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        2型糖尿病周圍神經(jīng)病變患者外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與25-(OH)D3的關(guān)系及其意義*

        2018-07-11 06:42:52秦宏超張真穩(wěn)
        關(guān)鍵詞:免疫調(diào)節(jié)百分比外周血

        秦宏超,張真穩(wěn)

        (揚(yáng)州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 內(nèi)分泌科,江蘇 揚(yáng)州 225100)

        糖尿?。╠iabetes mellitus, DM)周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathies, DPN) 是DM主 要的慢性并發(fā)癥之一?!?0%的2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus, T2DM)患者合并有DPN,≥1/3的DPN患者存在針刺、燒灼及電擊等疼痛癥狀[1],嚴(yán)重影響患者正常的工作和生活,也是DM晚期致死、致殘的主要原因之一。T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制涉及多方面,免疫機(jī)制也參與其中。由于疾病病因和長(zhǎng)期病程,患者免疫功能多受到影響,細(xì)胞免疫平衡被破壞,其中T淋巴細(xì)胞亞群的變化尤為顯著。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T-regulatory cell, Tregs)是一類具有獨(dú)特免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群,在維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)和控制自身免疫病的進(jìn)展方面具有重要作用[2]。維生素D(vitamin D, VD)除作為鈣、磷代謝調(diào)節(jié)劑參與骨代謝外,還具有免疫調(diào)節(jié)作用(包括調(diào)節(jié)Tregs各個(gè)亞群比例、促進(jìn)CD4+T分化及上調(diào)Tregs活性等)。血清25-羥維生素D3[25-(OH)D3]在DPN患者的糖代謝、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、氧化應(yīng)激及免疫調(diào)節(jié)方面均發(fā)揮作用[3-5],與DPN具有相關(guān)性[6]。本文旨在探討DPN患者25-(OH)D3和CD4+Tregs的關(guān)系及其意義,為DPN的發(fā)生機(jī)制和治療提供依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2017年1月-2017年7月該院就診的T2DM患者42例。其中,男性26例,女性16例;病程1~40年,平均10.5年;年齡35~86歲,平均(60.36±12.22)歲。所有患者均符合1999年世界衛(wèi)生組織的DM診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):①非DM因素導(dǎo)致的神經(jīng)病變(如腰椎病變、VB12缺乏及格林-巴利綜合征等)、甲狀腺功能亢進(jìn)癥及惡性腫瘤等;②合并有DM高滲昏迷、低血糖及DM酮癥酸中毒等急性并發(fā)癥;③合并有各類急性或慢性感染;④有骨質(zhì)疏松和其他骨代謝異常疾病病史;⑤肝腎功能障礙、心功能不全及甲狀旁腺疾??;⑥半年內(nèi)使用過甲狀旁腺激素、降鈣素、類固醇激素、VD制劑及性激素等藥物。

        1.2 方法

        1.2.1 一般資料采集 記錄每位患者性別、年齡、DM病程等一般數(shù)據(jù),測(cè)量身高、體重,計(jì)算體重指數(shù)(body mass index, BMI)。

        1.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢查 所有受試者空腹≥8 h,于次日清晨抽取靜脈血,采用AU2700型全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)測(cè)定TG、TC、HDL-C、LDL-C、Scr、BUM及尿微量白蛋白(urine microalbuminuria,UMA);采用糖化血紅蛋白測(cè)定儀(美國(guó)Bia-rad公司)對(duì)HbA1c水平進(jìn)行測(cè)定。

        1.2.3 VD3水平測(cè)定及分類 抽取所有受試對(duì)象空腹靜脈血,采用25-(OH)D3試劑盒(英國(guó)IDS公司)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定。依據(jù)25-(OH)D3的水平:≤50 nmol/L為VD3缺乏;50~75 nmol/L為VD3不足;≥75 nmol/L為VD3充足[7]。

        1.2.4 CD4+Tregs檢測(cè) 使用PF-anti-CD25/FITC-anti-CD4熒光標(biāo)記抗體(美國(guó)Serotec公司)標(biāo)記兩組分離好的單個(gè)核細(xì)胞樣本,采用流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)進(jìn)行Tregs檢測(cè),采用CXP Cytometer(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行收集和分析。

        1.2.5 DPN診斷 對(duì)受試者使用肌電誘發(fā)儀(日本光電工業(yè)株式會(huì)社)進(jìn)行肌電圖檢查。確診DPN標(biāo)準(zhǔn)[8]:在明確診斷DM同時(shí)或之后出現(xiàn)神經(jīng)病變,臨床表現(xiàn)與DPN表現(xiàn)(麻木、疼痛及感覺異常等)相符;5項(xiàng)檢查(溫度覺、足部感覺、踝反射、振動(dòng)覺及神經(jīng)傳導(dǎo)速度)≥2項(xiàng)為異常。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        數(shù)據(jù)分析采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)或中位數(shù)(四分位數(shù))表示,比較用t檢驗(yàn),不滿足或用軼和檢驗(yàn),相關(guān)分析采用Pearson法或Spearman法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組臨床資料比較

        兩組年齡、25-(OH)D3水平及Tregs百分比比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組 BMI、HbA1c、UMA、BUM、Scr及血脂分析等比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

        2.2 兩組外周血25-(OH)D3水平和Tregs百分比的比較

        兩組外周血25-(OH)D3水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),DPN組外周血25-(OH)D3水平比非DPN組更低(P<0.05);兩組外周血Tregs百分比比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),DPN組外周血Tregs百分比非DPN組更低(P<0.05)。見表1和附圖。

        2.3 DPN組外周血Tregs百分比與各臨床指標(biāo)相關(guān)性分析

        DPN組外周血Tregs百分比與25-(OH)D3呈正相關(guān)(P<0.05),與年齡、BMI、HbA1c、UMA、BUM、Scr、TC、TG、HDL-C、LDL-C 無相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

        附圖 兩組Tregs百分比的比較

        表2 DPN組外周血Tregs百分比與臨床指標(biāo)相關(guān)性

        3 討論

        近年來,Tregs作為維持機(jī)體免疫耐受的一個(gè)重要調(diào)控者備受關(guān)注。研究顯示,T2DM外周血淋巴細(xì)胞的數(shù)量和比例以及相關(guān)炎癥因子的改變,支持CD4+、CD25+Tregs參與DM微血管病變過程。楊雪等[9]研究發(fā)現(xiàn),DPN患者外周血中CD4+、CD25+Foxp3+Tregs數(shù)量減少,可能是導(dǎo)致DPN患者神經(jīng)組織自身免疫性損傷的原因之一。但DPN發(fā)病過程中Tregs所起作用進(jìn)行的深入研究仍然較少。

        VD作為一種脂溶性維生素,主要通過與其受體結(jié)合,調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄,進(jìn)一步發(fā)揮其生物學(xué)作用。VD在體內(nèi)的主要存在形式為血清25-(OH)D3,是目前評(píng)價(jià)VD營(yíng)養(yǎng)狀況最有效指標(biāo)[10]。多項(xiàng)研究表明,T2DM中VD缺乏與DPN相關(guān),且VD缺乏可作為DPN發(fā)病的危險(xiǎn)因子[11-12]。SHEHAB等[13]給57例VD缺乏DPN患者補(bǔ)充外源性VD后發(fā)現(xiàn),VD能有效緩解DPN患者的臨床癥狀,使疼痛評(píng)分得到改善。充足的VD還可降低中老年人罹患T2DM的風(fēng)險(xiǎn)[14-15]。而低于人群VD水平中位數(shù)的T2DM患者,5年后發(fā)生微血管并發(fā)癥的概率增高[16]。VD對(duì)DPN的影響機(jī)制還不明確,研究證實(shí)VD可通過影響微血管功能、抑制炎癥反應(yīng)因子及直接保護(hù)作用對(duì)外周神經(jīng)發(fā)揮作用[17-21]。筆者早期研究結(jié)果顯示,T2DM DPN與VD水平有關(guān)[22],本研究也證實(shí)DPN組25-(OH)D3水平較對(duì)照組降低,DPN患者普遍存在VD缺乏現(xiàn)象,進(jìn)一步證實(shí)25-(OH)D3或參與DPN發(fā)生、發(fā)展。

        近期研究表明,VD除經(jīng)典的鈣磷調(diào)節(jié)功能外,還在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,其主要的靶細(xì)胞(包括T淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等)抗原遞呈細(xì)胞。VD可抑制T淋巴細(xì)胞的增殖、介導(dǎo)T細(xì)胞的凋亡并且改變Th1與Th2細(xì)胞之間的比例[23]。有研究表明,25-(OH)D3和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β的聯(lián)合刺激下,可增加FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá),同時(shí)促進(jìn)原始CD4+T細(xì)胞向Tregs分化[24],此結(jié)論在URRY等[25]體外實(shí)驗(yàn)中也得到證實(shí)。PRIETL等[26]臨床研究指出,在血清25-(OH)D3充足的正常對(duì)照組的外周血淋巴細(xì)胞中,Tregs所占比例增高,兩者呈正相關(guān)。王琦等[27]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),VD能刺激Tregs分泌的抑制性細(xì)胞因子產(chǎn)生白細(xì)胞介素10,從而發(fā)揮生物學(xué)作用。

        綜上所述,本研究結(jié)果支持DPN患者外周血CD4+Tregs與 25-(OH)D3水平相關(guān)。25-(OH)D3可通過影響DPN患者Tregs表達(dá)而影響DPN的發(fā)生、發(fā)展,為進(jìn)一步揭示DPN發(fā)病機(jī)制提供新方向,VD或成為未來治療DPN的一個(gè)新靶點(diǎn),其能否通過補(bǔ)充外源性VD來調(diào)節(jié)T細(xì)胞的免疫功能,進(jìn)而改變DPN進(jìn)程,則需要更多的臨床實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

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