朱旭東，王　敏,朱宇華

(1.西安市高陵區(qū)動物疫病預防控制中心, 陜西西安 710200；2.西安市第三中學,陜西西安 710048)

H7N9亞型禽流感是一種新型流感，于2013年3月底在我國長三角地區(qū)首次出現后，來勢洶洶，在10個月內，造成12個省市148人感染，其中46人死亡[1]。近幾年來發(fā)病數逐年上升，國家衛(wèi)計委公布的疫情統(tǒng)計，僅2017年1月-8月全國就有643人感染，死亡268人，已蔓延到我國17個省、區(qū)、直轄市(不包括港、澳、臺地區(qū))，H7N9亞型禽流感是全球首次發(fā)現的新亞型流感病毒，尚未證實此類病毒是否具有人傳染人的特性[2]?，F階段研究發(fā)現，人感染禽流感病毒的傳染源為攜帶病毒的禽類，H7N9禽流感病人是通過直接接觸禽類或其排泄物污染的物品、環(huán)境而感染[3]。所以，預防人感染H7N9亞型禽流感病毒，必須從源頭上做好家禽亞型H7N9禽流感的預防工作[4]。

家禽方面，2016年之前我國只是在家禽上和活禽交易市場環(huán)境中檢測到H7N9亞型禽流感病毒，無相關家禽發(fā)病報道。2017年我國開始出現家禽感染發(fā)病和大批死亡，根據國家農業(yè)部公布的疫情統(tǒng)計,截止2017年8月我國發(fā)生9起家禽H7N9亞型流感疫情，發(fā)病家禽185 684只，死亡115 259只，因病撲殺958 696只。因此，國家農業(yè)部自2017年秋季在家禽上緊急啟動H7N9流感強制免疫計劃，要求統(tǒng)一使用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，對全國家禽(包括水禽)實施免疫。

西安羅曼實業(yè)有限公司是陜西省最大的種禽企業(yè)，常年存欄種禽15萬只，公司按照《農業(yè)部關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》(農醫(yī)發(fā)﹝2017﹞24號)要求，第一時間采購疫苗，及時對公司全部家禽進行了H7N9禽流感免疫預防。由于是首次使用H7N9禽流感疫苗，目前尚無家禽H7N9禽流感免疫效果田間試驗報道。為及時了解家禽H7N9疫苗免疫后的抗體水平、評價H7N9流感疫苗的免疫效果，為家禽H7N9禽流感防控提供科學的依據，對西安羅曼實業(yè)有限公司的雞群進行了H7N9流感疫苗免疫接種及H7免疫抗體檢測。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1疫苗重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，青島易邦生物工程有限公司生產，批號171374503。

1.1.2試劑及器具0.01 mol/L pH7.2的PBS液;10 mL/L雞紅細胞懸液；禽流感病毒H7亞型抗原，哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司產品，批號2017003；禽流感病毒H7亞型陽性血清，哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司產品，批號2017003；96孔V型微量反應板，微量移液器。

1.2　方法

1.2.1疫苗接種用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)對西安羅曼實業(yè)有限公司的薩索種雞進行免疫，每只雞胸部肌肉注射0.5 mL，首次免疫后間隔1個月進行二次免疫，劑量同為0.5 mL，共計免疫接種146 800只。

1.2.2樣品采集在西安羅曼實業(yè)有限公司薩索種雞用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗首免和二免后21 d,分別對雞群進行翅靜脈抽血。每次選5個雞舍，每個雞舍隨機抽樣20份，兩次共采集血樣200份，在實驗室用離心機分離血清。

1.2.3檢測方法按照國家標準(GB/T18936-2003)采用血凝和血凝抑制試驗(HI試驗)對血清樣品進行H7流感抗體的檢測[5]。

1.2.4判定標準

1.2.4.1免疫合格個體按照《高致病性禽流感診斷技術》(GB/T 18936-2003)，經過血凝抑制試驗(HI)檢測，對H7N9疫苗免疫的家禽，免疫21 d后HI抗體效價≥4 log2為免疫合格[5]。

1.2.4.2免疫合格群體對H7N9疫苗免疫的家禽，免疫合格個體數量占群體總數的70%(含)以上[5]。

2　結果

利用血凝和血凝抑制試驗對西安羅曼有限公司5棟雞舍200份樣品進行了禽流感H7亞型抗體測，結果見表1和表2。

表1　雞群首免H7N9流感疫苗后抗體檢測結果

表2　雞群二免H7N9流感疫苗后抗體檢測結果

由表1可見，雞群用H7N9疫苗第一次免疫后，其免疫抗體水平就達到7 log2～10 log2，平均為8.3 log2，合格率為100%。遠遠高于國家標準個體HI抗體效價≥4 log2、群體免疫合格個體數量占群體總數的70%(含)以上的標準。由表2中可見，雞群用H7N9疫苗第2免疫后，其免疫抗體水平能達到7 log2～13 log2，平均為11.2 log2,合格率為100%。

二次免疫后抗體均比首次免疫后抗體有不同程度提高，提高幅度在1.5～4.1個滴度之間，平均提高2.9個滴度(圖1)。

圖1　不同雞舍雞群首免和二免后抗體水平比較

3　討論

雞群用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗按標準劑量免疫一次，其H7N9流感抗體平均達到8.3 log2，合格率為100%。遠遠高于個體抗體效價≥4 log2，群體合格率≥70%的國家標準，說明用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗對雞群H7N9禽流感免疫效果確實有效。

同一個雞場不同雞舍種雞在免疫接種同一種疫苗以后產生的抗體水平卻不同，說明雞群的日齡、健康情況、整齊度、生物安全措施等對雞只產生免疫抗體有一定的影響[6]。

雞群二免后抗體均比首免后抗體有不同程度提高，但不同雞群提高幅度差異較大，首免后抗體較低的雞群在二免后抗體水平提高幅度比首免抗體較高的雞群提高的幅度大，這可能與抗體對疫苗抗原中和有關。也說明如果雞群首免后抗體如果不理想，可以重新加強免疫一次，以達到提高抗體的效果。

對一般商品雞群，用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗免疫一次即可達到理想的抗體水平，但對種雞而言，因為要考慮的后代的母源抗體水平，最好連續(xù)進行兩次免疫，以使后代雛雞也達到較高抗體水平，提高后代雛雞對H7N9流感病毒的抵抗力。