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        海州常山葉片愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽再生1)

        2018-07-20 12:20:32楊秀蓮胡蝶宋佳妮王良桂
        關(guān)鍵詞:海州常山外植體

        楊秀蓮 胡蝶 宋佳妮 王良桂

        (南京林業(yè)大學(xué),南京,210037)

        海州常山(Clerodendrumtrichotomum),馬鞭草科大青屬,落葉灌木或小喬木,葉片大呈心形且具有特殊氣味,又稱臭梧桐[1];在我國(guó)廣泛分布,國(guó)外如日本、朝鮮及菲律賓北部也有分布[2]。海州常山形態(tài)為白花、紅萼、藍(lán)果,且花萼形狀奇特,呈五角形,花果期長(zhǎng)達(dá)半年,是夏季觀花、秋季觀果賞萼的優(yōu)良樹種[3]。海州常山對(duì)不良環(huán)境有很強(qiáng)的耐受和抵抗能力,可用于鹽堿地區(qū)及礦區(qū)等土地條件惡劣地區(qū)的綠化[4];其枝葉含有可以殺滅紅蜘蛛、棉蚜蟲和地下害蟲的化學(xué)物質(zhì)[5],種子的含油量也很高,可在制備生物農(nóng)藥、開發(fā)生物柴油等新能源的領(lǐng)域進(jìn)行研究和推廣[6-7]。綜上,海州常山具有很高的研究?jī)r(jià)值和很好的應(yīng)用開發(fā)前景,可在城市園林綠化中進(jìn)行廣泛推廣[8-11]。

        海州常山常生長(zhǎng)于山坡、野地等地方,前人對(duì)其研究較晚,現(xiàn)今栽培應(yīng)用的還很少。目前針對(duì)海州常山的研究大都集中在抗逆性以及莖葉有效化學(xué)成分和藥理作用方面,對(duì)繁殖技術(shù)的研究主要集中在扦插和分株繁殖[12]上,組培快繁方面的研究較少,現(xiàn)只見宋婷等[13]、姜麗瓊等[14]和包崢焱[15]用海州常山莖段作為外植體進(jìn)行快繁的研究,未見有外植體經(jīng)歷脫分化、再分化間接形成完整植株的報(bào)道。本研究以海州常山嫩葉為外植體,從消毒方法、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)條件、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方等方面,對(duì)海州常山葉片愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖和分化進(jìn)行探討,以期建立高效的離體再生技術(shù)體系,彌補(bǔ)海州常山完整組培體系的空缺,為種質(zhì)資源的保護(hù)及規(guī)模化生產(chǎn)提供參考,也為后續(xù)的細(xì)胞或分子水平的研究提供基本的試驗(yàn)材料。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        材料采自南京林業(yè)大學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心海州常山鹽城種源1年生扦插苗,選取健康、無病蟲害的新梢嫩葉為外植體。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 無菌體系的建立

        葉片先用加有洗潔精的水清洗,毛刷輕刷去葉面上的雜質(zhì)后放在流水下沖洗1 h。預(yù)處理后,將葉片放置超凈工作臺(tái),用75%酒精表面滅菌30 s,無菌水沖洗3~4次,再用0.1%的HgCl2或5%的NaClO溶液分別進(jìn)行1、3、5、7 min的表面滅菌,無菌水沖洗5~6次,最后將嫩葉切成0.5 cm2大小的方塊,接種于添加2.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1NAA的MS培養(yǎng)基上,同時(shí)添加7.0 g·L-1瓊脂和30 g·L-1蔗糖,以下均同。每個(gè)處理接種15瓶,每瓶3塊四周具有切口的葉片,重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,暗培養(yǎng)。觀察其愈傷組織誘導(dǎo)及生長(zhǎng)情況,30 d后統(tǒng)計(jì)外植體污染率、死亡率和存活率。

        1.2.2 愈傷組織誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基的篩選

        用最佳的消毒方法對(duì)葉片消毒后,將其切成0.5 cm2大小的方塊,接種到添加2.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1NAA的MS、1/2 MS、WPM和B5四種不同基本培養(yǎng)基上。每個(gè)處理接種15瓶,每瓶3塊葉片,重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,暗培養(yǎng)。觀察其愈傷組織誘導(dǎo)及生長(zhǎng)情況,30 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織形成率。

        1.2.3 愈傷組織誘導(dǎo)光暗條件篩選

        將葉片接種在添加2.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1NAA的MS培養(yǎng)基上,分別進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)和暗培養(yǎng),每個(gè)處理接種15瓶,每瓶3塊葉片,重復(fù)3次。觀察其愈傷組織誘導(dǎo)及生長(zhǎng)情況,30 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織形成率、褐化率和愈傷組織生長(zhǎng)狀況。

        光暗交替培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,光照強(qiáng)度2 000 Lx左右,光照時(shí)間14 h·d-1。

        暗培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,無光照。

        1.2.4 愈傷組織誘導(dǎo)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方的篩選

        根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果,在最適培養(yǎng)基上進(jìn)行激素(6-BA+NAA)的篩選,其中6-BA的質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、4.0 mg·L-1,NAA質(zhì)量濃度分別為0.1、0.5 mg·L-1,每個(gè)處理接種15瓶,每瓶3塊葉片,重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,暗培養(yǎng)。觀察其愈傷組織誘導(dǎo)及生長(zhǎng)情況,30 d后統(tǒng)計(jì)褐化率和愈傷組織形成率。

        1.2.5 愈傷組織増殖植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方的篩選

        將初代培養(yǎng)獲得的色澤透明淺綠、結(jié)構(gòu)較致密的愈傷組織切塊接種于MS培養(yǎng)基中。設(shè)置原誘導(dǎo)愈傷組織效果最好培養(yǎng)基中的激素處理組合為第1種處理,第2種處理將第1種處理中生長(zhǎng)素(NAA)的質(zhì)量濃度降低一半,第3種處理將第1種處理中的生長(zhǎng)素(NAA)質(zhì)量濃度升高一倍,第4種處理不添加任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑作為對(duì)照(表1)。每個(gè)處理接種15瓶,每瓶3塊葉片,重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,暗培養(yǎng)。20 d后統(tǒng)計(jì)各處理的愈傷組織的增殖情況。

        表1 愈傷組織增殖植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方

        1.2.6 愈傷組織分化植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方的篩選

        將愈傷組織切塊接種于MS培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)。其中6-BA質(zhì)量濃度為0.5、1.0 mg·L-1,NAA質(zhì)量濃度為0、0.05、0.10 mg·L-1,共6種組合。每個(gè)處理接種15瓶,每瓶3塊愈傷組織,重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,光照強(qiáng)度2 000 lx左右,光照時(shí)間14 h·d-1。30 d后統(tǒng)計(jì)各處理的愈傷組織的增殖分化情況。

        1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

        試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 20010統(tǒng)計(jì)匯總后,利用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較分析。

        試驗(yàn)主要統(tǒng)計(jì)指標(biāo)有:

        污染率=(污染的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù))×100%;

        死亡率=(死亡的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù))×100%;

        存活率=(存活的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù))×100%;

        愈傷組織形成率=(產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù))×100%;

        褐化率=(褐化的愈傷組織數(shù)/接種的愈傷組織總數(shù))×100%;

        增殖率=(愈傷組織體積增大未褐化的數(shù)量/接種的愈傷組織總數(shù))×100%;

        分化率=(產(chǎn)生芽點(diǎn)分化出芽苗的愈傷組織數(shù)量/接種的愈傷組織總數(shù))×100%。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 無菌體系的建立

        由表2可知,隨著消毒時(shí)間的加長(zhǎng),外植體污染率呈現(xiàn)下降的趨勢(shì),而死亡率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),存活率先上升后下降。用0.1% HgCl2滅菌7 min時(shí),外植體污染率達(dá)到最低,為6.67%,死亡率達(dá)到最高,為57.78%。存活率在消毒5 min時(shí)最高,為64.44%,此時(shí),外植體污染率和死亡率分別為22.22%和13.33%。0.1% HgCl2處理下,滅菌5 min后,外植體死亡率顯著降低。5% NaClO滅菌時(shí)總體上效果比0.1% HgCl2處理差。滅菌7 min,外植體污染率達(dá)到最低,為15.56%,死亡率達(dá)到最高,為51.11%,存活率在消毒3 min時(shí)最高,為42.22%,此時(shí)外植體污染率和死亡率分別為42.22%和15.56%。綜合來看,0.1% HgCl2滅菌5 min,存活率最高,污染率和死亡率也相對(duì)較低,因此,對(duì)于海州常山的嫩葉來說,最佳的表面滅菌方法是,先用75%酒精處理30 s,無菌水沖洗3~4次,0.1% HgCl2溶液處理5 min,無菌水沖洗5~6次。

        表2 不同消毒方法對(duì)葉片表面滅菌效果的影響

        注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差;同一滅菌劑不同滅菌時(shí)間時(shí),同列數(shù)據(jù)后不同字母代表差異顯著(P<0.05)。

        2.2 愈傷組織的誘導(dǎo)

        2.2.1 不同基本培養(yǎng)基對(duì)葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響

        由表3可知,B5和1/2 MS培養(yǎng)基的愈傷組織形成率較低,分別為6.67%和15.56%,與MS和WPM培養(yǎng)基的愈傷組織形成率呈極顯著差異(P<0.01)。MS、WPM培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率最高,同為37.78%,但MS基本培養(yǎng)基測(cè)定結(jié)果3次重復(fù)間的偏差值更小,結(jié)果更穩(wěn)定,所以海州常山葉片誘導(dǎo)愈傷組織的最適培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。

        表3 不同基本培養(yǎng)基對(duì)葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響

        注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差;同列數(shù)據(jù)后不同字母代表差異極顯著(P<0.01)。

        2.2.2 光暗條件篩選

        光暗交替培養(yǎng)和暗培養(yǎng)對(duì)海州常山葉片愈傷組織誘導(dǎo)產(chǎn)生極顯著影響(P<0.01)。外植體培養(yǎng)到15~20 d時(shí),置于無光條件下培養(yǎng)的葉片開始卷曲(圖1A),25 d開始出現(xiàn)愈傷組織,愈傷組織呈黃綠色或綠色,較疏松(圖1B),愈傷組織形成率為44.35%,褐化率為53.23%。而置于光照條件下培養(yǎng)的葉片愈傷組織形成率為0,且褐化嚴(yán)重,褐化率高達(dá)84.44%,比暗培養(yǎng)高出31.21%(表4)。所以黑暗條件下培養(yǎng)更有利于海州常山葉片誘導(dǎo)愈傷組織。

        A.接種20 d左右葉片開始出現(xiàn)卷曲;B.接種25 d葉片開始脫分化進(jìn)入細(xì)胞分裂期;C.愈傷組織黃綠,體積略有增大,較緊實(shí);D.愈傷組織增殖有結(jié)構(gòu)形狀生成,表面緊實(shí)顆粒狀但未分化;E.愈傷組織分化,葉片生長(zhǎng)變薄,顏色變深;F.植株長(zhǎng)勢(shì)良好,葉面紋路清晰,葉緣出現(xiàn)波狀齒;比例尺:0.5 mm。

        圖1 海州常山葉片愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽再生

        注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差;同列數(shù)據(jù)后不同字母代表差異極顯著(P<0.01)。

        2.2.3 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方的篩選

        由表5可知,6-BA與NAA不同質(zhì)量濃度組合的8個(gè)處理中,處理1愈傷組織形成率最高,可達(dá)66.67%,褐化率最低,為28.89%,與其他7個(gè)處理差異顯著;其次為處理2和處理5愈傷組織形成率均可達(dá)37.78%,二者與處理4、6、8均無顯著差異;處理7的愈傷組織形成率效果最差,為4.44%,褐化率也是最高,為91.11%。6-BA為0.50 mg·L-1時(shí)愈傷組織形成率均較高,分別為66.67%和37.78%,6-BA質(zhì)量濃度升高后,愈傷組織形成率有所降低,說明在海州常山葉片愈傷組織的形成過程中,細(xì)胞分裂素6-BA在質(zhì)量濃度較低時(shí)起到促進(jìn)作用。隨著6-BA質(zhì)量濃度的升高,其愈傷組織形成率并非呈現(xiàn)單純的上升或者下降趨勢(shì),在與其搭配的NAA質(zhì)量濃度變化的共同作用下產(chǎn)生曲線的變化,說明對(duì)葉片誘導(dǎo)愈傷組織來說,生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比值比質(zhì)量濃度更重要。綜合愈傷組織的誘導(dǎo)率和褐化率分析結(jié)果,得出海州常山葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)配方為1號(hào)處理,即MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1。

        表5 不同質(zhì)量濃度6-BA和NAA對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

        注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差;同列數(shù)據(jù)后不同字母代表差異顯著(P<0.05)。

        2.3 愈傷組織的増殖培養(yǎng)

        從表6可知,在未添加任何激素的MS培養(yǎng)基上,海州常山愈傷組織不生長(zhǎng)并且發(fā)生褐化,而其他3個(gè)添加了激素的處理都出現(xiàn)了不同程度的增殖甚至是分化,這表明了在海州常山愈傷組織增殖過程中,添加外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑能有效促進(jìn)愈傷組織的增殖(圖1C)。在4種處理中,2號(hào)處理的愈傷組織增大最明顯,生長(zhǎng)情況最佳,因此,海州常山愈傷組織增殖培養(yǎng)的最適培養(yǎng)方案為MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1。

        表6不同質(zhì)量濃度6-BA和NAA對(duì)愈傷組織增殖培養(yǎng)的影響

        處理6-BA質(zhì)量濃度/mg·L-1NAA質(zhì)量濃度/mg·L-1愈傷組織平均大小/mm生長(zhǎng)情況10.500.1010.86淡黃綠色體積,較致密20.500.0521.76綠色,較致密,有顆粒狀結(jié)構(gòu)30.500.2014.33黃綠色,較疏松4007.80不生長(zhǎng)并且褐化

        2.4 愈傷組織的分化培養(yǎng)

        從表7可知,將海州常山愈傷組織接種在分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后,有的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下愈傷組織量有增加,顏色由淺綠色變黃綠色,表面有顆粒狀的小突起出現(xiàn),但未出現(xiàn)分化(圖1D),如處理2:6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1,有的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下愈傷組織量有增加并出現(xiàn)分化(圖1E),如處理6:6-BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1。從試驗(yàn)結(jié)果來看,增殖率和分化率最高的都是處理1,增殖率為55.56%,分化率為13.33%,處理1與處理2、3、5、6均達(dá)到差異顯著水平。故海州常山愈傷組織最佳分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1。

        表7 不同質(zhì)量濃度6-BA和NAA對(duì)愈傷組織分化的影響

        注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差;同列數(shù)據(jù)后不同字母表示差異極顯著(P<0.01);+生長(zhǎng)勢(shì)差;++生長(zhǎng)勢(shì)一般;+++生長(zhǎng)勢(shì)良好。

        繼續(xù)對(duì)不同質(zhì)量濃度NAA做多重對(duì)比(表8),可以得出,海州常山葉片愈傷組織分化過程中不同質(zhì)量濃度NAA的處理均達(dá)到顯著水平,且低質(zhì)量濃度有利于愈傷組織的增殖和分化。由表6所得出的海州常山愈傷組織的最佳增殖培養(yǎng)基處理MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1,在海州常山愈傷組織的分化培養(yǎng)中未能成功誘導(dǎo)分化,說明在該生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下增殖的愈傷組織是非胚性愈傷組織,即表7中的2號(hào)處理不適合愈傷組織分化培養(yǎng)。6號(hào)處理MS+6-BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1,增殖率較高,達(dá)到42.22%,但分化率較低,僅6.67%,分化后芽苗的生長(zhǎng)狀況較好,莖生長(zhǎng)明顯,葉開展(圖1F)。由此可推測(cè),6號(hào)處理不太適合愈傷組織的增殖分化培養(yǎng),但可能適合用于后期莖段的初代培養(yǎng)或者不定芽增殖培養(yǎng)。

        表8 不同質(zhì)量濃度NAA對(duì)增殖率、分化率的多重比較

        注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差;同列數(shù)據(jù)后不同字母表示差異極顯著(P<0.01)。

        3 結(jié)論與討論

        組織培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)之一是建立無菌體系,外植體消毒方法的選擇至關(guān)重要[16]。外植體進(jìn)行表面滅菌要選擇合適的滅菌劑及濃度、滅菌時(shí)間及操作順序,不同的植物種類、不同的外植體部位對(duì)同樣的表面滅菌過程的反應(yīng)有所差異,最終培養(yǎng)效果也會(huì)不同。常用的表面滅菌劑有0.1%的HgCl2、1%~10%的NaClO、1%的AgNO3等,無論是哪種表面滅菌劑,濃度太低時(shí)間太短,滅菌不徹底,外植體的污染率就得不到控制;濃度過高,時(shí)間過長(zhǎng),對(duì)植物造成的傷害太大,會(huì)導(dǎo)致外植體細(xì)胞的破壞及產(chǎn)生大量次生代謝物質(zhì),進(jìn)而使外植體產(chǎn)生褐化甚至死亡,降低外植體接種在培養(yǎng)基上后續(xù)培養(yǎng)的存活率,只有選用適宜的濃度和滅菌時(shí)間才能既消滅細(xì)菌又保持外植體的活性。本試驗(yàn)中,5% NaClO和0.1% HgCl2滅菌時(shí)間太短(如1 min)無法控制污染,時(shí)間太長(zhǎng)(如7 min)對(duì)于葉片有極強(qiáng)的毒害作用,死亡率升高。此外,還發(fā)現(xiàn)0.1% HgCl2溶液比5% NaClO溶液進(jìn)行相同時(shí)間滅菌處理時(shí),0.1% HgCl2的效果更好,周宇晴等[17]在試驗(yàn)中也得出0.1% HgCl2效果優(yōu)于5% NaClO。本試驗(yàn)最終得出適宜海州常山葉片最佳的消毒方法為75%酒精處理30 s,無菌水沖洗3~4次,再用0.1% HgCl2溶液處理5 min,無菌水沖洗5~6次,葉片的成活率最高,達(dá)到64.44%。

        離體培養(yǎng)的成功與否與基本培養(yǎng)基的類型也息息相關(guān)。不同培養(yǎng)基中含有不同濃度的無機(jī)營(yíng)養(yǎng)物、碳源、維生素、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物等物質(zhì),造成培養(yǎng)效果不同。各種植物由于基因型不同適用于不同基本培養(yǎng)基,如棱角山礬葉片適用B5培養(yǎng)基[18],珙桐[19]、懸鈴木[20]在WPM培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)良好,本試驗(yàn)選擇MS、1/2 MS、WPM和B5對(duì)海州常山的葉片進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo),結(jié)果得出,含有較高濃度硝酸鹽和NH4+的MS基本培養(yǎng)基為海州常山葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。

        不同光照條件也會(huì)影響植物愈傷組織的生長(zhǎng)與發(fā)育。本試驗(yàn)中暗培養(yǎng)時(shí)海州常山葉片愈傷組織的誘導(dǎo)率高,結(jié)構(gòu)較疏松,而光暗交替培養(yǎng)時(shí)愈傷組織結(jié)構(gòu)緊實(shí),不利于分化。這與油桃[21]、毛桃[22]、薔薇[23]、膝柄木[24]和青錢柳[25]的研究結(jié)果相似,都認(rèn)為暗培養(yǎng)有助于愈傷組織誘導(dǎo)。

        愈傷組織誘導(dǎo)和分化也是植物組織培養(yǎng)中的兩個(gè)關(guān)鍵部分。愈傷組織是在外植體的受創(chuàng)面附近發(fā)生細(xì)胞加速分裂形成的無組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞群。愈傷組織生長(zhǎng)情況的不同會(huì)影響后續(xù)的愈傷組織分化及成苗的培養(yǎng)效果,在試驗(yàn)中,植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類及配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)和分化會(huì)產(chǎn)生明顯的直接影響[26-27]。6-BA和NAA是愈傷組織誘導(dǎo)和分化中常用的兩種激素,陳穎[28]進(jìn)行銀杏葉的愈傷組織誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn),NAA與6-BA組合效果最好,本試驗(yàn)也采用NAA與6-BA進(jìn)行質(zhì)量濃度篩選。試驗(yàn)結(jié)果顯示,細(xì)胞分裂素6-BA對(duì)海州常山愈傷組織形成率有極顯著的影響,且質(zhì)量濃度較低時(shí)(0.5 mg·L-1)起到促進(jìn)作用,與Li et al.[29]和陳雪等[30]已報(bào)道的結(jié)果相似,較高質(zhì)量濃度的細(xì)胞分裂素阻礙愈傷組織的誘導(dǎo);而低質(zhì)量濃度的生長(zhǎng)素NAA(0.01 mg·L-1)有利于海州常山愈傷組織的分化,這與范小峰等[31]研究結(jié)果相似。木本植物進(jìn)行愈傷組織增殖時(shí),發(fā)現(xiàn)采用比愈傷組織誘導(dǎo)階段更低的生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度有利于愈傷組織的增殖[18,32],本試驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn),愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1,愈傷組織最適增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1。

        本研究以海州常山的嫩葉作為外植體,進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)和分化研究,以期為海州常山種質(zhì)資源的保護(hù)及規(guī)模化生產(chǎn)提供參考,也是為海州常山遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立奠定基礎(chǔ),后續(xù)就如何克服愈傷組織的褐化,提高愈傷組織分化率和不定芽的生根及移栽還可進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

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