廖詩英

(湖北文理學(xué)院，湖北襄陽 441053)

液基細胞技術(shù)由美國Cytyc公司在1987年研發(fā)成功，1991年獲得美國食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)批準(zhǔn)，我國在2000年以后開始廣泛應(yīng)用于各醫(yī)療服務(wù)機構(gòu)，用于取代傳統(tǒng)的巴氏試驗(Papanicolaou test)。液基細胞技術(shù)是利用細胞學(xué)原理，去除細胞樣品中諸如黏液等影響因素，將樣本細胞溶于固定液，染色后涂片鏡檢，可自動化操作，節(jié)約檢測樣本的時間，極大地提高了涂片質(zhì)量及讀片結(jié)果，減少許多人為因素的影響。液基細胞技術(shù)已被全球醫(yī)療機構(gòu)證明是一項成熟的檢測方法，廣泛用于宮頸癌、口腔癌、肛門癌、甲狀腺癌等癌癥的篩查診斷。美國DK Diagnostics公司研發(fā)的PARATEST液基寄生蟲檢測試劑盒，采用液基細胞技術(shù)原理，在溶解糞便樣品時保持了蟲卵和寄生蟲的細胞活性，通過過濾和沉降體系提高蟲卵和寄生蟲檢出率。此技術(shù)操作快捷簡便、結(jié)果可靠，目前已在全球20多個國家推廣使用[1-3]。為了探討PARATEST試劑盒在寵物腸道寄生蟲檢測中的作用，特設(shè)計本次試驗。

1　材料與方法

1.1　材料

選擇2017年4月～10月的179只寵物犬，收集新鮮糞便作為檢查樣本。

1.2　方法

1.2.1直接涂片法滴1滴生理鹽水與潔凈的載玻片上，用竹簽挑取綠豆大小的糞便放入水中涂抹均勻，涂片厚度以透過玻片可看清書上的字跡為宜，加蓋玻片后鏡檢。為提高檢出率，每個檢樣連續(xù)做3次涂片[4-5]。

1.2.2飽和鹽水浮聚法自糞便不同處挑取蠶豆大小的糞塊加入適量飽和鹽水調(diào)成混懸液，用60目銅篩濾去粗渣，過濾后的糞液倒入于浮聚瓶中，再慢慢加入飽和鹽水至液面略高于瓶口，在瓶口上覆蓋一載玻片，靜置15 min后，將載玻片提起并迅速翻轉(zhuǎn)，鏡檢[6]。

1.2.3清水沉淀法取20 g糞便加水制成混懸液，用60目銅篩過濾，濾液倒入三角瓶中，加水500 mL，靜置30 mim，倒去上層液，重新加入清水500 mL，靜置20 min，此后重復(fù)換水2次～3次，直至上層液清亮為止。最后倒去上層液，取糞便沉渣做涂片鏡檢[7-8]。

1.2.4PARATEST液基過濾沉降法采用美國DK Diagnostics公司生產(chǎn)的PARATEST試劑盒對糞便樣本進行檢查。PARATEST試劑盒中盛有液基保存液，具有保持糞便樣本新鮮的功效，使寄生蟲及蟲卵免遭破壞。其錐形的瓶蓋內(nèi)置高精度濾膜，可去除干擾檢測的殘渣成分。檢查時，取2 g糞便裝入PARATEST液基保存液瓶中，蓋上錐形瓶蓋，搖勻樣本瓶，將瓶倒置在托盤上，靜置15 min鐘后，輕擠壓試劑瓶，棄去最初的1滴，滴1滴樣品到載玻片上，蓋上蓋玻片鏡檢。

1.2.5統(tǒng)計處理本試驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用t檢驗，計數(shù)資料對比采用2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

試驗結(jié)果表明，直接涂片法對各種腸道寄生蟲的檢出率最低，飽和鹽水浮聚法對犬鉤口線蟲、犬弓首蛔蟲和等孢球蟲的檢出率最高，但對華支睪吸蟲、犬賈第蟲和隱孢子蟲的檢出率為0。PARATEST液基過濾沉降法對犬鉤口線蟲、犬弓首蛔蟲和等孢球蟲的檢出率稍低于飽和鹽水浮聚法，二者差異不顯著；對華支睪吸蟲和犬賈第蟲、隱孢子蟲等原蟲的檢出率顯著高于其他3種方法(表1)。

3　討論

直接涂片法適用于檢查各種腸道寄生蟲，方法簡便，但由于取材較少，檢出率較低，容易造成漏診，不適合作為低感染地區(qū)的檢測方法，只能配合其他方法使用[9]。飽和鹽水浮聚法主要用于檢查鉤蟲卵、絳蟲卵及球蟲卵囊等比重較小的蟲卵及卵囊，對比重較大的吸蟲卵效果不理想。清水沉淀法常用于檢查吸蟲卵，但是操作復(fù)雜、費時、費力，且蟲卵長時間浸泡在低滲溶液中，易發(fā)生形態(tài)變化，使蟲卵不易辨認[10]。PARATEST液基過濾沉降法，利用液基細胞學(xué)原理，有效地保持了樣本中蟲卵和原蟲的細胞活性，并通過過濾和沉淀體系分離糞便殘渣與蟲卵，只需靜置沉淀15 min便可起到很好的集卵效果，大大提高了蟲卵和寄生蟲的檢出率。在本次試驗中，對多種常見寵物犬腸道寄生蟲均有較高的檢出率，尤其對犬賈第蟲、隱孢子蟲等原蟲的檢出率優(yōu)勢明顯。

表1　4種檢測方法對179只寵物犬糞便樣本腸道寄生蟲檢出率比較

注：與PARATEST液基過濾沉降法比較，“a”P<0.05；“b”，P<0.01。

Note: Compared with PARATEST liquid-based filtration and sedimentation method,"a"P<0.05；"b"P<0.01.

此外，PARATEST液基細胞檢測技術(shù)具有操作簡便，無需特殊儀器，只需一臺顯微鏡即可進行檢測，特適宜基層診療機構(gòu)使用。采集的糞便樣品在PARATEST試劑盒中無需冷藏，可常溫保存15 d，方便運輸及合理安排檢測時機，操作過程中，糞便始終隔離在試劑瓶中，無異味，更受檢驗人員歡迎。