吳鋒/江蘇省南通市通州區(qū)畜牧獸醫(yī)站

豬圓環(huán)病毒由國(guó)外學(xué)者Tischer在1974年首次發(fā)現(xiàn)，是目前已知最小的哺乳動(dòng)物病毒，該病毒分為PCV1和PCV2兩種血清型。PCV1在世界范圍豬場(chǎng)中廣泛存在，但對(duì)豬無致病性，不會(huì)引起臨床癥狀，而PCV2可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰落綜合征、豬繁殖障礙、豬皮炎和腎炎綜合征等多種豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病，PCV2于2001年在我國(guó)首次分離，迄今為止仍呈散發(fā)及地方性流行，對(duì)國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

一、材料和方法

1.病料采集。2016年10月至2018年3月，在南通市通州區(qū)東社、十總、興仁、石港、劉橋、平潮6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的10個(gè)中小型豬場(chǎng)采集疑似發(fā)病和病死豬的肝、脾、肺、淋巴結(jié)、血液等病料62份，冷凍運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，剪取小塊組織加入1 mL PBS溶液后充分研磨，反復(fù)凍融3次后，凍存于-80℃冰箱中備用。

2.病毒核酸提取。按照TaKaRa MiniBEST Viral DNA Extraction Kit操作說明，從處理好的研磨組織及血液中提取病毒DNA，DNA直接作為模板進(jìn)行PCV2的PCR檢測(cè)。

3. PCR檢測(cè)。以上述提取的DNA作為模板，利用針對(duì)PCV2 ORF2的特異性引物（表1）進(jìn)行PCR鑒定，反應(yīng)條件為：94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，共30個(gè)循環(huán)，4℃保溫。反應(yīng)結(jié)束后取10μL樣品進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像儀中觀察結(jié)果。

表1 PCV2的檢測(cè)引物

二、結(jié)果與分析

1.臨床癥狀觀察。在南通市通州區(qū)6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共10個(gè)疑似發(fā)病的豬場(chǎng)采集病料，其中有8個(gè)豬場(chǎng)出現(xiàn)疑似PCV2感染癥狀，包括母豬流產(chǎn)、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰落綜合征（PMWS）、喘氣等。

2.PCR鑒定。將采集病料提取DNA后，利用PCR鑒定PCV2感染情況，結(jié)果顯示（圖1），陽(yáng)性對(duì)照能夠擴(kuò)增出預(yù)期大小（373bp）片段，陰性對(duì)照無目的條帶，62份待檢樣品中有41份為PCV2檢測(cè)陽(yáng)性（表2）。

圖1 PCV2的PCR檢測(cè)結(jié)果

3.流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析。對(duì)疑似發(fā)病的10個(gè)豬場(chǎng)中采集的62份病料進(jìn)行PCR檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表2，PCV2陽(yáng)性率為66.1%，說明該地區(qū)中小型豬場(chǎng)的PCV2感染率較高。

表2

三、討論

PMWS自1991年在加拿大首次報(bào)道以來，陸續(xù)在世界范圍內(nèi)發(fā)生，PCV2是引起該病的主要病原，中國(guó)于2001年首次分離到該病毒，此后不斷蔓延，迄今已成為國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)的最重要病原之一。本研究中，疑似出現(xiàn)PCV2感染的病豬臨床癥狀表現(xiàn)為典型的PMWS（包括食欲下降，消瘦，腹瀉，腹股溝淋巴結(jié)腫大），呼吸癥狀（喘氣，咳嗽，呼吸困難），流產(chǎn)等，與此前報(bào)導(dǎo)的PCV2的臨床癥狀基本符合，隨后通過PCR鑒定進(jìn)一步驗(yàn)證了該癥狀病因?yàn)镻CV2感染。

PCV2主要感染豬的免疫系統(tǒng)，引起免疫抑制，從而繼發(fā)其他病原的感染，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大危害，本研究結(jié)果顯示，該地區(qū)PCV2感染率較高，有繼發(fā)其他病原的風(fēng)險(xiǎn)，加強(qiáng)豬圓環(huán)病毒病的監(jiān)測(cè)和防控，對(duì)該地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展有著重要意義。

參考文獻(xiàn)（略）