童鳳軍 胡駕云 馮 剛

浙江省青春醫(yī)院 浙江 杭州 310016

本文通過(guò)檢測(cè)人體內(nèi)分泌的γ-干擾素，探討其與肺結(jié)核診斷及中醫(yī)辨證分型之間的關(guān)系，以期為肺結(jié)核的診斷和證侯分析提供一定的參考指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2015年1月至2016年12月本院住院確診肺結(jié)核的病人115例，其中男92例，女23例，年齡17～63歲。30例否認(rèn)結(jié)核暴露接觸史的單純呼吸系統(tǒng)感染者作為對(duì)照組。肺結(jié)核診斷參考《臨床診療指南：結(jié)核病分冊(cè)》（2009版）。肺結(jié)核的中醫(yī)辨證分型參考《中醫(yī)內(nèi)科學(xué)》（2003版）。115例肺結(jié)核患者中肺陰虧損證者35例，其中男28例，女7例，年齡17～52歲，平均35.46±10.16歲；虛火灼肺證者32例，其中男26例，女6例，年齡19～63歲，平均33±10.96歲；氣陰耗傷證者28例，其中男23例，女5例，年齡19～61歲，平均38.10±14.25歲；陰陽(yáng)虛損證者20例，其中男15例，女5例，年齡22～55歲，平均39.47±11.19歲。四組年齡及性別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具可比性。

1.2 γ-干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)：具體如下。

1.2.1 標(biāo)本采集：用肝素抗凝的真空采血管采集不低于4ml的全血標(biāo)本，采集后的全血標(biāo)本2小時(shí)之內(nèi)加到培養(yǎng)管中進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.2 γ-干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)方法：采用北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒（批號(hào)20040097），按以下步驟檢測(cè)：①γ-干擾素的體外釋放：在2小時(shí)內(nèi)將全血標(biāo)本分裝入3種培養(yǎng)管中培養(yǎng)22小時(shí)，培養(yǎng)后的培養(yǎng)管離心后取上清液進(jìn)行ELISA檢測(cè)。②γ-干擾素的定量檢測(cè)：用新鮮去離子水或注射用水溶解校準(zhǔn)品，得到400pg/ml的濃度，然后用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋后分別得到200pg/ml、100pg/ml、50pg/ml、25pg/ml、12.5pg/ml。對(duì)受試者的培養(yǎng)血漿、校準(zhǔn)品及空白對(duì)照分別編號(hào)，在相應(yīng)孔中加入樣品稀釋液20μl及待測(cè)樣品50μl，用封板膜封板后，置37℃溫育60分鐘，每孔加入酶標(biāo)示劑50μl后再次封板膜封板，置37℃溫育60分鐘。溫育后洗滌5遍，每孔加入顯色劑A、B各50μl，37度避光顯色15分鐘，再予每孔加終止液50μl，10min內(nèi)用酶標(biāo)儀檢測(cè)在波長(zhǎng)450nm下經(jīng)空白調(diào)零后的各孔A值。以測(cè)得值大于14pg/ml作為陽(yáng)性表達(dá)，小于14pg/ml作為陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，各組檢測(cè)值比較采用t檢驗(yàn)及單因素方差分析。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組γ-干擾素釋放試驗(yàn)表達(dá)比較：結(jié)核組陽(yáng)性數(shù)92例，陽(yáng)性率80.0%，檢測(cè)值134.69±17.05；對(duì)照組陽(yáng)性數(shù)8例，陽(yáng)性率26.7%，檢測(cè)值22.37±6.63。陽(yáng)性率及檢測(cè)值明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2 肺結(jié)核不同證型γ-干擾素釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率和檢測(cè)值比較：見(jiàn)表1。

表1 γ-干擾素釋放試驗(yàn)在肺結(jié)核不同證型中陽(yáng)性率和檢測(cè)值比較

3 討論

肺結(jié)核，中醫(yī)稱(chēng)之為肺癆，其致病因素，不外內(nèi)外兩端。外因系指癆蟲(chóng)傳染，內(nèi)因系指正氣虛弱，兩者往往互為因果。肺癆的中醫(yī)證型共分肺陰虧損、虛火灼肺、氣陰耗傷及陰陽(yáng)虛損四證。γ-干擾素釋放試驗(yàn)被認(rèn)為是近年來(lái)結(jié)核病診斷方面的一個(gè)重大突破，通過(guò)定量檢測(cè)γ-干擾素含量或計(jì)數(shù)分泌γ-干擾素的T淋巴細(xì)胞數(shù)量來(lái)判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌特異性活化的效應(yīng)T細(xì)胞，從而判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌感染。本研究結(jié)果顯示，γ-干擾素釋放試驗(yàn)在肺癆患者中陽(yáng)性率及檢測(cè)值均有較高表達(dá)，而在非肺癆患者中表達(dá)明顯下降，提示γ-干擾素釋放試驗(yàn)在肺癆患者中有較高的敏感性和特異性，可以作為診斷肺癆的一個(gè)重要參考指標(biāo)。在肺癆四個(gè)中醫(yī)證型中，陽(yáng)性率和檢測(cè)值在肺陰虧損、虛火灼肺、氣陰耗傷和陰陽(yáng)虛損四組中依次下降，其中肺陰虧損組和陰陽(yáng)虛損組表達(dá)差異有顯著性（P＜0.05）。考慮從肺癆疾病進(jìn)程來(lái)看，肺陰虧損證多在肺癆初期，病損主要在肺；虛火灼肺證主要在肺癆中期，病程較長(zhǎng)；氣陰耗傷證多見(jiàn)于肺癆中后期，病程較久，陰傷氣耗，肺脾同?。魂庩?yáng)虛損證則為肺脾同病、氣陰耗傷的進(jìn)一步發(fā)展。故γ-干擾素釋放試驗(yàn)隨著肺癆的病程而有所下降?？紤]病人在肺癆疾病后期，正氣虛弱，機(jī)體免疫功能下降，活化的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)減少，故γ-干擾素釋放水平下降。從中醫(yī)治療來(lái)看，肺癆患者疾病前中期，應(yīng)該以滋陰潤(rùn)肺、降火殺蟲(chóng)為主，而在疾病后期，正氣虛弱，則應(yīng)該以益氣養(yǎng)陰、滋陰補(bǔ)陽(yáng)為主。故臨床結(jié)合肺結(jié)核患者的γ-干擾素釋放試驗(yàn)，為肺結(jié)核中醫(yī)證侯分型提供參考，從而有利于制定正確的治療方案。