鄔俊勇，張小蓮，江光榮，揭羽青，潘金平，歐陽致成

（1.宜春市人民醫(yī)院檢驗科，江西 宜春 336000；2.宜春市人民醫(yī)院輸血科，江西 宜春 336000；3.宜春市人民醫(yī)院肝病科，江西 宜春 336000）

慢性乙型肝炎也叫乙肝，是指乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV）檢測陽性，是臨床上常見的傳染性疾病，可通過血液和唾液傳播。主要臨床表現(xiàn)為惡心、乏力、腹脹和肝區(qū)疼痛等[1-2]。據(jù)統(tǒng)計，我國大約有1億的人為乙肝病毒攜帶者，兩千萬慢性乙型肝炎患者，是我國社會負擔最大的疾病之一[3-4]。目前，臨床上對乙肝疾病的檢測主要是乙肝病毒血清標志物（HBV-M）檢測，反應的是人體對乙肝病的免疫狀態(tài)，以不同血清學模式代表不同的意義[5]。隨著分子生物學技術的興起，聚合酶鏈式反應（PCR）和高靈敏HBV-DNA技術在乙肝病毒檢測上獲得了廣泛的應用[6-7]。本研究以臨床收治43例肝炎患者為研究對象，采用普通PCR進行定性檢測和高靈敏HBV-DNA技術進行定量檢測，探討兩種技術在乙肝病毒檢測上的應用價值，以方便知道臨床診斷、用藥和預后判斷。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 以2016年1月～2017年8月宜春市人民醫(yī)院收治的43例肝炎患者為研究對象。Spectra Max M5e多功能酶標儀[美谷分子儀器（上海）有限公司）]，JY-96G梯度基因擴增儀(武漢華科達實驗設備有限公司)，DA7600全自動熒光檢測系統(tǒng)(中山大學達安基因股份有限公司)。乙肝兩對半抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒(中山大學達安基因股份有限公司)。乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（廣州達安基因股份有限公司），乙型肝炎病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑盒（廣州達安基因股份有限公司）。

1.2 方法 乙肝病毒血清標志物檢測：ELISA檢測過程嚴格按照乙肝兩對半抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒說明書進行，使用Spectra Max M5e多功能酶標儀進行讀數(shù)和結果判定。

普通PCR檢測：按照乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒說明書進行。擴增條件如下：95℃預變性5 min，94℃變性1 min，40～60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30個循環(huán)。使用JY-96G梯度基因擴增儀進行基因擴增，電泳檢測。

高靈敏HBV-DNA檢測：嚴格按照乙型肝炎病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑盒說明書進行，高靈敏乙肝HBV-DNA技術：采用通用硅基捕獲技術，在Cobas Amp-liPrep儀器上進行自動化樣品制備，轉移至COBAS Taqman48儀器，使用實時PCR技術自動擴增并檢測。若樣品的C＜20,則該樣品的HBV濃度＜20IU/ml，若樣品的20≤C≤1.70E+008,則該樣品的HBV-DNA濃度=CIU/ml，當結果大于1.70E+008IU/ml，表示高于最高檢測上限需稀釋后再次進行檢測。

1.3 觀察指標 以血清標志物組合為考察指標，對普通PCR和高靈敏PCR技術的擴增結果進行對比分析。

1.4 統(tǒng)計學方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件處理，計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩種技術的陽性率比較 使用普通PCR技術和高靈敏PCR技術對43份肝炎患者的血清進行乙肝病毒檢測，從檢測結果上看，普通PCR檢測的陽性率是0，高靈敏PCR檢測的陽性率是46.5%，兩種方法的檢測結果對比差異有統(tǒng)計學意義（χ2=15.24，P=0.034＜0.05），見表1。

表1 普通PCR和高靈敏PCR檢測結果比較Table 1 Comparison of detection results of common PCR and high sensitive PCR

2.2 兩種檢測方法與血清標志物檢測結果的比較 在血清標志物檢測的15例“大三陽”血清樣本中，普通PCR僅檢測出0例陽性，陽性率為0，高靈敏PCR檢測出10例陽性，陽性率66.67%，陽性率對比差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=9.24，P=0.143＜0.05）；13例“小三陽”血清樣本中，普通PCR僅檢測出0例陽性，陽性率為0%，高靈敏PCR檢測出7例陽性，陽性率53.85%，陽性率對比差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=9.12，P=0.157＜0.05）；8例“小二陽”血清樣本中，普通PCR僅檢測出0例陽性，陽性率為0%，高靈敏PCR檢測出3例陽性，陽性率37.5%，陽性率對比差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=8.34，P=0.017＜0.05），見表2。

表2 兩種PCR檢測方法與血清標志物檢測結果的比較Table 2 Comparison of two PCR detection methods with serum marker detection results

3 討論

乙肝病毒血清標志物檢測是臨床上最常用的檢測方法。感染病毒時出現(xiàn)多種免疫應答過程，得到不同的結果組合，該檢測雖能定性檢測到乙肝表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體和核心抗體的陰性或者陽性結果，但并不能反應出病毒在患者體內的復制情況和傳染程度，無法指導臨床用藥和治療[8]。隨著分子生物學的興起，熒光定量PCR技術在乙肝病毒檢測過程中，可以直接反映出病毒的復制情況，具有快讀、特意、靈敏度高的優(yōu)勢，在臨床上獲得廣泛的關注。姚兆基[9]采用實時熒光PCR法檢測76例乙肝患者的結果可見，大三陽的檢出率最高，達到96.15%，顯著高于其他的組合，作者通過研究認為，RT-PCR和ELISA法聯(lián)合可提高臨床的診斷率，為藥物治療提供參考。本研究中，普通PCR檢測的陽性率是0%，高靈敏PCR檢測的陽性率是46.5%，兩種方法的檢測結果對比差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）；在血清標志物的檢測結果組合中，高靈敏PCR檢測的“大三陽”、“小三陽”和“小二陽”的陽性率都顯著高于普通PCR的檢測結果，這和文獻報道的結果一致[10]。

綜上所述，與普通PCR相比，高靈敏PCR法可以檢測出患者的免疫狀況和病毒傳染性的強弱，而且靈敏性更高，可用于指導臨床患者用藥和判斷預后。