胞周期與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異，但順鉑與GTW聯(lián)合組與單用GTW的藥物組相比較，S期細(xì)胞比例明顯升高(P<0.001)，提示低劑量順鉑與GTW連用可顯著增強GTW的細(xì)胞周期阻滯作用。

PI3K/Akt信號通路廣泛存在于細(xì)胞中，與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)[12]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[4]，耐藥性卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞株中PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白表達量均高于卵巢癌SKOV3細(xì)胞株，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，證明該通路在上皮性卵巢癌細(xì)胞中過度激活，并與腫瘤的耐藥性關(guān)系密切。使用該通路靶向抑制劑LY294002可顯著提高耐藥性肝癌細(xì)胞、耐藥性卵巢癌細(xì)胞、耐藥性非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、耐藥性乳腺癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性[13-15]。該通路被激活后，PI3K處于持續(xù)活化狀態(tài)，Akt磷酸化后的活性形式(p-Akt)可促進腫瘤細(xì)胞生長、增殖;抑制細(xì)胞凋亡;促進細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移;促進其對化療和放療的抵抗。NF-κB是Akt最重要的下游分子之一,它是p50、p65結(jié)合而成的異源二聚體，在多種細(xì)胞中都處于非活化狀態(tài)。 NF-κB二聚體與IκB蛋白結(jié)合，掩蓋其核定位信號，被固定于胞質(zhì)中。典型的IκB蛋白包括IκBα、IκBβ、IκBε，其中IκBα是NF-κB活化過程中最強的負(fù)反饋因子，在經(jīng)典信號通路激活時，IκBα可迅速降解，釋放出NF-κB入核。Bcl-2是Akt下游效應(yīng)分子中公認(rèn)的抑制凋亡的原癌基因,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,現(xiàn)認(rèn)為Bcl-2 的過表達是一些腫瘤產(chǎn)生耐藥性的機制之一[16]。 Baekelandt 等[17]發(fā)現(xiàn) Bcl-2 與化療的原發(fā)抗藥性密切相關(guān),并預(yù)測Bcl-2 對卵巢上皮性腫瘤有抗鉑類作用。本研究使用Western blot法檢測了PI3K/Akt信號通路中的關(guān)鍵因子PI3K、T-Akt、p-Akt(ser473)、 IκBα、NF-κB、Bcl-2，其中p-Akt、NF-κB、Bcl-2表達水平在試驗組給藥后顯著降低，引起級聯(lián)放大效應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。其中800 μg/ml GTW組、3 200 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+50 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+800 μg/ml GTW組、10 μg/ml DDP+3 200 μg/ml GTW組與空白對照組相較明顯下調(diào)(P<0.05);GTW單藥組與相應(yīng)藥物聯(lián)合組相比較，下降程度差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；單藥組及藥物聯(lián)合組之間，下降程度呈濃度依賴性(P<0.05)，由此可見GTW可通過抑制PI3K/Akt/NF-κB信號通路，下調(diào)p-Akt、NF-κB、Bcl-2等信號因子的表達，進而誘導(dǎo)耐藥卵巢癌細(xì)胞凋亡，協(xié)同增加耐藥卵巢癌細(xì)胞對DDP的敏感性，且GTW濃度越高，增敏作用越明顯。

綜上所述，本研究結(jié)果表明一定濃度的GTW可明顯誘導(dǎo)人耐藥性卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡，且GTW與低劑量的DDP聯(lián)用有明顯的化療增敏作用，其機制與誘導(dǎo)細(xì)胞S期阻滯，抑制PI3K/Akt/NF-κB信號通路，下調(diào)p-Akt、NF-κB、Bcl-2等抑凋亡因子表達有關(guān)。雷公藤多甙已廣泛應(yīng)用于臨床，具有副作用溫和、價格低廉等優(yōu)點，是一種有望應(yīng)用于耐藥性卵巢癌治療的化療藥物和順鉑增敏藥物。