王慧玲

摘 要：微生物檢查是生物制藥企業(yè)常規(guī)安全性檢查的重要組成部分。微生物限度檢查法方法驗(yàn)證工作十分繁瑣，影響因素包括培養(yǎng)基、菌株、試驗(yàn)步驟和供試品的制備方式等。本文從微生物檢查中常見(jiàn)誤差談起，提出質(zhì)量控制措施，供參考。

關(guān)鍵詞：微生物檢驗(yàn)；影響因素；控制措施

微生物檢驗(yàn)?zāi)軌驗(yàn)槿藗兏腥拘约膊〉脑\斷和治療提供準(zhǔn)確的參考依據(jù)，在對(duì)微生物進(jìn)行檢驗(yàn)的過(guò)程中，其步驟復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)人員的操作精細(xì)度要求也較高，一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題很可能會(huì)使檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差，進(jìn)一步為患者的疾病診斷、治療帶來(lái)很大的不良影響。有效提高、微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)各種檢驗(yàn)樣品的檢驗(yàn)質(zhì)量，進(jìn)而確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，從而提高室的檢驗(yàn)?zāi)芰σ约凹夹g(shù)水平。

1微生物檢查中常見(jiàn)誤差

1. 實(shí)驗(yàn)者主觀因素及操作技能中的誤差

1.1. 無(wú)菌觀念淡薄。操作馬虎、隨意，容易造成供試品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡，從而不能真實(shí)的反映供試品的染菌情況。在檢驗(yàn)過(guò)程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)，每個(gè)空間，每個(gè)操作，每個(gè)工具及材料，沒(méi)滅菌者都是帶菌者，都會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不確定影響，因而應(yīng)牢固的建立無(wú)菌觀念。

1.1. 操作技能中誤差。操作不熟練，實(shí)驗(yàn)條件控制不嚴(yán)格，細(xì)節(jié)不注意等都會(huì)造成損失。每次操作前的消毒處理必須徹底，不得留有死角，對(duì)實(shí)驗(yàn)所用器具根據(jù)材料的性質(zhì)進(jìn)行相應(yīng)的滅菌；開(kāi)啟供試品包裝的工具，如剪刀、砂輪等也應(yīng)消毒，實(shí)驗(yàn)用的器具如吸管應(yīng)清洗干凈，滅菌，放液時(shí)不得接觸液面，每ml樣品必須放盡，否則影響細(xì)菌記數(shù)的準(zhǔn)確性；這些細(xì)小環(huán)節(jié)都有可能污染供試品的可能，使平皿染菌數(shù)增多，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差。

1. 操作環(huán)境不符合要求帶來(lái)的誤差

由于條件限制，一些單位的無(wú)菌室在設(shè)計(jì)上不符合要求，缺少傳遞箱或緩沖設(shè)備不健全，在操作中傳遞物品不方便，人員的頻繁走動(dòng)增加了染菌機(jī)會(huì)。無(wú)菌操作臺(tái)或凈化工作臺(tái)要定期檢測(cè)其潔凈度，確保達(dá)到100級(jí)。潔凈級(jí)別及檢查方法通常采用塵粒數(shù)及浮游菌數(shù)或沉降菌數(shù)測(cè)定法，凈化工作臺(tái)中的高效及中效過(guò)濾器應(yīng)根據(jù)檢測(cè)情況，必要時(shí)及時(shí)換處理。這項(xiàng)工作在各單位檢驗(yàn)工作中應(yīng)得到足夠重視，確保操作臺(tái)達(dá)到規(guī)定的技術(shù)指標(biāo)。

1. 標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇和保存及管理不當(dāng)引起的誤差

微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制必須要有標(biāo)準(zhǔn)菌株并且其生物學(xué)特征必須典型穩(wěn)定，如形態(tài)變異、菌落變異，耐藥性變異等均可使平板中細(xì)菌呈叢集或分散不均。菌種保藏與管理應(yīng)有完整的程序，保藏的菌種必須具備該菌種的詳細(xì)歷史及有關(guān)資料。一般是首先填寫(xiě)菌種卡片，登記菌種名稱(chēng)編號(hào)，來(lái)源歷史，形態(tài)特征，生化與血清學(xué)鑒定，以及菌種傳代次數(shù)、最宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、保藏方法、貯存條件及保藏地址等。

1. 培養(yǎng)基靈敏度下降引起的誤差

干粉培養(yǎng)基使用較方便，但由于其極易吸潮，如存放不當(dāng)出現(xiàn)凝塊，則其凝固性較差，應(yīng)避免使用。新鮮配制的培養(yǎng)基應(yīng)在2℃～20℃避光保存，但不得凍結(jié)，保存時(shí)間不得過(guò)2周。硫乙醇鹽流體培養(yǎng)基儲(chǔ)存過(guò)程中，若氧化還原層超過(guò)1/5，須經(jīng)水浴加熱煮沸10min方可使用，但只限一次。否則可使培養(yǎng)基中糖、微生物和氨基酸受到破壞，影響質(zhì)量。

1. 滅菌方法不當(dāng)造成的實(shí)驗(yàn)誤差

高壓消毒滅菌法是最常用最有效的滅菌方法，為了保證高壓滅菌的質(zhì)量確實(shí)達(dá)到高壓消毒的目的，首先要選擇合格的壓力蒸氣滅菌器，其次操作人員必需了解滅菌器的原理并遵守其操作規(guī)程，特別要排盡鍋內(nèi)的冷空氣，否則雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就可能不徹底。

微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

開(kāi)展對(duì)微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部檢測(cè)的一項(xiàng)基礎(chǔ)工作，會(huì)直接影響到細(xì)菌學(xué)最終的檢測(cè)結(jié)果的可靠性以及準(zhǔn)確性。

2.1加強(qiáng)對(duì)微生物檢驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的質(zhì)量控制

質(zhì)量管理體系的建立關(guān)系到檢驗(yàn)室各項(xiàng)大小工作的開(kāi)展，因而必須加強(qiáng)對(duì)其的資質(zhì)認(rèn)定，即做好計(jì)量認(rèn)證工作，應(yīng)按照檢驗(yàn)室相關(guān)的資質(zhì)認(rèn)定檢驗(yàn)要求、評(píng)審準(zhǔn)則來(lái)切實(shí)做好各項(xiàng)工作，不斷完善以及有效運(yùn)行此質(zhì)量管理體系。要按照實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)管理手冊(cè)要求，進(jìn)行正確的管理及使用各種設(shè)備儀器、藥品，及時(shí)發(fā)現(xiàn)存在的問(wèn)題及解決，能隨著不斷發(fā)展的檢驗(yàn)技術(shù)做及時(shí)地更新。此外，要明確每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室人員具體的崗位職責(zé)，并督促其堅(jiān)決執(zhí)行。

2.2加強(qiáng)對(duì)微生物檢驗(yàn)員的質(zhì)量控制

加強(qiáng)對(duì)檢驗(yàn)員的質(zhì)控，首先應(yīng)為檢驗(yàn)員提供學(xué)習(xí)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的教育培訓(xùn)機(jī)會(huì)，定期派送人員到先進(jìn)的院校學(xué)習(xí)新理論、新技術(shù)等，定期安排檢驗(yàn)員參加一些應(yīng)急演練和實(shí)際考核、對(duì)未知菌株進(jìn)行分離鑒定，以促使檢驗(yàn)員對(duì)各種樣品的檢測(cè)能力。

2.3微生物檢驗(yàn)分析全過(guò)程的質(zhì)量控制

2.3.1分析前的質(zhì)控

分析前的質(zhì)控包括：（1）填寫(xiě)檢驗(yàn)樣品的申請(qǐng)單。這個(gè)環(huán)節(jié)要求檢驗(yàn)員如實(shí)地、詳細(xì)地填寫(xiě)病患組基本的情況為臨床的診治提供相關(guān)依據(jù)。（2）病患的準(zhǔn)備工作。檢驗(yàn)員結(jié)合患者實(shí)際情況，要求醫(yī)護(hù)人員提醒病患，在采集樣品標(biāo)本之前的準(zhǔn)備工作，如休息、飲食等方面。應(yīng)選擇在病患停藥或是治療前后的3天采集樣品標(biāo)本，利于避免藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。（3）標(biāo)本采集。標(biāo)本的采集工作關(guān)系到分析的結(jié)果。因而，檢驗(yàn)員應(yīng)規(guī)范標(biāo)本采集的部位、時(shí)間、器具以及儲(chǔ)存等環(huán)節(jié)的工作。（4）標(biāo)本驗(yàn)收。檢驗(yàn)員應(yīng)仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本的標(biāo)簽內(nèi)容是否符合檢驗(yàn)申請(qǐng)單的內(nèi)容，詳細(xì)了解標(biāo)本的采集方法及送檢時(shí)間，檢查標(biāo)本的質(zhì)量是否達(dá)標(biāo)，且可根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康淖龀鱿鄳?yīng)的處理。

2.3.2分析中的質(zhì)控

在對(duì)微生物檢驗(yàn)的質(zhì)控中，應(yīng)制定行之有效且符合質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的管理文件。以為微生物檢驗(yàn)質(zhì)量提供可控依據(jù)，嚴(yán)格記錄檢驗(yàn)室日常的質(zhì)量記錄以及具體的操作流程，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)不足之處并及時(shí)糾正，提高檢測(cè)的質(zhì)量。檢驗(yàn)室設(shè)備的質(zhì)量方面，應(yīng)每日對(duì)冰箱等設(shè)備進(jìn)行使用監(jiān)控記錄。對(duì)于高壓滅菌器等儀器應(yīng)進(jìn)行定期保養(yǎng)、維修，并進(jìn)行記錄，以確保檢驗(yàn)室各類(lèi)儀器的正常運(yùn)行。此外，還應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基、抗血清以及試劑等進(jìn)行質(zhì)控。

2.3.3分析后的質(zhì)控

檢驗(yàn)員要核實(shí)好化驗(yàn)單內(nèi)容，保證病患資料無(wú)誤，從而為臨床診治提供依據(jù)，檢驗(yàn)員應(yīng)仔細(xì)比較近期檢測(cè)結(jié)果和最終的檢測(cè)結(jié)果，分析各個(gè)參數(shù)之間的關(guān)系，便于對(duì)臨床資料進(jìn)行綜合地、科學(xué)地分析。嚴(yán)格按照?qǐng)?bào)告單的審核制度，安排專(zhuān)人對(duì)報(bào)告單進(jìn)行統(tǒng)一接收、送達(dá)以及簽收。檢驗(yàn)人員應(yīng)結(jié)合基礎(chǔ)理論知識(shí)，合理地、科學(xué)地規(guī)定標(biāo)本在檢測(cè)后的正確保存方法及時(shí)間，便于日后的信息資料復(fù)查及核對(duì)。

總之，影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的因素是多方面的，通過(guò)提高檢驗(yàn)人員素質(zhì)，嚴(yán)格規(guī)范操作流程，提高標(biāo)本質(zhì)量，能夠有效控制影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果的因素，從而提高微生物檢驗(yàn)工作的質(zhì)量，保證微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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（作者單位：山東潤(rùn)澤制藥有限公司）