劉培剛 張宏建 胡恩瑩 梁衛(wèi)青 浦錦寶#

1 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

關(guān)鍵詞 綠威膠囊 乙醇 胃潰瘍 胃黏膜 抗氧化 小鼠

綠威膠囊以葉綠素銅鈉鹽和蠶蛹復(fù)合氨基酸（經(jīng)水解提取精制而得）為主，輔以薏苡仁、茯苓及山楂等[1]，能促進(jìn)損傷組織愈合、治愈潰瘍及保護(hù)胃黏膜。本實(shí)驗(yàn)旨在研究綠威膠囊抵抗胃潰瘍的作用，探討其可能的作用機(jī)理，為綠威膠囊保健應(yīng)用和功能拓展提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物：綠威膠囊，浙江紅綠生源健康生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：171016；奧美拉唑腸溶片，浙江金華康恩貝生物制藥有限公司，批號(hào)：JA1701004。

1.2 動(dòng)物：雄性SPF級(jí)BALB/c小鼠60只，體重20±2g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0011，分籠飼養(yǎng)，自由飲水和攝食，5天后開始實(shí)驗(yàn)，控制室溫22±2℃，濕度55±15%。

1.3 儀器：JJ-12J型脫水機(jī)、JB-P5包埋機(jī)，武漢俊杰電子有限公司；ROTAZ型超薄切片機(jī)，德國徠卡公司；烤箱，上海福瑪實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；倒置熒光顯微鏡成像系統(tǒng)，日本尼康公司；5430R型離心機(jī)，德國艾本德股份公司；Power Wave XS2型酶標(biāo)儀，美國BioTek公司；pH精密試紙（0.5～5.0），杭州特種紙業(yè)有限公司。

1.4 動(dòng)物分組和給藥：BALB/c小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，包括：正常對(duì)照組（生理鹽水）、模型對(duì)照組（生理鹽水）、陽性對(duì)照組（奧美拉唑20mg/kg）、綠威膠囊低劑量組（20mg/kg）、綠威膠囊中劑量組（40mg/kg）、綠威膠囊高劑量組（80mg/kg）；連續(xù)進(jìn)行灌胃給藥6天，每日1次，第5次給藥后禁食24h，自由飲水，末次給藥30min后，給予70%乙醇0.1ml/只，構(gòu)建胃潰瘍模型，正常組灌胃給予相同劑量的生理鹽水，4小時(shí)之后眼球采血，制備血清后備用。

1.5 髓過氧化物酶（MPO）的活性和丙二醛（MDA）的含量測(cè)定：造模1h后摘眼球取血，3000r/min和4℃條件下制備血清留作備用；離心后的血清用生理鹽水5倍稀釋后取20μl，按MPO及MDA測(cè)定試劑盒說明書測(cè)定其A值并計(jì)算含量（波長為450nm）。

1.6 胃黏膜觀察：頸椎脫臼法將小鼠處死后剖腹快速取出胃，在賁門處使用精密pH試紙測(cè)定pH值。幽門與賁門結(jié)扎后將1.5ml 10%甲醛注入小鼠胃腔中，小鼠胃固定10～15min后，沿大彎剪開用生理鹽水沖洗干凈后展平并將水分吸干以備后續(xù)檢測(cè)。觀察胃黏膜損傷情況。利用游標(biāo)卡尺對(duì)小鼠的潰瘍面積進(jìn)行精密計(jì)算：按Gut h標(biāo)準(zhǔn)展開潰瘍指數(shù)及抑制率的計(jì)算[2]。潰瘍抑制率=（平均模型組UI-平均實(shí)驗(yàn)組UI）/平均模型組UI×100%。

1.7 胃組織形態(tài)學(xué)觀察：取相同10%甲醛溶液浸泡小鼠胃組織部位采用常規(guī)石臘包埋，4μm切片，HE染色后通過光鏡進(jìn)行胃部組織學(xué)變化的觀察。

2 結(jié)果

2.1 綠威膠囊對(duì)胃潰瘍的影響：正常組小鼠胃黏膜色澤較紅潤，表面光滑且無損傷，未見出血點(diǎn)；模型組小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重潰瘍，都有條索狀或點(diǎn)狀出血。與模型組比較，綠威膠囊各劑量組和奧美拉唑組小鼠胃黏膜點(diǎn)狀出血和損傷程度均有不同程度減輕。且在綠威膠囊各劑量組中均能發(fā)現(xiàn)在胃潰瘍部位形成葉綠素鹽保護(hù)膜進(jìn)行保護(hù)。

2.2 胃黏膜潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率比較：見表1。

表1 綠威膠囊對(duì)乙醇致小鼠急性胃潰瘍的影響（）

表1 綠威膠囊對(duì)乙醇致小鼠急性胃潰瘍的影響（）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 胃液pH值變化比較：相比正常組，乙醇誘導(dǎo)急性胃潰瘍小鼠胃液pH顯著降低。綠威膠囊各劑量組與模型組比較，均可抑制胃酸分泌，與正常組和奧美拉唑組比較均無明顯差異，且在中高劑量組中部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果略高于正常組和奧美拉唑組。說明綠威膠囊各劑量組均能提高胃潰瘍小鼠胃內(nèi)pH值。結(jié)果見圖1。

圖1 各組小鼠胃內(nèi)pH值比較

2.4 胃組織病理切片HE染色：正常組小鼠胃黏膜層結(jié)構(gòu)連續(xù)完整；表層上皮黏液細(xì)胞正常，沒有壞死及出血現(xiàn)象。模型組小鼠胃黏膜上皮腺體減少現(xiàn)象清晰可見，出血及壞死現(xiàn)象發(fā)生，肌層肉芽組織增生，大部分區(qū)域微黏膜的上皮細(xì)胞出現(xiàn)大量脫落的狀況，胃底腺結(jié)構(gòu)紊亂且黏膜下層增厚。與模型組比較，綠威膠囊各劑量組和奧美拉唑治療后胃黏膜均有不同程度的減輕，可見大部分區(qū)域結(jié)構(gòu)清晰，無血管擴(kuò)張和上皮細(xì)胞脫落，未見壞死及出血，但可見不同程度的腺體減少。見圖2。

圖2 各組小鼠胃組織病理切片比較（HE染色）

2.5 綠威膠囊對(duì)胃潰瘍小鼠血液中MPO及MDA含量的影響：模型組中MPO含量較正常組降低（P＜0.01），MDA含量升高（P＜0.01）；與模型組比較，綠威膠囊各劑量組MPO均升高（P＜0.01），但對(duì)MDA含量未表現(xiàn)出明顯影響，其中只有高劑量具有明顯降低作用（P＜0.01），說明綠威膠囊能升高乙醇引起的急性胃潰瘍小白鼠胃組織的MPO含量，一定程度上降低小鼠胃組織MDA的含量。結(jié)果見表2。

表2 綠威膠囊對(duì)血液中MPO和MDA含量的影響（）

表2 綠威膠囊對(duì)血液中MPO和MDA含量的影響（）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，某些特殊原因?qū)е挛杆?、胃蛋白酶等攻擊因子增?qiáng)或者胃黏膜保護(hù)因子降低使得局部黏膜的抵抗力明顯降低，從而導(dǎo)致胃潰瘍發(fā)生[3]。高度酒精作為一種攻擊因子，不僅能引起體內(nèi)產(chǎn)生大量的氧自由基及MDA，還對(duì)MPO起抑制作用，從而引起胃黏膜受損[4]。綠威膠囊的主要成分葉綠素銅鈉鹽是從中藥蠶砂中提取而來，經(jīng)過脫鎂離子并用銅離子取代獲得的葉綠素衍生物，能促進(jìn)損傷組織愈合、治愈潰瘍和保護(hù)胃黏膜。

以往研究表明，中性粒細(xì)胞浸潤在胃黏膜炎癥和損傷的發(fā)展中至關(guān)重要。通過MPO進(jìn)入中性粒細(xì)胞的含量可以對(duì)胃黏膜組織進(jìn)行評(píng)估。MDA是多不飽和脂肪酸的最終產(chǎn)物，它通常被用作評(píng)估胃黏膜脂質(zhì)過氧化的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常對(duì)照組小鼠潰瘍面積明顯小于模型對(duì)照組小鼠，說明成功構(gòu)建了急性胃潰瘍小鼠模型。綠威膠囊各劑量組均可以明顯減小乙醇所誘導(dǎo)的急性胃潰瘍小鼠模型的潰瘍面積，顯示綠威膠囊具有不錯(cuò)的胃保護(hù)功效。通過測(cè)定MPO和MDA含量，表明綠威膠囊各劑量組均能顯著增加乙醇誘發(fā)急性胃損傷小鼠模型胃組織中的MPO含量及一定程度降低小鼠胃組織的MDA含量。結(jié)果證實(shí)綠威膠囊可能通過胃黏膜的保護(hù)、氧自由基的清除及脂質(zhì)過氧化抑制而起到對(duì)胃潰瘍保護(hù)功效。