袁曉峰 ，俞銀江，趙 博，邵焱焱 ，曾獻存

（1.石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003；2.新疆塔城165團畜牧獸醫(yī)站，新疆 塔城 834609）

作為下丘腦分泌的一種多肽類物質(zhì)，生長激素釋放激素 （GHRH）能正向調(diào)控垂體生長激素（GH）的合成與分泌，從而調(diào)控動物的生長發(fā)育[1]。在草食家畜GHRH基因的研究方面，有關牛GHRH基因的多態(tài)性及其與生長性狀的關聯(lián)分析的研究相對較多[2-4]，而在綿羊上的研究相對較少。王金玲等[5]克隆了草地藏系綿羊生長激素釋放激素基因部分cDNA，并進行了生物信息學分析。馬志杰等[6]利用HaeⅢ內(nèi)切酶分析了歐拉型藏羊GHRH基因內(nèi)含子2部分序列的多態(tài)性。生長性狀是衡量畜牧生產(chǎn)效益的重要經(jīng)濟性狀。近年來，利用引進的優(yōu)良肉羊品種對新疆地方綿羊品種進行雜交改良已逐漸成為該地區(qū)肉羊養(yǎng)殖業(yè)提高養(yǎng)殖效率和提升養(yǎng)殖效益的重要途徑。該研究以薩?？搜蚺c哈薩克羊雜交母羊（以下簡稱薩×哈雜交母羊）為研究對象，對GHRH基因的rs400079090和rs419322328位點多態(tài)性及其與生長性狀的關聯(lián)性進行分析，以確定2個SNP位點對薩×哈雜交母羊生長性狀的影響，旨在尋找能夠應用于綿羊雜交后代生長性狀標記輔助選擇的SNP，以期加快新疆地方肉用綿羊品種的雜交改良進展。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

血樣采自新疆生產(chǎn)建設兵團農(nóng)九師165團養(yǎng)殖的薩×哈雜交成年母羊（n=180），所有羊只在相同環(huán)境下飼養(yǎng)。采用血液基因組DNA提取試劑盒（北京天根生化科技有限公司）提取雜交羊的血液基因組DNA，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

1.2.1 生長性狀指標測定：利用常規(guī)方法對雜交羊的生長性狀指標進行測定，測定的指標包括體斜長、體高、胸圍、胸寬和臀寬。

1.2.2GHRH基因SNP檢測：提取的血液基因組DNA送康普森公司進行MassARRAYSNP檢測。經(jīng)核酸蛋白分析儀及瓊脂糖凝膠電泳檢測符合要求的基因組DNA，調(diào)整基因組DNA濃度大于50 ng/mL。根據(jù)SNP位點序列信息，使用Sequenom公司的引物設計軟件Assay design 3.1設計PCR反應和單堿基擴展引物 （見表1），進行rs400079090和rs419322328位點的基因分型檢測。

1.3 統(tǒng)計分析

2個SNP位點的分型數(shù)據(jù)和生長性狀數(shù)據(jù)的關聯(lián)分析采用SPSS 17.0軟件中的一般線性模型方法[7]：Y=μ+基因型+隨機誤差，其中，Y 為性狀觀察值，μ為平均數(shù)。試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準誤表示。利用Excel軟件計算等位基因頻率、基因型頻率、群體雜合度（He）、多態(tài)信息含量（PIC），并進行χ2檢驗。

2 結果與分析

2.1 群體遺傳參數(shù)

2個SNP的基因型頻率、等位基因頻率及部分遺傳特征參數(shù)見表2。由表2可知，rs400079090位點檢測到3個基因型，rs419322328位點TT基因型缺失。群體雜合度（He）和多態(tài)信息含量（PIC）是評價群體內(nèi)遺傳多樣性的重要指標，薩×哈雜交母羊的rs400079090和rs419322328位點屬于中度多態(tài)（0.25＜PIC＜0.5）。 rs400079090 偏離哈代—溫伯格平衡（P＜0.05），rs419322328 符合哈代—溫伯格平衡（P＞0.05）。

表1 GHRH基因2個SNP位點的引物信息

表2 GHRH基因2個SNP位點的基因型頻率、等位基因頻率及遺傳特征參數(shù)

表3 rs419322328位點不同基因型對薩×哈雜交母羊生長性狀的影響

2.2 關聯(lián)分析

對薩×哈雜交母羊GHRH基因2個SNP位點的不同基因型與5個生長性狀指標進行關聯(lián)分析，結果見表3。由表3可知，rs419322328位點不同基因型對體斜長、胸寬有顯著影響：GG基因型個體的體斜長極顯著小于GT基因型個體 （P＜0.01），胸寬顯著大于GT基因型個體 （P＜0.05）。rs400079090位點不同基因型對薩×哈雜交母羊生長性狀影響不顯著（數(shù)據(jù)略）。

3 討論

作為垂體生長激素的正向調(diào)控因子，GHRH基因在調(diào)控動物生長發(fā)育等方面具有重要作用。程穩(wěn)中等[8]研究表明，通過肌肉注射GHRH表達質(zhì)粒能提高羊的生長速度、促進體重增加，這與Meng等[9]的研究結果相一致。該研究首次對薩×哈雜交母羊GHRH基因的rs400079090和rs419322328位點多態(tài)性進行研究，這2個SNP位點位于GHRH基因5′UTR區(qū)域。成年雜交母羊生長性狀關聯(lián)分析結果表明，rs419322328位點GG基因型個體胸寬顯著大于GT基因型個體 （P＜0.05），但是體斜長極顯著小于GT基因型個體（P＜0.01），這可能與雜交優(yōu)勢或試驗樣本數(shù)較少有關。研究結果為將rs400079090和rs419322328位點應用于綿羊雜交后代生長性狀標記輔助選擇奠定了基礎，在后續(xù)的研究中需要進一步擴大GHRH基因SNP選擇范圍，擴大試驗樣本數(shù)量，并在回交群體中進行進一步驗證。

[1]劉建文，施用暉，樂國偉.動物生長軸的激素調(diào)控[J].中國飼料，2003（14）：7-9.

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[5]王金玲，王永，劉魯蜀，等.草地藏系綿羊生長激素釋放激素基因部分cDNA的克隆及生物信息學分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學報，2015，31（3）：595-599.

[6]馬志杰，魏雅萍，鐘金城，等.藏綿羊GHRH基因部分片段的克隆及HaeⅢ-RFLP分析[J].河南農(nóng)業(yè)科學，2008（2）：95-98.

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[8]程穩(wěn)中，宋志強，辛彩霞，等.肌注異位表達GHRH質(zhì)粒對羔羊體重變化的影響 [J].新疆農(nóng)墾科技，2007（6）：27-28.

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