郭玉霞,鄭繪霞

(1暨南大學(xué)第二附屬醫(yī)院-深圳市人民醫(yī)院婦科,深圳 518020；2山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院病理科;*通訊作者,E-mail:huixiazheng62@126.com)

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤,其中以子宮內(nèi)膜樣腺癌較多見,子宮內(nèi)膜癌是多因素共同作用的結(jié)果,然而具體致病因素目前尚無明確定論[1,2]。生長抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是生長抑制因子家族的一員,有大量研究表明ING4基因在多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)[3-5],本研究通過免疫組化方法研究ING4基因與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本來源

選擇2006-01～2018-06深圳市人民醫(yī)院及山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院病理科存檔的子宮內(nèi)膜樣腺癌75例,子宮內(nèi)膜不典型增生20例。按照2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn),子宮內(nèi)膜樣腺癌患者病理分期I-Ⅱ期44例、Ⅲ-Ⅳ期31例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。隨機(jī)選擇同醫(yī)院同期的正常子宮內(nèi)膜組織30例作為對照。取材前均未接受放療、化療或激素治療。

1.2 試劑

兔抗人ING4多克隆抗體購自Santa Cruz公司。

1.3 免疫組織化學(xué)

所有石蠟標(biāo)本進(jìn)行切片,切片厚度4 μm。采用SP法檢測ING4蛋白的表達(dá)情況,工作濃度是1 ∶100。以無菌PBS液代替一抗作為陰性對照,DAB顯色。

結(jié)果判定:ING4蛋白的陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核,以著色為棕黃色細(xì)顆粒狀為標(biāo)準(zhǔn),每張切片隨機(jī)選取5個視野(×40),計數(shù)500個細(xì)胞,陽性細(xì)胞1%-25%為1分,25%-50%為2分,50%-75%為3分,76%-100%為4分。陽性強(qiáng)度:無色為0分,淡黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分。二者之和0-2分為陰性,>2分為陽性[6,7]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理,組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

ING4蛋白主要表達(dá)在胞核,出現(xiàn)黃色或棕黃色的細(xì)小顆粒著色為陽性細(xì)胞。本研究通過免疫組化方法檢測了ING4蛋白在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況,ING4在正常子宮內(nèi)膜組織中高表達(dá),在不典型子宮內(nèi)膜增生組織和子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中表達(dá)下調(diào),表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(90.0%vs70.0%vs37.3%,見圖1)。

A.正常子宮內(nèi)膜 B.子宮內(nèi)膜不典型增生 C.子宮內(nèi)膜樣腺癌圖1 ING4蛋白在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) (SP,×100)Figure 1 Expression of ING4 in endometrial carcinoma (SP,×100)

ING4蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)呈下降趨勢,ING4蛋白在不同組別間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,見表1);ING4蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與病理分期、組織學(xué)分級和肌層浸潤有關(guān),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)(P>0.05,見表2)。

表1ING4在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況

Table1TheexpressionofING4indifferentendometrialcarcinoma

組織類型nING4+-χ2P正常子宮內(nèi)膜3027326.1440.001子宮內(nèi)膜不典型增生20146子宮內(nèi)膜樣腺癌752847

3 討論

近年來發(fā)現(xiàn)一種腫瘤抑制因子為生長抑制因子家族,包括5個亞型:ING1、ING2、ING3、ING4、ING5[8]。ING4又稱為p21ING4,是研究最廣泛的基因,定位于染色體12p13.31,編碼249個氨基酸的蛋白質(zhì)[9]。研究表明ING4能調(diào)控細(xì)胞的凋亡、增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲、血管生成、缺氧適應(yīng)等[10]。目前有大量研究表明ING4與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),比如肺癌[3]、結(jié)腸癌[7]、胃癌[4]和頭頸鱗狀細(xì)胞癌[5]等。但在國內(nèi)有關(guān)ING4與子宮內(nèi)膜癌的研究還相對較少,因此,本研究通過免疫組化方法研究ING4對子宮內(nèi)膜癌的作用,此外為子宮內(nèi)膜癌提供新的治療靶點。

表2ING4在子宮內(nèi)膜癌組織中與臨床參數(shù)的比較

Table2RelationshipsbetweentheexpressionofING4andclinicopathologicparametersinendometrialcarcinoma

臨床病理特征nING4+-χ2P病理分期13.4800.001 Ⅰ-Ⅱ期442420 Ⅲ-Ⅳ期31427組織學(xué)分級5.8140.016 高/中分化552530 低分化20317肌層浸潤6.4210.011 無或淺452223 深30624淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.2090.648 無431726 有321121

曹芳等[11]通過實時熒光定量PCR檢測了3種乳腺癌細(xì)胞株中ING4 mRNA的表達(dá)情況,結(jié)果顯示3種乳腺癌細(xì)胞株中ING4的表達(dá)均明顯低于正常乳腺組織,說明ING4基因與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),能抑制乳腺癌腫瘤細(xì)胞的生長。張萌等[12]通過免疫組化法檢測了ING4在膀胱尿路上皮癌、癌旁組織及膀胱正常黏膜組織中的表達(dá),結(jié)果顯示ING4在膀胱正常黏膜組織和癌旁組織中的表達(dá)高于膀胱尿路上皮癌,腫瘤分級及臨床分期越高,ING4表達(dá)水平下降,提示ING4與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。我們通過免疫組化方法對ING4蛋白對正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況進(jìn)行了分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),ING4在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織中呈現(xiàn)了明顯的細(xì)胞核的陽性表達(dá),而在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。ING4蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中,腫瘤肌層浸潤越深,ING4的表達(dá)越低;低分化組較中高分化組的表達(dá)下降;Ⅲ-Ⅳ期較Ⅰ-Ⅱ期的表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)。這些結(jié)果與ING4在乳腺癌和膀胱尿路上皮癌中研究結(jié)果一致,ING4在子宮內(nèi)膜癌和不典型增生中的表達(dá)有不同程度的丟失,ING4的基因突變或表達(dá)異常甚至缺失可能參與了啟動子宮內(nèi)膜癌的惡變過程。

關(guān)于ING4在子宮內(nèi)膜癌中作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。進(jìn)一步對ING4的相關(guān)信號傳導(dǎo)通路進(jìn)行研究,有可能為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。ING4也有可能為子宮內(nèi)膜癌早期診斷、早治療提供新的方向。