杜鳳霞，王月飛，姚淑娟，呂麗艷，劉秀財，張鳳嬌，郭俊杰，蔣麗艷，王　慧，張　浩

(齊齊哈爾醫(yī)學院，黑龍江齊齊哈爾 161006)

傷口感染是外科領(lǐng)域較為常見的并發(fā)癥之一，直接影響患者的傷口愈合和組織修復(fù)，嚴重者甚至危及生命。敷料是治療傷口感染過程中不可或缺的組成部分。傳統(tǒng)敷料只是暫時性的覆蓋材料，需要及時更換，工作量大[1]，且在愈合過程中易粘連傷口，造成二次損傷[2]。 針對傳統(tǒng)敷料中的不足，近年來許多由新材料、新技術(shù)制成的功能更全面的新型傷口敷料研制成功。隨著靜電紡絲技術(shù)的發(fā)展， 靜電紡絲納米纖維被越來越多地應(yīng)用于敷料領(lǐng)域。靜電紡絲納米抗菌敷料具有很高的比表面積，有很好的透氣性，可以攜載藥物，能促進受損皮膚的恢復(fù),減輕患者痛苦，非常適合用作皮膚敷料[3-10]。但將兩種藥物同時攜載于靜電紡絲膜上制備成傷口敷料的研究鮮有報道。本試驗嘗試以聚乙烯醇(polyvinyl alcohol，PVA)和海藻酸鈉(sodium alginate，SA)為載體，萬古霉素和頭孢吡肟為模型藥物，采用靜電紡絲法制備雙載藥靜電紡絲膜，取得了良好的抑菌效果，可促進傷口愈合。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1菌株質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC44113、銅綠假單胞菌ATCC27853，齊齊哈爾醫(yī)學院檢驗實驗中心保存菌種。

1.1.2試劑聚乙烯醇(PVA)、海藻酸鈉(SA)、萬古霉素及頭孢吡肟，上海阿拉丁試劑公司產(chǎn)品；MH培養(yǎng)基，杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品。

1.1.3儀器超凈工作臺，蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海躍進醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；靜電紡絲設(shè)備，北京永康樂業(yè)科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品。

1.2　方法

1.2.1紡絲溶液的配制稱取12 g PVA，以蒸餾水為溶劑，常溫下在磁力攪拌器上充分攪拌，直至完全溶解制成120 g/L PVA溶液。稱取2 g SA，以蒸餾水為溶劑，常溫下在磁力攪拌器上充分攪拌，直至完全溶解制成20 g/L的SA溶液。將配置好的PVA和SA溶液，按照兩者體積比為9∶1、8∶2、7∶3、6∶4，充分攪拌均勻，靜置。將萬古霉素和頭孢吡肟以1∶2體積比，總質(zhì)量分數(shù)為50 g/kg加入到配制好的PVA、SA混合溶液中，常溫下在磁力攪拌器上攪拌，直至完全溶解。

1.2.2靜電紡絲膜制備方法將1.2.1配制的紡絲溶液，取2 mL注射器，以22號金屬針頭為注射器噴頭，吸入紡絲溶液，將注射器放于紡絲裝置上，紡絲接收器上貼有鋁膜，設(shè)置噴頭與接收器的距離為15 cm，設(shè)置速度為0.08 mm/min，設(shè)置高壓直流電源輸出電壓為15 kV，整個靜電紡絲過程在室溫下進行。8 h后即可在鋁膜上收集到靜電紡絲膜，在干燥通風處自然晾干，即可從鋁膜上將其撕下來。本試驗分別紡絲8、10、12 h，對比紡絲時間對試驗結(jié)果是否有影響。

1.2.3抑菌作用試驗 取干燥好的靜電紡絲膜，用打孔器制備直徑6 mm的圓片備用。取MH培養(yǎng)基，將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌接種于培養(yǎng)基上，將靜電紡絲膜(8、10、12 h)圓片以無菌操作置于培養(yǎng)基表面，放于恒溫培養(yǎng)箱中孵育18 h～24 h，觀察其抑菌作用。

2　結(jié)果

2.1　噴絲效果

PVA和SA以不同體積比混合配制的紡絲溶液，在紡絲過程中噴絲效果不同,結(jié)果見表1。由表1可知，SA含量高時噴絲不穩(wěn)定，并且有大量液滴流出；當PVA和SA體積比為9∶1、8∶2、7∶3時噴絲穩(wěn)定，但體積比為7∶3時,噴絲同時伴有液滴流出，而且噴絲有分股現(xiàn)象；PVA含量越高，噴絲效果越好，當PVA和SA體積比為9∶1和8∶2時噴絲無液滴流出，且噴絲穩(wěn)定，無分股現(xiàn)象?？紤]SA的吸收傷口滲出液作用，應(yīng)盡量增大SA含量，因此確定PVA和SA的最佳體積比為8∶2。

表1　PVA和SA不同體積比的紡絲結(jié)果

2.2　抑菌結(jié)果

本試驗分別檢測了靜電紡絲膜對傷口感染比較常見的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的抑制作用，測得的抑菌環(huán)直徑見表2。由表2可知，本試驗檢測的3種傷口感染的常見病原菌周圍的抑菌圈直徑與萬古霉素、頭孢吡肟的敏感標準相比較，P<0.05，說明3種細菌對制備的靜電紡絲膜(8 h)均為敏感，本試驗制備的靜電紡絲膜具有較強的抗菌作用。

2.3　紡絲時間對于抑菌效果的影響

將本試驗制備的8、10、12 h 3種靜電紡絲膜分別作用于傷口感染常見的3種細菌，37℃孵育18 h～24 h，結(jié)果見圖1。由圖1可知，不同紡絲時間制備的靜電紡絲膜對3種細菌的抑制作用無明顯差異。

表2　靜電紡絲膜對細菌作用的抑菌圈直徑

A.金黃色葡萄球菌;B.大腸埃希菌;C.銅綠假單胞菌；1.8 h;2.10 h;3.12 h

A.Staphylococcusaureus;B.Escherichiacoli;C.Pseudomonasaeruginosa；1.8 h;2.10 h;3.12 h

圖1不同紡絲時間的膜對細菌的抑制作用

Fig.1Inhibitory effect of membranes with different spinning time on bacteria

3　討論

載體材料PVA是一種無毒、無刺激性的親水性高聚物，具有良好的生物親和性、成膜性和生物降解性[11]。SA具有無毒、良好的生物降解性和相容性[12]。本試驗考察了PVA和SA在不同體積比條件下進行紡絲的效果，說明紡絲溶液的黏度直接決定了紡絲的效果，若溶液濃度不夠，噴絲時不穩(wěn)定并且有液滴流出，噴出的絲還會有分股現(xiàn)象。本試驗通過對3種傷口常見病原菌的抑菌作用試驗，證實了本試驗條件下制備的靜電紡絲膜具有良好的抗菌作用，同時證實了不同紡絲時間對細菌的抑制作用并沒有顯著差別。本試驗首次將萬古霉素和頭孢吡肟同時攜載于紡絲液中進行紡絲，其抑菌效果明顯，可作為有效的傷口敷料，在新型傷口敷料方面具有廣闊的應(yīng)用前景。