廖琳潔，陳德志，陳巧輝，陳志民

（中國(guó)人民解放軍第180醫(yī)院靜脈藥液配置中心，福建 泉州 362000）

細(xì)胞色素P450氧化酶是參與Ⅰ相藥物代謝最重要的酶，是目前已知底物最廣泛的生物轉(zhuǎn)化酶類，是一組結(jié)構(gòu)和功能相近的超家族基因編碼的同工酶，主要存在于肝微粒體中，參與了人體內(nèi)40%～50%的藥物代謝。CYP2C19是CYP家族中的重要一員，許多內(nèi)源性底物、環(huán)境污染物及臨床約10%的藥物都由其催化代謝，涉及藥物包括質(zhì)子泵抑制劑、三環(huán)類抗抑郁藥、選擇性5－羥色胺再攝取抑制劑、苯二氮 類、巴比妥類、普奈洛爾、S－美芬妥英等[1]。其基因呈多態(tài)性分布，CY2C19*1等位基因是野生型，編碼正常活性酶蛋白。*2，*3等位基因是在亞洲人群中常見的突變類型，均編碼無活性酶蛋白，這2個(gè)等位基因可解釋在東方人中99% 弱代謝表型[2－3]。代謝表型的差異導(dǎo)致經(jīng)該酶代謝藥物作用的個(gè)體差異。近年來，多有我國(guó)各地區(qū)不同民族CYP2C19基因多態(tài)性調(diào)查情況的報(bào)道，但尚無泉州及周邊地區(qū)的相關(guān)報(bào)道。本研究中考察泉州地區(qū)漢族冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ê?jiǎn)稱冠心?。┤巳篊YP2C19*1，*2，*3基因型的分布情況，并與其他地區(qū)漢族人群作比較，為本地區(qū)相關(guān)人群個(gè)體化精準(zhǔn)給藥方案的制訂和臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 資料收集

連續(xù)收集心內(nèi)科確診為冠心病、籍貫為泉州且無親緣關(guān)系的住院患者210例。其中，男154例，平均年齡（58．88 ±1．14）歲；女 56 例，平均年齡（56．82 ±2．10）歲。

1．2 方法

CYP2C19基因型檢測(cè)：采集上述人群靜脈血2 mL，置EDTA抗凝管內(nèi)，用血液基因組提取試劑盒提取樣本DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)微陣列芯片雜交方法測(cè)定CYP2C19*1，*2，*3基因型。試劑和儀器均為上海百傲科技有限公司配套試劑盒及Bai O系列儀器，嚴(yán)格按照試劑和儀器說明書操作規(guī)程進(jìn)行操作。

代謝表型：無功能缺失等位基因的CYP2C19*1／*1為快代謝型（EM）；攜帶 1個(gè)功能缺失等位基因的CYP2C19*1／*2和 CYP2C19*1／*3為中間代謝型（IM）；攜帶2個(gè)功能缺失等位基因的CYP2C19*2／*2，CYP2C19*2／*3和 CYP2C19*3／*3為慢代謝型（PM）。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 22．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。按 Hardy－Weinberg平衡定律驗(yàn)證樣本群體代表性，等位基因及基因型采用計(jì)數(shù)法計(jì)算。計(jì)量資料以表示，行 t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，行 χ2檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 CYP2C19基因多態(tài)性分布情況

本研究人群中CYP2C19*1，*2，*3等位基因分布符合 Hardy－Weinberg平衡定律（P ＞0．05），提示入選對(duì)象具有群體代表性,詳見表1。本研究人群CYP2C19*1，*2，*3等位基因分布頻率分別為60．48% ，33．10% ，6．43% ，CYP2C19*1 ／*1，*1 ／*2，*1／*3，*2／*2，*2／*3 基因型分布頻率分別為32．86% ，45．71% ，9．52% ，8．57% ，3．33% ，暫未發(fā)現(xiàn)*3／*3 基因型。EM，IM，PM 分別為 69，116，25 例，頻率分別為 32．86% ，55．23% ，11．90% 。結(jié)果見表 2。

2．2 不同性別CYP2C19基因型分布情況

按人群性別分組后對(duì)CYP2C19等位基因分布頻率、基因型分布頻率進(jìn)行比較（P＞0．05），結(jié)果見表2。

2．3 不同年齡組CYP2C19基因型分布情況

按人群年齡分組后對(duì)CYP2C19等位基因分布頻率、基因型分布頻率進(jìn)行比較（P＞0．05），結(jié)果見表3。

2．4 與其他地區(qū)、不同民族人群的比較

將本研究人群CYP2C19等位基因和基因型分布情況分別與福建、廣東、河南、云南、沈陽(yáng)漢族健康人群及回族、維吾爾族、哈薩克族人群進(jìn)行比較：在等位基因分布方面，本研究人群與福建、廣東、河南、云南、沈陽(yáng)漢族健康人群相似（P ＝0．84，0．22，0．87，0．77，0．30），與回族、維吾爾族、哈薩克族人群差異顯著（P＝0．00）；在基因型分布方面，本研究人群與福建、廣東、河南、云南漢族健康人群相似（P ＝ 0．46，0．22，0．88，0．33），與沈陽(yáng)漢族，回族、維吾爾族、哈薩克族人群差異顯著（P＝0．02，0．00，0．00，0．00）,詳見表 4。

3 討論

CYP2C19基因位于人10號(hào)染色體長(zhǎng)臂上(10q24．1．10q24．3)，包含 9 個(gè)外顯子和 8 個(gè)內(nèi)含子。CYP2C19*2是外顯子5第686位堿基發(fā)生G→A突變，從而產(chǎn)生了一個(gè)異常的剪切位點(diǎn)，引起40 bp的堿基發(fā)生缺失，改變了mRNA的閱讀框架，從而使蛋白的合成過早終止，生成一個(gè)缺乏血紅素結(jié)合位點(diǎn)的無功能酶蛋白[4]。CYP2C19*3是在外顯子4的第636位堿基處發(fā)生G→A突變，產(chǎn)生了未成熟的終止密碼子代替了色氨酸，導(dǎo)致蛋白合成提前終止，產(chǎn)生1個(gè)211個(gè)氨基酸的缺乏血紅素及底物結(jié)合區(qū)而無活性蛋白[5]。IM(*1／*2或*1，*3)產(chǎn)生的酶催化活性下降，僅為EM(*1 ／*1）酶活性的 10% ～45%，PM(*2 ／*2，*2 ／*3或*3／*3）產(chǎn)生的酶活性僅為正常的1% ～5%[6]。

表1 泉州漢族冠心病人群CYP2C19*2，*3位點(diǎn)Hardy－Weinberg平衡檢驗(yàn)結(jié)果（例，n＝210）

表2 不同性別CYP2C19基因型分布比較(%)

表3 不同年齡CYP2C19基因型分布比較(%)

表4 不同地區(qū)、不同民族人群比較(%)

本研究中，泉州漢族冠心病人群的CYP2C19基因多態(tài)性分布情況在不同性別和年齡層次中的分布均無差異，且與福建漢族健康人群[7]無顯著差異（P ＝0．461＞0．05），提示CYP2C19*2，*3等位基因與冠心病發(fā)病的相關(guān)性不大，與張冬青等[8]的研究結(jié)論一致，但仍需結(jié)合多因素多層次分析校正后確認(rèn)。多項(xiàng)研究表明，CYP2C19*2，*3等位基因（尤其是*2等位基因）增加氯吡格雷抵抗、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(PCI)術(shù)后支架內(nèi)血栓形成、嚴(yán)重不良心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[9－10]。Simon等[11]研究指出，2 208例急性心肌梗死患者中1 535例接受PCI治療者，攜帶2個(gè)突變等位基因患者心血管事件發(fā)生率是非攜帶者的 3．58 倍(95%CI，1．71 ～ 7．51)。Gladding等[12]提出，對(duì)于攜帶功能缺陷性CYP2C19變異基因的患者，增加氯吡格雷劑量可提高其抗血小板效果。特別是，同時(shí)攜帶2個(gè)突變等位基因的患者建議聯(lián)合抗凝治療或換用替格瑞洛等無需活化的新一代抗血小板藥[13]。

本研究結(jié)果顯示，泉州漢族冠心病人群中攜帶有CYP2C19*2，*3突變等位基因者高達(dá)67．13%，我國(guó)其他地區(qū)漢族人群中攜帶此二突變等位基因者也約有60%[7，14－18]，顯著高于回族、維吾爾族、哈薩克族人群；且冠心病人群多為中老年人群，常合并其他疾病如消化道潰瘍、肺部感染、失眠、抑郁、癲癇等，除常用氯吡格雷抗血小板治療外，還會(huì)經(jīng)常用到奧美拉唑等質(zhì)子泵抑制劑及伏立康唑、地西泮、西酞普蘭、丙戊酸鈉等藥物，均有經(jīng)CYP2C19途徑代謝。因此，研究漢族冠心病人群中的CYP2C19基因多態(tài)性對(duì)指導(dǎo)該人群的合理用藥、減少不良反應(yīng)發(fā)生具有重要意義。

泉州地區(qū)漢族人口主要由東晉末期和唐代末期大量中原漢族入閩與當(dāng)?shù)匕僭饺巳诤习l(fā)展而來[19]。通過與我國(guó)不同地區(qū)漢族比較可知，泉州漢族人群與廣東、河南、云南等中南部地區(qū)漢族人群的CYP2C19基因多態(tài)性分布相似，與沈陽(yáng)地區(qū)漢族人群在CYP2C19基因型的分布上則有顯著差異，而漢族與回族、維吾爾族、哈薩克族人群在CYP2C19等位基因和基因型的分布上差異顯著（P＝0．00），說明 CYP2C19基因多態(tài)性在不同種族間差異較大，同一民族在不同地區(qū)的淵源、發(fā)展也會(huì)產(chǎn)生較大差異，再考慮到肝藥酶的可誘導(dǎo)性，臨床應(yīng)注意地區(qū)、種族的影響，以更好地指導(dǎo)個(gè)體化合理用藥，具體仍需進(jìn)行擴(kuò)大樣本量的多因素、多中心研究證實(shí)。