陳 林 ，方俊杰 ，孟 剛 ，肖圣兵 ，秦 明 ，萬 陽

（1.安徽省公安廳物證鑒定中心，安徽 合肥 230061；2.安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院臨床病理中心，安徽合肥 230022）

死亡時(shí)間推斷是法醫(yī)病理學(xué)科研和實(shí)踐的重要難題之一，但是受死者個(gè)體差異、致死方式及死亡后多種因素的影響，準(zhǔn)確推斷死亡時(shí)間較為困難。前期研究[1]利用死者小腸內(nèi)容物遷移距離對死亡時(shí)間進(jìn)行推斷，因受個(gè)體差異、進(jìn)食食物種類、進(jìn)食量、就餐后活動等因素影響，其胃腸消化時(shí)間及功能差異較大，建立的回歸方程較為復(fù)雜，尚缺乏動物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)。建立標(biāo)準(zhǔn)化動物模型并通過改變相關(guān)因素，觀察研究對象的變化，已成為法醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)學(xué)研究的重要方法。本研究通過模擬SD大鼠一次性飽食進(jìn)餐后小腸內(nèi)容物遷移距離動物模型的適宜條件，建立大鼠胃腸消化速度理想的動物模型，以期探討在動物實(shí)驗(yàn)中利用小腸內(nèi)容物遷移距離推斷死亡時(shí)間的合理性并獲得理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

普通級健康雌性SD大鼠32只，6～8周齡，體質(zhì)量180～220g，購自安徽省實(shí)驗(yàn)動物中心，恒溫（25℃）飼養(yǎng)于動物房。

1.2 動物分組及模型建立

1.2.1 分組及進(jìn)食習(xí)慣適應(yīng)性訓(xùn)練

大鼠于動物房適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組分為餐后 1、2、3、4、5 h 組，每組6只，對照組2只。各組分籠飼養(yǎng)于同一間動物房。本研究所用實(shí)驗(yàn)動物方案符合安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會相關(guān)規(guī)定。

參照文獻(xiàn)[2]對所有大鼠進(jìn)食習(xí)慣進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，每日上午8時(shí)給予動物中心標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料（加新鮮的水煮雞蛋），上午9時(shí)撤去飼料，禁食5 h后，于下午14時(shí)給予飼料自由進(jìn)食，至晚上20時(shí)撤去食物開始禁食，飼養(yǎng)過程中始終不禁水。依此方法飼養(yǎng)大鼠1周，每日記錄各組大鼠產(chǎn)出糞粒的大致數(shù)量及密度，證實(shí)大鼠消化功能正常，滿足實(shí)驗(yàn)條件。

1.2.2 模型建立

建模前所有大鼠禁食但不禁水24h（前一日上午撤去飼料至次日上午給予飼料），保證實(shí)驗(yàn)動物胃腸充分排空。各實(shí)驗(yàn)組同時(shí)給予標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及新鮮的水煮雞蛋，對照組繼續(xù)禁食不禁水。1h后將各實(shí)驗(yàn)組置于新墊料鼠籠內(nèi)，繼續(xù)給予滅菌的雙蒸水自由飲水，此時(shí)作為末次進(jìn)餐時(shí)間。 分別于餐后 1、2、3、4、5h用頸椎脫臼法處死各組大鼠，對照組于實(shí)驗(yàn)組餐后1 h和5h各處死1只。

作大鼠劍突下腹部正中切口，提取大鼠全胃及全段小腸（自胃食管交界至回盲瓣結(jié)腸上方2～4cm處），將腸管按“S”形無牽拉及擠壓自然擺放于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方格（20 cm×16 cm）內(nèi)，分別拍照記錄胃腔及小腸的充盈情況以及內(nèi)容物的顏色和性狀。用徠卡819取材刀片沿胃小彎、小腸的長軸打開胃及腸管，充分暴露各組大鼠的胃腸內(nèi)容物。

1.3 胃腸內(nèi)容物觀察及遷移距離測量

參照前期研究[1]的實(shí)驗(yàn)方法，觀察胃腸內(nèi)容物的種類、性狀，胃內(nèi)有無可辨的固體成分，胃內(nèi)容物是否軟化和糜化以及小腸內(nèi)液體的色澤變化，找出有效分段的“空白區(qū)”（僅有少量液體成分，無固體顆粒及有形成分），比較小腸空白區(qū)兩端腸內(nèi)容物成分在種類、性狀及色澤上的不同，并分別拍照固定。

對各組大鼠小腸全長和小腸內(nèi)容物實(shí)際遷移距離進(jìn)行測量，同時(shí)將各實(shí)驗(yàn)組單位時(shí)間小腸內(nèi)容物遷移的實(shí)際距離占小腸全長的百分比作為相對距離。由于實(shí)驗(yàn)組進(jìn)食后胃未完全排空，測量胃幽門括約肌至腸管內(nèi)容物前端的距離，內(nèi)容物末端在胃內(nèi)；對照組（持續(xù)禁食）胃完全排空，測量胃幽門括約肌至腸管內(nèi)容物末端的距離，此時(shí)腸管內(nèi)容物前端已進(jìn)入大腸。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，運(yùn)用單因素方差分析實(shí)驗(yàn)組各組間差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況

實(shí)驗(yàn)大鼠小腸全長68.1～88.0 cm，平均為（79.4±3.2）cm，小腸直徑 0.3～0.6cm。

對照組2只大鼠胃腔空虛，胃呈“J”形（圖1A），胃腔以及胃幽門括約肌至腸管內(nèi)容物末端區(qū)域（空白區(qū)）肉眼可見稀薄的淡黃色或黃色小腸液，胃幽門括約肌至腸管內(nèi)容物末端的距離分別為47.6cm和59.1cm，空白區(qū)之后可見墨綠色或深褐色顆粒狀固體有形物，排列較緊密（圖1B）。

餐后1 h組大鼠胃呈“C”形，胃腔均充盈飽滿（圖1C），胃內(nèi)充滿未消化的食物，食物開始軟化，呈黃綠色（圖1D）；餐后2h組，胃內(nèi)食物開始糜化，食物顆粒進(jìn)一步變細(xì)，顏色由黃綠色變?yōu)橥咙S色（圖1E）；餐后3 h組胃排空較前明顯，食糜呈土黃色，空白區(qū)較前明顯縮短且部分腸內(nèi)容物分界不清，但仍可分辨；餐后4 h組小腸內(nèi)容物呈深褐色顆粒狀，空白區(qū)較前明顯縮短（圖1F）；餐后5h組胃腔大小與對照組相仿或略大（圖1G），胃十二指腸內(nèi)僅剩少量已消化食糜，小腸空白區(qū)極短，幾乎與末次進(jìn)餐內(nèi)容物（墨綠色顆粒狀物）相連（圖1H）。各實(shí)驗(yàn)組大鼠小腸內(nèi)容物的性狀詳見表1。

2.2 大鼠小腸內(nèi)容物遷移距離測量結(jié)果

各實(shí)驗(yàn)組大鼠小腸內(nèi)容物的遷移距離詳見表1。

餐后1h組小腸內(nèi)容物實(shí)際遷移距離為1.7～3.3cm，相對遷移距離為2.5%～4.2%；餐后2h組小腸內(nèi)容物實(shí)際遷移距離為9.6～15.2cm，相對遷移距離為11.9%～18.7%；餐后3h組小腸內(nèi)容物實(shí)際遷移距離為15.0～23.1cm，相對遷移距離為19.3%～26.5%；餐后4h組小腸內(nèi)容物實(shí)際遷移距離為27.5～30.6cm，相對遷移距離為35.3%～38.1%；餐后5h組小腸內(nèi)容物實(shí)際遷移距離為37.5～47.4cm，相對遷移距離為48.1%～56.1%。大鼠小腸內(nèi)容物遷移距離隨餐后時(shí)間延長逐漸變長，各實(shí)驗(yàn)組間的實(shí)際和相對遷移距離比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 大鼠胃和小腸內(nèi)容物情況

表1 各實(shí)驗(yàn)組大鼠小腸內(nèi)容物性狀及遷移距離（n=6，±s）

表1 各實(shí)驗(yàn)組大鼠小腸內(nèi)容物性狀及遷移距離（n=6，±s）

餐后5h 墨綠色 顆粒狀 42.2±4.2 52.4±3.6

3 討 論

前期研究[1]通過對非正常死亡案件中死者小腸內(nèi)容物遷移距離的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并對胃腸內(nèi)容物性狀及排空情況進(jìn)行觀察，結(jié)合可能存在的影響因素，推斷受害者死亡時(shí)間。但由于受進(jìn)食習(xí)慣、食物種類、進(jìn)食量、餐后運(yùn)動情況、年齡、體質(zhì)、健康狀況、飲酒及服藥情況等諸多因素的影響，死亡時(shí)間推斷的計(jì)算方法較為復(fù)雜。盡管食物在胃及小腸內(nèi)消化、吸收、運(yùn)動理論研究[3]已較為成熟，國內(nèi)也有較多關(guān)于藥物影響胃腸消化功能的報(bào)道和動物實(shí)驗(yàn)研究[4-6]，多數(shù)通過液體灌胃建模。但我們認(rèn)為液體直接灌胃可能對胃腸蠕動功能影響較大，無法滿足對胃腸內(nèi)容物性狀變化的目檢及對小腸內(nèi)容物遷移距離測量的要求。由于SD大鼠具有群居優(yōu)勢，但成年雄鼠性情兇猛，同籠飼養(yǎng)會互相撕咬，本實(shí)驗(yàn)建模前需對大鼠進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，成年雌雄大鼠隨機(jī)分配同籠飼養(yǎng)時(shí)，雌鼠可能變?yōu)榉N鼠，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果均有影響，故本研究采用性格較為溫順的雌鼠作為研究對象，選用饑餓后自然進(jìn)食（一次性飽餐）的方式，盡可能模擬正常大鼠的進(jìn)食習(xí)慣及餐后活動規(guī)律。同時(shí)，相同周齡健康大鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng)排除了進(jìn)食習(xí)慣、食物種類、餐后運(yùn)動情況等因素的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，成年雌性健康SD大鼠胃排空時(shí)間約為5 h，通過禁食不禁水24 h后自由進(jìn)食1 h可成功建立理想的、可用于固定及測量小腸內(nèi)容物遷移距離的動物模型。雖然實(shí)驗(yàn)大鼠小腸總長度差異較大，但小腸內(nèi)容物遷移距離（實(shí)際距離和相對距離）隨餐后時(shí)間延長逐漸變長，總體呈時(shí)序性變化，提示食物在大鼠胃及小腸中消化和吸收需要一定時(shí)間，胃的排空受胃內(nèi)促進(jìn)排空因素及小腸抑制排空因素的影響間斷進(jìn)行。在林小玉[7]的研究中，通過膠囊內(nèi)鏡對克羅恩病患者和體檢健康者胃腸排空時(shí)間進(jìn)行研究，結(jié)果提示食物在胃及小腸均需要較長時(shí)間消化排空，且在疾病狀態(tài)下胃腸排空平均時(shí)間存在差異。本研究動物模型研究結(jié)果表明，利用胃腸內(nèi)容物性狀及小腸內(nèi)容物遷移距離推測大鼠餐后存活時(shí)間具有一定合理性和可操作性，為法醫(yī)學(xué)鑒定實(shí)踐中利用小腸內(nèi)容物遷移距離推斷死亡時(shí)間提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但本實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量較少，尚存在一定的局限性，需后期擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。

本研究成功建立了雌性SD大鼠胃腸排空的動物模型，其操作簡單、重復(fù)性好，為進(jìn)一步研究其他因素（食物種類、環(huán)境溫度）對大鼠小腸內(nèi)容物遷移距離變化奠定了基礎(chǔ)。