白崇生，劉健鵬*，謝印乾，韓　斌，王利云，郝玉青，高　艷，張紅梅，劉　鵬，邊益慶

(1.榆林市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西榆林 719000；2.陜西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西西安 710016)

陜北白絨山羊是以遼寧絨山羊?yàn)楦副荆儽焙谏窖驗(yàn)槟副?，采用雜交方式，經(jīng)過(guò)25年培育而成的以產(chǎn)絨為主、絨肉兼用型山羊新品種[1]。陜北白絨山羊養(yǎng)殖主要集中于榆林市，占榆林市羊總飼養(yǎng)量的80%以上。目前，陜北白絨山羊已經(jīng)成為榆林市羊產(chǎn)業(yè)的地標(biāo)性品種。

布魯菌病(Brucellosis)是由布魯菌引起的人畜共患傳染病，可導(dǎo)致牲畜流產(chǎn)、不孕、繁殖成活率低，使役能力下降，產(chǎn)奶量下降等，導(dǎo)致受感染人睪丸炎、關(guān)節(jié)痛，嚴(yán)重影響勞動(dòng)能力。布病與艾滋病、結(jié)核病和狂犬病被列為嚴(yán)重影響人類健康的“四大人畜共患病”[2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)把布病列入必須報(bào)告的傳染病名錄，我國(guó)將其列入二類動(dòng)物疫病名錄[3-4]。多年來(lái)榆林市陜北白絨山羊布病一直處于嚴(yán)重的流行狀態(tài)。雖然榆林市政府一直非常重視布病防控，實(shí)施了以檢疫、監(jiān)測(cè)、撲殺為主的多種防控措施，但布病流行形勢(shì)依然嚴(yán)峻，防控效果不夠明顯，對(duì)畜牧業(yè)健康發(fā)展及公共衛(wèi)生安全造成嚴(yán)重影響。

為了掌握榆林市陜北白絨山羊布病流行情況，估計(jì)其流行率和分布，尋找布病在陜北白絨山羊群間傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素，建立有效的布病預(yù)測(cè)模型，本研究結(jié)合實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)和問(wèn)卷調(diào)查，對(duì)榆林市陜北白絨山羊養(yǎng)殖場(chǎng)戶進(jìn)行了調(diào)查，旨在為榆林市陜北白絨山羊布病的預(yù)警預(yù)測(cè)、防控及凈化提供科學(xué)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，從而提出有效的防控策略，為實(shí)現(xiàn)《榆林市動(dòng)物疫病中長(zhǎng)期規(guī)劃(2012年—2020年)》提出的目標(biāo)奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1試驗(yàn)用動(dòng)物和研究對(duì)象以榆林市轄區(qū)作為試驗(yàn)的實(shí)施目標(biāo)區(qū)域，以存欄50只以上的規(guī)模羊場(chǎng)為目標(biāo)群，以12個(gè)縣(區(qū))所抽場(chǎng)內(nèi)5月齡以上的未免疫羊或免疫超過(guò)6個(gè)月的陜北白絨山羊?yàn)樵囼?yàn)用動(dòng)物。

1.1.3儀器普通離心機(jī)，北京白洋醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品；數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；高壓蒸汽滅菌器，上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司產(chǎn)品；干熱滅菌器、電熱恒溫培養(yǎng)箱，上?，槴\實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品。

1.2　方法

1.2.1抽樣檢測(cè)規(guī)則用兩階段隨機(jī)抽樣策略分別對(duì)全市羊場(chǎng)和場(chǎng)內(nèi)個(gè)體進(jìn)行抽樣，群體水平抽樣框包括各縣(區(qū))大于50只以上的規(guī)模羊場(chǎng)。個(gè)體水平抽樣框?yàn)樵搱?chǎng)大于5月齡的未免疫羊或免疫超過(guò)6個(gè)月的羊。規(guī)模場(chǎng)群體水平抽樣數(shù)量用估計(jì)流行率的方法進(jìn)行計(jì)算[5]，公式為：

個(gè)體水平抽樣數(shù)量用發(fā)現(xiàn)疫病的方法進(jìn)行計(jì)算，公式為：

以2014年的陜北白絨山羊存欄情況為基數(shù)，結(jié)合當(dāng)?shù)夭疾v史資料和流行情況，2015年群體水平抽樣數(shù)量按置信水平(CI)95%，預(yù)期流行率(p)10%，可接受誤差(e)6%計(jì)算；個(gè)體水平抽樣數(shù)量按置信水平(CI)95%，預(yù)期流行率(p) 5%，可接受誤差(e)2%計(jì)算[6]。

2016年，根據(jù)2015年監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，按照95%CI，10%EP，3%AE，進(jìn)行簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣，按照群間相關(guān)系數(shù)(ICC)為0.2，每場(chǎng)抽取30只，確定各縣的抽樣場(chǎng)數(shù)。

SE=1+(m-1)ICC

SE為設(shè)計(jì)效應(yīng)；m為每場(chǎng)抽樣量；ICC為群間相關(guān)系數(shù)。

柳紅的魂兒讓白玉兒勾走了，她只覺(jué)得天昏地轉(zhuǎn)，人一直飄在云里霧里，她胡亂地在街上踏了一圈，才發(fā)覺(jué)自己想要做什么，就馱著半車西瓜匆匆地回家了。但她沒(méi)有回自己的家，而是直接去了蘇秋琴家。那天早晨，柳紅在銀行取錢時(shí)，她看到白天明也從銀行取了四千塊錢，就覺(jué)得蹊蹺；現(xiàn)在想來(lái)，就應(yīng)該是那么回事了，但柳紅不甘心。

n=SS×SE/m

n為抽樣場(chǎng)數(shù)；SS為簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣量；SE為設(shè)計(jì)效應(yīng)；m為每場(chǎng)抽樣量。

1.2.2實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)采集全血后分離血清，置于-20℃冷凍保存。血清樣品用虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初篩檢測(cè)，初篩檢測(cè)陽(yáng)性的用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)，兩個(gè)試驗(yàn)檢測(cè)均為陽(yáng)性的認(rèn)定為血清學(xué)陽(yáng)性，有一個(gè)試驗(yàn)檢測(cè)陰性的則為陰性。所有檢測(cè)試劑購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果輔助用于風(fēng)險(xiǎn)因素分析。

1.2.3問(wèn)卷調(diào)查2015年在抽樣檢測(cè)基礎(chǔ)上，同步開展風(fēng)險(xiǎn)因素問(wèn)卷調(diào)查。對(duì)抽取的養(yǎng)殖場(chǎng)分別進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，涉及養(yǎng)殖場(chǎng)基本信息、飼養(yǎng)管理情況、羊只流通情況、生物安全水平及工作人員情況等17個(gè)假定風(fēng)險(xiǎn)因素。

1.2.4數(shù)據(jù)分析方法

1.2.4.1流行率估計(jì)個(gè)體水平表面流行率(APi)為陽(yáng)性個(gè)體數(shù)除以采樣總數(shù)，個(gè)體水平真實(shí)流行率結(jié)合垂直檢測(cè)試驗(yàn)敏感性(CSe)和特異性(CSp)計(jì)算得到，TPi=(AP+CSp-1)/(CSe+CSp-1)。群體水平表面流行率(APh)為陽(yáng)性群數(shù)除以抽樣總?cè)簲?shù)，群體水平真實(shí)流行率結(jié)合群敏感性(HSe)和群特異性(HSp)計(jì)算得到，TPh=(AP+HSp-1)/(HSe+HSp-1)。真實(shí)流行率的95%置信區(qū)間(CI)通過(guò)以下公式進(jìn)行計(jì)算：

p是真實(shí)流行率，Z為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布中概率p=0.05所對(duì)應(yīng)的值，n為群內(nèi)抽樣數(shù)量[7-8]。

1.2.4.2群間相關(guān)系數(shù)的計(jì)算群間相關(guān)系數(shù)，即不同群的個(gè)體血清學(xué)陽(yáng)性差別，通過(guò)以下公式計(jì)算：

ICC=(MSC-MSE)/[MSC+(Ma-1)×MSE]

n是場(chǎng)數(shù)，m是每場(chǎng)動(dòng)物數(shù)，y是每場(chǎng)陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)，M是采樣總數(shù)，p1是每場(chǎng)陽(yáng)性率，p是總體陽(yáng)性率。

1.2.4.3風(fēng)險(xiǎn)因素分析結(jié)合當(dāng)?shù)氐娘曫B(yǎng)管理情況，提出群間傳播風(fēng)險(xiǎn)因素的假設(shè)，設(shè)計(jì)調(diào)查問(wèn)卷并開展調(diào)查，同步采樣檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)完畢后，將檢測(cè)結(jié)果和問(wèn)卷調(diào)查中收集到的風(fēng)險(xiǎn)因素結(jié)合分析，所有變量均為二分類變量，以養(yǎng)殖場(chǎng)是否為陽(yáng)性場(chǎng)(實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果)為因變量，然后用 Epi info TM 7 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單變量分析，即將養(yǎng)殖場(chǎng)陰、陽(yáng)屬性和每個(gè)解釋變量之間的關(guān)聯(lián)通過(guò)χ2檢驗(yàn)，篩選出P< 0.2 的變量。對(duì)P<0.2的因素進(jìn)行泊松相關(guān)性分析，將泊松相關(guān)系數(shù)小于0.40的變量用于Logistic 多因素回歸分析，倒退法排除差異不顯著的變量(P<0.05)，識(shí)別混雜因素，建立Logistic回歸模型[9]。

2　結(jié)果

2015年，抽樣檢測(cè)規(guī)模羊場(chǎng)486個(gè)，檢測(cè)樣品27 353份，收集布病傳播風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查表2 176份。2016年，抽樣檢測(cè)規(guī)模羊場(chǎng)2 176個(gè)，檢測(cè)樣品122 472份。

2.1　布病流行率及分布

2015年共采集486個(gè)規(guī)模場(chǎng)，27 353份樣品，總體群流行率27.42%，個(gè)體流行率0.934%(0.933%～0.936%)。2016年共采集2 176個(gè)規(guī)模場(chǎng)戶，122 472份樣品，總體群流行率14.09%，個(gè)體流行率0.21%(0.175%～0.245%)。2016年布病流行率較2015年下降了0.724%。陜北白絨山羊布病流行率分布情況見(jiàn)表1。

表1　2015年和2016年榆林市陜北白絨山羊布病流行率情況

2.2　風(fēng)險(xiǎn)因素分析

2.2.1描述性分析2015年風(fēng)險(xiǎn)因素研究結(jié)果表明，榆林市陜北白絨山羊布病相關(guān)的諸多假定風(fēng)險(xiǎn)因素中，外購(gòu)混養(yǎng)的飼養(yǎng)模式、隨意丟棄流產(chǎn)物、產(chǎn)羔地不嚴(yán)格消毒、近1年內(nèi)有羊只引進(jìn)、生產(chǎn)區(qū)與生活區(qū)隔離、2011年以后的新建養(yǎng)殖場(chǎng)等因素是布病發(fā)生的核心風(fēng)險(xiǎn)因素(P<0.05)。另外，消毒頻率高的養(yǎng)殖場(chǎng)的布病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(38.85%)顯著低于消毒頻率低的養(yǎng)殖場(chǎng)(61.65%)，消毒頻率越高，布病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)越低(P<0.01)。每個(gè)假定風(fēng)險(xiǎn)因素單因素分析結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2Logistic 回歸分析通過(guò)對(duì)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析，建立了榆林市陜北白絨山羊布病發(fā)生的預(yù)測(cè)模型：

lgp/(1-p)=-2.392 2+1.610 5x1+1.567 1x2+0.787 4x3+0.723 3x4(-2×lg-Likelihood:116.102 8，P<0.01)

回歸模型中的變量見(jiàn)表3。預(yù)測(cè)模型的ROC曲線(圖1)顯示，該模型可以解釋本次研究中76.4% (95% CI:67.2%～85.6%)的場(chǎng)群。

表2　風(fēng)險(xiǎn)因素的單因素分析

續(xù)表2

變量 Univariate分類 Classification陽(yáng)性率/%Positive rateRR95%CIP各年齡階段混養(yǎng)Mixed feeding of different age goats是 Yes48.880.830.51-1.890.44否 No51.12周圍是否養(yǎng)殖其他動(dòng)物Other breeding animals in surroundings是 Yes43.620.690.42-1.570.55否 No56.38到市場(chǎng)銷售動(dòng)物Goats saled in markets是 Yes54.210.770.57-1.660.38否 No45.79生產(chǎn)區(qū)與生活區(qū)隔離Isolation between production area and living area是 Yes44.460.530.41-0.940.006 7否 No55.54建場(chǎng)時(shí)間 Building farm time2010以前 Before 201040.180.580.42-0.920.0032011以后 After 201159.82是否了解布病 Understanding brucellosis是 Yes49.251.340.37-1.770.79否 No50.75

表3　回歸模型中的變量

圖1　 回歸模型的ROC曲線

3　討論

本文通過(guò)2014年的基礎(chǔ)摸底，對(duì)2015年布病流行情況、流行率分布、風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查分析和2016年風(fēng)險(xiǎn)因素管理控制之后的布病流行情況、流行率分布等進(jìn)行了研究。全面考慮試驗(yàn)特性，排除試驗(yàn)假陽(yáng)性、假陰性以及糾正抽樣的偏差之后，得出了陜北白絨山羊布病真實(shí)流行率和空間分布情況。研究發(fā)現(xiàn)，2015年，榆林市陜北白絨山羊布病群流行率27.42%，個(gè)體流行率0.934%，12個(gè)縣區(qū)布病均在控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)以上，說(shuō)明榆林市陜北白絨山羊布病整體處于較為嚴(yán)重的流行狀態(tài)，這與近年來(lái)榆林市動(dòng)物疫控部門的檢測(cè)監(jiān)測(cè)情況相一致。2016年，本研究通過(guò)編定并發(fā)放風(fēng)險(xiǎn)因素控制指導(dǎo)手冊(cè)、宣傳畫，舉行技術(shù)培訓(xùn)會(huì)，發(fā)放風(fēng)險(xiǎn)因素控制物品以及加強(qiáng)調(diào)運(yùn)檢疫監(jiān)管等控制措施，實(shí)施一系列基于風(fēng)險(xiǎn)因素的控制后，全市12個(gè)縣區(qū)中有7個(gè)縣區(qū)達(dá)到了控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)(個(gè)體流行率低于0.5%)，全市綜合個(gè)體流行率也達(dá)到控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)。說(shuō)明該研究成果的應(yīng)用使得榆林市陜北白絨山羊布病的流行情況得到了有效控制，布病危害進(jìn)一步降低。

該研究通過(guò)2015年風(fēng)險(xiǎn)因素的分析得出，外購(gòu)混養(yǎng)的飼養(yǎng)模式、隨意丟棄流產(chǎn)物、產(chǎn)羔地不嚴(yán)格消毒、近1年內(nèi)有羊只引進(jìn)、生產(chǎn)區(qū)與生活區(qū)隔離、2011年以后的新建養(yǎng)殖場(chǎng)等因素是布病發(fā)生的核心風(fēng)險(xiǎn)因素，為2016年實(shí)施基于風(fēng)險(xiǎn)管理的控制措施提供了依據(jù)。

本研究通過(guò)對(duì)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析，建立了榆林市陜北白絨山羊布病發(fā)生的預(yù)測(cè)模型，預(yù)測(cè)模型的ROC曲線顯示，該模型可以解釋本次研究中76.4%的場(chǎng)群。表明本研究所構(gòu)建的陜北白絨山羊布病預(yù)測(cè)模型在榆林市羊布病發(fā)生的過(guò)程中能夠發(fā)揮比較有效的預(yù)警預(yù)報(bào)作用。