趙婭南，肖 霞

(1.北京市大興區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科 100076；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院檢驗科，長春 130041)

乙型肝炎常規(guī)的5項檢測是目前臨床對乙型肝炎的主要診斷手段，可從不同的角度反映乙型肝炎病毒(HBV)感染情況，但在評估患者治療效果和病毒的復(fù)制情況等方面仍存在局限[1]。HBV-DNA為雙鏈的DNA，它可分成短正鏈(S)與長負鏈(L)兩個股，S區(qū)為L鏈其中的一個讀碼區(qū)，其又分成S、S1和S2共3個區(qū)域，其中前S1抗原(PreS1)為S1區(qū)域內(nèi)109～118個氨基酸，前S2抗原(PreS2)為S2區(qū)域內(nèi)56個氨基酸[2]。PreS1和PreS2作為血清標(biāo)志物已在臨床上被廣泛使用，其檢測一般使用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法。當(dāng)前，關(guān)于PreS1與PreS2的相關(guān)研究較多，但關(guān)于HBV-DNA和PreS、PreS2相關(guān)性報道卻較少，其聯(lián)合檢測是否比單項檢測更具臨床意義，這一問題也尚無定論，故本研究對PreS1及PreS2進行單項和聯(lián)合檢測，并分別比較和HBV-DNA的關(guān)聯(lián)情況。

1 資料與方法

1.1一般資料 以北京市大興區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院2015年4年至2017年4月收治的436例慢性乙型肝炎患者為研究對象，其中女203例，平均(45.2±10.8)歲；男233例，平均(46.8±9.2)歲。所有患者均符合《慢性乙型肝炎的防治指南》中慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2儀器與試劑 PCR檢測儀由廈門安普利公司生產(chǎn)，型號為Genelight 9800型。PreS1試劑盒由上海科華生物公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為20150204-20160702；PreS2試劑盒由北京貝爾生物公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為20150107-20160902。

1.3方法 清晨收集所有研究對象空腹靜脈血清標(biāo)本，采用ELISA法檢測PreS1、PreS2，并進行乙型肝炎5項定性檢測；熒光定量的PCR法檢測HBV-DNA。當(dāng)HBV-DNA<500 copies/mL判定為陰性。

2 結(jié) 果

2.1不同感染模式下乙型肝炎感染情況 不同感染模式下PreS1、PreS2和HBV-DNA檢測的結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同感染模式下乙型肝炎感染患者PreS1及PreS2和HBV-DNA檢測情況比較[n(%)]

注：大三陽為表面抗原、e抗原、核心抗體陽性；小三陽為表面抗原、e抗體、核心抗體陽性

2.2HBV-DNA與PreS1、PreS2的關(guān)系 436例患者HBV-DNA陰性共166例，陽性270例，PreS1及PreS2在HBV-DNA陽性患者中檢出率均高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；PreS1、PreS2和HBV-DNA呈正相關(guān)(r=0.289、0.330)；隨著HBV-DNA拷貝數(shù)增加，PreS1及PreS1陽性率隨之升高。見表2。

表2 HBV-DNA的載量與PreS1、PreS2關(guān)系[n(%)]

注：與0～500 copies/mL組比較，*P<0.05

2.3HBV-DNA、PreS1及PreS2與乙型肝炎e抗原關(guān)系 436例患者中乙型肝炎e抗原陰性352例，陽性84例，乙型肝炎e抗原陽性患者HBV-DNA、PreS1及PreS2檢出率均明顯高于乙型肝炎e抗原陰性患者檢出率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 HBV-DNA、PreS1及PreS2與乙型肝炎e抗原關(guān)系(n)

2.4PreS1及PreS2在患者中HBV-DNA檢測情況 單獨PreS1檢測陽性172例，單獨PreS2檢測陽性146例，兩者聯(lián)合檢測均為陽性118例。兩者聯(lián)合檢測均為陽性的患者HBV-DNA陽性檢出率[83.90%(99/118)]明顯高于單獨PreS2檢測陽性的HBV-DNA陽性檢出率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；略高于單獨PreS1檢測[80.81%(139/172)]，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；單獨PreS1檢測陽性中HBV-DNA陽性檢出率高于單獨PreS2檢測[58.22%(85/146)]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

臨床對乙型肝炎的診斷主要檢測項目為HBV血清學(xué)標(biāo)志物，它們在乙型肝炎診斷治療、轉(zhuǎn)化及預(yù)后的評估等方面有重要的影響。伴隨著實驗診斷學(xué)、生物學(xué)和免疫學(xué)等學(xué)科研究領(lǐng)域的不斷深入，以及對HBV標(biāo)志物研究的發(fā)展與完善，PreS1與PreS2受到越來越多的關(guān)注[4]。

HBV的核心抗原中可溶性的成分為乙型肝炎e抗原，它和HBV-DNA與DNA P區(qū)的聯(lián)系比較緊密，主要用來判別HBV的感染、傳染性和復(fù)制情況。由DNA負鏈中S區(qū)域內(nèi)前S1、S2基因與S抗原及PreS1、PreS2組成了乙型肝炎病毒衣殼的蛋白。HBV主要通過黏附在PreS1內(nèi)肝細胞膜的受體而進入到肝細胞，故后者在患者的免疫應(yīng)答與肝細胞的感染等方面有著重要影響[5]。在患者感染的周期內(nèi)，直到病程轉(zhuǎn)歸，PreS1均可以對宿主體液的免疫情況進行反映。PreS1不但可以顯示體內(nèi)的病毒復(fù)制情況，還可以顯示出病毒傳染性強弱與復(fù)制繁殖的能力，反映出患者肝臟病理的進程。此外，檢測PreS1還能夠避免患者體內(nèi)肝細胞基因與HBV結(jié)合后難以在血清中檢測的局限[6]。近年來，有研究顯示PreS2對HBV吸附肝細胞有間接的介導(dǎo)作用，PreS2是血清內(nèi)清蛋白受體所處位置，HBV要經(jīng)過血清內(nèi)聚合清蛋白的介導(dǎo)才能黏附到肝細胞的表層，所以提出了病毒增值和PreS2有聯(lián)系[7]。

本文研究顯示，不同感染模式下PreS1、PreS2和HBV-DNA檢測的結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但大三陽的檢出率高于其他檢測方式。436例患者中，PreS1及PreS1在HBV-DNA陽性患者中的檢出率高于HBV-DNA陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明判別病毒的復(fù)制方面HBV-DNA的檢測要好于PreS1和PreS1。HBV-DNA、PreS1及PreS2在乙型肝炎e抗原陽性組中檢出率高于陰性組，這和當(dāng)前多數(shù)的研究一致[8-10]?；颊哐鍍?nèi)乙型肝炎e抗原由陽性到陰性轉(zhuǎn)變過程中，病毒復(fù)制情況逐步降低，PreS1及PreS2表達量也對應(yīng)降低，說明PreS1及PreS2可作為評判病毒復(fù)制與感染指標(biāo)。在實際工作中，通常把乙型肝炎e抗原由陽性到陰性的轉(zhuǎn)化當(dāng)做檢測患者療效標(biāo)準(zhǔn)，而研究中發(fā)現(xiàn)乙型肝炎e抗原與PreS1和PreS1有伴隨的關(guān)系，那么PreS1及PreS2由陽到陰，也有同樣意義，在判斷患者療效和預(yù)后等方面有重要價值[8-10]。KINKERT等[11]的研究顯示，急性的感染患者當(dāng)中乙型肝炎e抗原和PreS1同時出現(xiàn)與消失，所以PreS1有助于乙型肝炎患者前期的診斷，還可作為HBV傳染性與復(fù)制的檢測指標(biāo)。很多相關(guān)研究顯示，PreS2可作為HBV病毒復(fù)制、感染嚴(yán)重性的檢測指標(biāo)。在乙型肝炎患者體內(nèi)，若PreS2表現(xiàn)為持續(xù)性陽性則說明有慢性的肝炎活動，如果PreS2檢測為較低的滴度，則說明乙型肝炎e抗原消失，體內(nèi)有乙型肝炎e抗體的產(chǎn)生。另外，在乙型肝炎e抗原陽性患者中，仍有患者未檢測出的PreS1和PreS2，這可能是由于PreS1和PreS2前S區(qū)域內(nèi)有較為復(fù)雜拓撲的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致前S的試劑盒靈敏度降低[12]。同樣HBV-DNA也有未檢測出的現(xiàn)象，這可能是因為標(biāo)本內(nèi)有TaqDNA的聚合酶抑制物存在，或者HBV發(fā)生了基因突變。同樣，在乙型肝炎e抗原的陰性組內(nèi)，HBV-DNA、PreS2及PreS1也能夠被檢測出來，提示乙型肝炎e抗原為陰性也不能夠把病毒的感染與復(fù)制情況排除，出現(xiàn)此類情況可能和乙型肝炎病毒的基因結(jié)合或突變有聯(lián)系；部分急性的乙型肝炎患者乙型肝炎e抗原在治療后的血清內(nèi)發(fā)生了轉(zhuǎn)變，但實際機體沒有完全抑制病毒的復(fù)制；還有一個因素是檢測乙型肝炎e抗原有“窗口期”現(xiàn)象，乙型肝炎潛伏的末期一般會出現(xiàn)乙型肝炎e抗原，而急性感染發(fā)生時，乙型肝炎e抗原沒有及時地進行表達，所以在檢測中未能發(fā)現(xiàn)。有研究報道顯示，患者在進行抗病毒的治療以后，部分慢性乙型肝炎患者血清內(nèi)發(fā)生了乙型肝炎e抗原的轉(zhuǎn)變，e抗體出現(xiàn)，但對患者HBV-DNA進行PCR的檢測時仍能檢測出陽性，說明患者體內(nèi)的乙型肝炎病毒依然存在復(fù)制的活躍情況[13]。

綜上所述，PreS1、PreS2和HBV-DNA存在明顯相關(guān)性，可作為判斷HBV病毒復(fù)制與感染的重要指標(biāo)。在沒有條件進行HBV-DNA的定量或定性檢測的基層醫(yī)院，可以通過對PreS1和PreS2的檢測來彌補。