王愛(ài)萍　林燕飛　王贊　陶志文

【摘 要】納豆激酶具有非常好的溶血栓作用，具有半衰期長(zhǎng)、血液中半衰期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，來(lái)源于傳統(tǒng)食品納豆，安全可靠，是一種潛在的安全有效的綠色抗血栓藥物，高活性納豆激酶產(chǎn)品技術(shù)的研發(fā)有利于民生健康。源于傳統(tǒng)食品納豆的納豆激酶，可由細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低、安全性好，并且作用迅速，是一種理想的預(yù)防和治療血栓的天然藥物，具有極為誘人的廣闊前景。

【關(guān)鍵詞】抗血栓藥物；納豆激酶；研究概況

中圖分類(lèi)號(hào)： TQ464.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）12-0110-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.12.047

A Review of Nattokinase Research

WANG Ai-ping LIN Yan-fei WANG Zan TAO Zhi-wen

（Sichuan Health Vocational College，Sichuan，Zigong，643000）

【Abstract】Nattokinase has a very good thrombolytic effect，has a long half-life， long half-life in the blood and other advantages， from traditional food natto， safe and reliable，is a potential safe and effective green antithrombotic drugs， high activity The research and development of bean kinase product technology is beneficial to the health of people's livelihood.Nattokinase derived from traditional food natto can be fermented by bacteria. Nattokinase has low cost， good safety，and rapid action.Which is an ideal natural drug for preventing and treating thrombosis，and also has a very attractive prospect.

【Key words】Antithrombotic Drugs；Nattokinase；Research Overview

1 納豆激酶的作用及研究意義

納豆激酶是納豆菌發(fā)酵分泌到細(xì)胞外的一種具有溶纖維蛋白活性的蛋白質(zhì)，由學(xué)者須見(jiàn)洋行于1987年在日本傳統(tǒng)食品納豆中發(fā)現(xiàn)[1]，經(jīng)研究證明納豆激酶具有顯著的溶解血栓的能力。其溶解血凝塊的能力為血纖溶酶的4倍，它不但能直接作用于纖維蛋白，而且還可以誘導(dǎo)肝臟或血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生纖溶酶原激活劑，使生物體自身纖溶系統(tǒng)活化[2]；納豆激酶的半衰期長(zhǎng)，經(jīng)研究其作用時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)8小時(shí)，因其來(lái)源于傳統(tǒng)食品納豆，安全無(wú)毒副作用，所以能夠溫和持續(xù)的提高血液的纖溶活性。

目前研究早已證明，血栓的形成是由血液中纖維蛋白與相關(guān)血細(xì)胞粘在一起導(dǎo)致，而增大的血凝塊會(huì)阻塞血液循環(huán)進(jìn)而引起組織供血不足。這是引起各種心血管病的重要原因。由于纖維蛋白是血栓中的骨架成分，所以分解血栓中的纖維蛋白成分是溶栓工作中的關(guān)鍵。正常生理情況下，機(jī)體血液循環(huán)系統(tǒng)處于凝血過(guò)程和溶栓過(guò)程的動(dòng)態(tài)平衡中，隨著個(gè)體年齡的增加，機(jī)體合成纖維蛋白的功能減退而使凝血過(guò)程加重，凝血和溶栓之間的平衡被打破，這就是老年人更容易出現(xiàn)心血管疾病的原因[3]。

心血管疾病已經(jīng)成為威脅國(guó)民健康需要的重要原因，據(jù)權(quán)威組織調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，在全世界范圍內(nèi)，因心血管疾病而死亡的人數(shù)高達(dá)1700萬(wàn)，明顯超過(guò)呼吸系統(tǒng)疾病、腫瘤和傳染病。到2020年，死于心血管疾病的人數(shù)可能會(huì)超過(guò)2000萬(wàn)。而中國(guó)作為占世界人口數(shù)量六分之一的人口大國(guó)，加之現(xiàn)在又進(jìn)入了老齡化階段，所以對(duì)于心血管疾病的治療和研究已成為擺在國(guó)人面前的一項(xiàng)重大課題，急須加大研究。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，在中國(guó)，每年死于心血管疾病的人數(shù)高達(dá)260萬(wàn)人。這種病不但致殘率和死亡率高，而且很難根治，對(duì)人類(lèi)的健康帶來(lái)了嚴(yán)重的威脅[4]。

目前臨床應(yīng)用的溶栓藥物， 如尿激酶、鏈激酶、重組型纖溶酶原激活劑等，存在半衰期短、用藥量大、對(duì)蛋白纖維的溶解不具有選擇性，用藥量控制不好易導(dǎo)致內(nèi)出血，或易引起超敏反應(yīng)等副作用[5]，所以很難成為面向廣泛的大眾化藥品。而來(lái)源于傳統(tǒng)食品納豆的納豆激酶，可由細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低、安全性好，并且作用迅速，是一種理想的預(yù)防和治療血栓的天然藥物，具有極為誘人的廣闊前景。

2 納豆激酶（NK）的溶栓作用原理

如下圖1所示，納豆激酶主要從四個(gè)方面：通過(guò)溶解纖維蛋白的形式直接溶解血栓；通過(guò)刺激tPA的產(chǎn)生而溶解血栓；通過(guò)改變尿激酶原空間結(jié)構(gòu)使其激活為尿激酶溶解血栓；通過(guò)降解和失活纖維酶原激活劑的抑制劑API-1，從而直接或間接的發(fā)揮溶解血栓的作用。

3 納豆激酶的研究現(xiàn)狀

鑒于納豆激酶本身的特點(diǎn)及其作用，近幾年來(lái)不可避免的成為國(guó)內(nèi)外溶栓藥物的研究熱點(diǎn)。從查閱的文獻(xiàn)和百度搜索的結(jié)果來(lái)看，國(guó)外的研究主要集中在納豆激酶的活性和分離純化等方面，并且已經(jīng)達(dá)到分離純化并分子克隆的水平，同時(shí)對(duì)納豆激酶的生理功效和作用機(jī)理也研究的比較徹底。

國(guó)內(nèi)對(duì)于納豆激酶的研究開(kāi)展的相對(duì)較晚，上個(gè)世紀(jì)九十年代起才開(kāi)始，主要集中在優(yōu)良菌種選育、培養(yǎng)條件的優(yōu)化、分離純化方法的選擇、體內(nèi)外溶栓動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等方面，但都處于摸索階段，至今還未見(jiàn)有將納豆激酶開(kāi)發(fā)成溶栓藥物的報(bào)道。

近幾年，在網(wǎng)上也看到有一些納豆產(chǎn)品相繼問(wèn)世，但是在大眾中的認(rèn)知度較低。對(duì)效果的認(rèn)可度也不是很理想，所以應(yīng)亟需加大對(duì)納豆激酶生產(chǎn)的基礎(chǔ)性研究，這對(duì)防治心血管疾病、保障國(guó)民健康具有重要的社會(huì)效益與經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

4 納豆激酶酶活性測(cè)定方法

在研究NK的過(guò)程中，酶活性的測(cè)定是研究過(guò)程中不可缺少的環(huán)節(jié)，從目前報(bào)道的文獻(xiàn)看來(lái)，納豆激酶活性的測(cè)定主要有以下四種，其優(yōu)缺點(diǎn)分析如下：

4.1 纖維蛋白平板法

該方法操作簡(jiǎn)單，成本低，并且可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品，近年來(lái)對(duì)此方法的改進(jìn)使該方法的測(cè)定精確度有較大的提升，其缺點(diǎn)是溶解圈直徑完全是表觀(guān)值，分辨率低，不同的觀(guān)測(cè)者所測(cè)數(shù)據(jù)有差異，并且溶解圈面積受孵育時(shí)間的影響較大。

4.2 血清平板法

血清平板法是在纖維蛋白平板法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的，其原理是，纖維形成時(shí)在655nm處對(duì)光有最大吸收值，隨著納豆激酶作用時(shí)間的延長(zhǎng)，吸光度值減小，實(shí)驗(yàn)中每半小時(shí)測(cè)定一次吸光度值，然后畫(huà)出吸光度減少同納豆激酶濃度之間的曲線(xiàn)，此法優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快捷、成本低、可信度高，該方法優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，效率高，成本低，樣品消耗小，有較高的可信度，缺點(diǎn)是血栓的制備對(duì)吸光值有一定的影響，實(shí)驗(yàn)誤差較大。

4.3 Flion-酚法

該方法簡(jiǎn)便迅速，成本較低，可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品，但對(duì)納豆激酶的溶栓時(shí)間要求嚴(yán)格，實(shí)驗(yàn)誤差較大。

4.4 四肽底物法

該方法簡(jiǎn)便迅速，成本較低，缺點(diǎn)是有其它酶的干擾，因此測(cè)定值偏低，不能完全反應(yīng)納豆激酶的纖溶活性。

5 結(jié)論

納豆激酶源于傳統(tǒng)食品納豆，由細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低、安全性好，并且作用迅速，具有較好的溶血栓作用，半衰期長(zhǎng)、等優(yōu)點(diǎn)，是一種潛在的安全有效的綠色抗血栓藥物，可以起到預(yù)防和治療血栓的作用且無(wú)副作用，具有廣闊前景的應(yīng)用前景。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Sumi H，Hamada H，Tsushima H，et al.A novel fibrinolytie enzyme（nattokinase）in the vegetable cheese natto atypical and popular soybean food in the Japanese diet[J].Experientia，1987，43：1110-1111.

[2]劉野，蘇杭，宋煥綠等.基于納豆激酶活性的納豆加工條件的優(yōu)化研究[J].食品工業(yè)科技，2016（7）：170-175.

[3]王樂(lè)，王君高.納豆激酶的研究進(jìn)展[J].中國(guó)釀造.2008（10）：1-4.

[4]趙洪，何執(zhí)中.溶栓藥物研究進(jìn)展[J].中國(guó)生化藥物雜志，2003（1）：51-53.

[5]杜冰，姚汝華.血栓溶酶研究進(jìn)展.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，16（4）：291-294.