陳秋雨，隋志遠(yuǎn)，潘凱利，高鵬翔，劉 琪，劉文強(qiáng)

（聊城大學(xué)，山東 聊城 252059）

近年來，我國對空氣質(zhì)量越來越重視，養(yǎng)殖場的空氣環(huán)境與周邊空氣環(huán)境的質(zhì)量也備受人們的關(guān)注?？諝庵屑?xì)菌數(shù)量超標(biāo)可能會(huì)造成一系列嚴(yán)重的傳染病，氣載病原微生物是致氣源性疾病傳播和發(fā)生的重要因素之一。動(dòng)物從空氣中吸入極少量致病菌后，在某種條件下其可引起動(dòng)物的呼吸道感染，從而導(dǎo)致疾病發(fā)生[1]。大量細(xì)菌性疾病的發(fā)生便與此有關(guān)?？諝馕⑸锏姆N類和含量已成為畜禽舍環(huán)境質(zhì)量的重要指標(biāo)，直接關(guān)系到飼養(yǎng)人員與養(yǎng)殖動(dòng)物的健康及其生產(chǎn)性能的發(fā)揮[2]。現(xiàn)階段，我國養(yǎng)殖場養(yǎng)殖密度高，雖然降低了成本，提高了效益，但同時(shí)造成細(xì)菌性傳染病的傳播途徑增多，尤其是導(dǎo)致空氣細(xì)菌含量暴漲，使得養(yǎng)殖過程中細(xì)菌性傳染病暴發(fā)的概率增多。我國由于規(guī)?；B(yǎng)殖起步晚，養(yǎng)殖方面存在許多不足，尤其是對規(guī)?；H場空氣環(huán)境質(zhì)量的研究較少。該試驗(yàn)旨在通過對驢場空氣中細(xì)菌數(shù)量與種類進(jìn)行分析調(diào)查，從而更多地了解驢場及其周圍空氣中細(xì)菌污染情況。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)儀器：高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、恒溫培養(yǎng)箱（2臺(tái)）、移液槍、天平、菌落計(jì)數(shù)器、試管、平皿、吸管、酒精燈、接種環(huán)、玻璃瓶、XK細(xì)菌生化鑒定試劑盒、細(xì)菌鑒定儀。

圖1 驢場不同空氣環(huán)境中的細(xì)菌總數(shù)

1.1.2 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、LB營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、中國藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.3 樣本的采集：為了解驢場空氣中細(xì)菌含量及對周邊環(huán)境空氣中細(xì)菌含量的影響，分別依次對驢場內(nèi)，驢場場區(qū)內(nèi)，距驢場50 m處、100 m處、150 m處、200 m外進(jìn)行采樣；同時(shí)選擇分娩驢舍、保育驢舍、種公驢舍、場區(qū)舍間4處不同舍型環(huán)境進(jìn)行采樣。采樣時(shí)將制作好的培養(yǎng)基暴露在固定地點(diǎn)10 min，然后儲(chǔ)存在無菌容器中。

1.1.4 取樣地點(diǎn)與時(shí)間：該次試驗(yàn)以我國國內(nèi)唯一的黑毛驢良種繁育中心——山東聊城東阿縣國家黑毛驢繁殖中心為取樣地點(diǎn)，取樣時(shí)間為2018年1—2月，進(jìn)而了解冬季規(guī)?；B(yǎng)殖場的空氣環(huán)境中的細(xì)菌組成情況。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集：用自然沉降法收集空氣細(xì)菌，采用營養(yǎng)瓊脂測量細(xì)菌菌落總數(shù)。養(yǎng)殖場區(qū)內(nèi)沿場區(qū)長軸上均勻選3個(gè)點(diǎn)，在場區(qū)1條對角線距場中心等距離處選2個(gè)點(diǎn)，共選5個(gè)采樣點(diǎn)，距地面約50～80 cm，每點(diǎn)放置1個(gè)普通瓊脂培養(yǎng)基采樣。每次采樣10 min。采集樣本的同時(shí)測定并記錄舍內(nèi)氣溫、相對濕度。養(yǎng)殖場外取下風(fēng)向50、100、150、200、500 m設(shè)采樣點(diǎn)，以上采樣點(diǎn)每點(diǎn)各放置1個(gè)普通瓊脂培養(yǎng)基，與場區(qū)內(nèi)同時(shí)進(jìn)行采樣。

1.2.2 樣品處理：采樣后，將培養(yǎng)皿放37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h后用菌落計(jì)數(shù)器記錄培養(yǎng)皿細(xì)菌菌落數(shù)。按奧氏計(jì)算公式計(jì)算菌落總數(shù)：C=50000N/AT[C：每立方米菌落總數(shù)（CFU/m3）；N：每皿菌落數(shù)（個(gè)）；A：培養(yǎng)皿面積（cm2）；T：采樣時(shí)間（min）]。

1.2.3 優(yōu)勢菌落鑒定：根據(jù)菌落特征，隨機(jī)選擇不同性狀菌落進(jìn)行純培養(yǎng)后，先涂片、染色、鏡檢初步判定細(xì)菌類屬；然后挑選優(yōu)勢菌落進(jìn)行培養(yǎng)特性觀察；再利用XK細(xì)菌生化試劑盒鑒定細(xì)菌的種類，詳細(xì)步驟參考劉憲斌論文中的細(xì)菌鑒定方法[3]。

1.2.4 器材處理：所有使用過的平板、試管、接種環(huán)、塑料吸頭等必須按《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》的規(guī)定進(jìn)行高壓滅菌或焚燒處理。

圖2 驢場及周邊空氣環(huán)境中的細(xì)菌變化

2 結(jié)果與分析

2.1 不同養(yǎng)殖類型的驢場空氣細(xì)菌總數(shù)變化

經(jīng)培養(yǎng)和統(tǒng)計(jì)，在驢場廠區(qū)內(nèi)種公驢舍（開放式驢舍），分娩驢舍（半開放式驢舍），保育驢舍（封閉式驢舍），場區(qū)舍間，場外 50、100、150、200 m 的平均細(xì)菌總數(shù)分別為 8.39×103、3.20×104、3.43×104、1.74 ×104、1.98 ×104、7.87 ×103、9.84 ×103、6.70 ×103CFU/m3（見圖1）。由此可以看出，開放式驢舍細(xì)菌總數(shù)＜半開放式驢舍細(xì)菌總數(shù)＜封閉式驢舍細(xì)菌總數(shù)，驢舍內(nèi)細(xì)菌總數(shù)與驢舍的結(jié)構(gòu)關(guān)系密切。

2.2 驢場周邊空氣環(huán)境中細(xì)菌總數(shù)的變化

經(jīng)培養(yǎng)和統(tǒng)計(jì)，隨著與養(yǎng)殖場距離的增加，驢場周圍細(xì)菌總數(shù)變化見圖2。由折線圖趨勢可見，隨著遠(yuǎn)離場區(qū)環(huán)境，細(xì)菌總數(shù)呈明顯下降趨勢，尤其是從距離驢場50 m處至100 m處細(xì)菌總數(shù)快速減少。由此可見場區(qū)對周邊環(huán)境的影響隨著距離的增加而降低。

2.3 驢場空氣環(huán)境中的菌落種類情況

經(jīng)鑒定，在驢場的空氣樣本中選取的17個(gè)菌落中，有革蘭陽性（G+）菌9株（52.94%）和革蘭陰性（G-）菌 3 株（17.65%），以及真菌 5 株（29.41%）。其中包括葡萄球菌5株 （29.41%），鏈球菌4株（23.52%），大腸桿菌 2株（11.76%），綠膿桿菌株 1株（5.88%）。驢場內(nèi)菌落種類比例見圖3。由圖3可見，在驢場空氣環(huán)境中，主要是革蘭陽性（G+）菌，包括葡萄球菌、鏈球菌，但也有部分真菌及少量革蘭陰性（G-）菌，如大腸桿菌、綠膿桿菌等。

圖3 驢場內(nèi)空氣中的菌落種類

3 討論

該研究所測驢舍環(huán)境中的細(xì)菌的總數(shù)范圍為8.39×103～3.43×104CFU/m3，我國目前沒有關(guān)于驢場養(yǎng)殖環(huán)境的現(xiàn)行的國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以我國規(guī)?；i場現(xiàn)行的國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17824.3—2008《規(guī)模豬場環(huán)境參數(shù)及環(huán)境管理》中規(guī)定保育豬舍環(huán)境中的細(xì)菌數(shù)量不能超過40000 CFU/m3，種公豬舍及妊娠豬舍環(huán)境中的細(xì)菌數(shù)不能超過60000 CFU/m3[4]。該次研究檢測的3種驢舍中的細(xì)菌環(huán)境處于相對正常水平，但種公驢舍與保育驢舍的細(xì)菌總數(shù)差距較大，可見不同舍房的開放程度對其空氣中細(xì)菌總數(shù)有影響。保育期的仔驢需要封閉式的舍房作為保護(hù)，但應(yīng)注意保持其內(nèi)空氣環(huán)境中的細(xì)菌為低濃度。養(yǎng)殖舍環(huán)境微生物的含量與養(yǎng)殖動(dòng)物的生產(chǎn)性能和飼養(yǎng)人員的健康有著十分重要的關(guān)系，有研究表明舍內(nèi)空氣中高含量的細(xì)菌能夠?qū)е吗B(yǎng)殖動(dòng)物和人員對疾病的抵抗力下降、免疫力降低，以及養(yǎng)殖動(dòng)物生長遲緩、生產(chǎn)性能下降。在現(xiàn)代畜牧業(yè)生產(chǎn)過程中改善環(huán)境通風(fēng)的設(shè)計(jì)能夠有效地減少驢舍內(nèi)環(huán)境微生物，從而減少疾病的發(fā)生和傳播[5]。因此建議對于封閉式舍房盡量加強(qiáng)通風(fēng)，定期進(jìn)行消毒，并加強(qiáng)消毒強(qiáng)度和頻率，從而減少仔驢保育期患病的概率。

養(yǎng)殖場是大量動(dòng)物聚集生活的地方，也是環(huán)境中病原微生物污染的一個(gè)重要來源地。近年來，由規(guī)模化養(yǎng)殖場給人們居住環(huán)境帶來的污染問題，已越來越受到人們的重視。據(jù)報(bào)道，畜禽養(yǎng)殖場可以向外排放出人畜共患病病原體150種以上，排污水含腸球菌達(dá)6.6×105CFU/mL、大腸桿菌達(dá) 3.3×105CFU/mL[6-9]。 所以養(yǎng)殖場的選址和控制養(yǎng)殖場周邊環(huán)境污染就極為關(guān)鍵。該試驗(yàn)通過在距場區(qū)不同距離處采集空氣進(jìn)行細(xì)菌采樣，從而獲得其細(xì)菌總數(shù)的變化趨勢，發(fā)現(xiàn)隨著距養(yǎng)殖場的距離變遠(yuǎn)細(xì)菌總數(shù)逐漸降低。我國《公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》已有規(guī)定——公共場所的細(xì)菌數(shù)量應(yīng)不超過6000 CFU/m3。通過該試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在距場區(qū)100～200 m處空氣細(xì)菌總數(shù)較公共場所限定的細(xì)菌數(shù)量略高，建議將養(yǎng)驢場的場區(qū)建設(shè)在遠(yuǎn)離居民區(qū)500 m以外處。

在空氣環(huán)境的菌類環(huán)境構(gòu)成中存在以革蘭陽性菌為主的多種葡萄球菌、鏈球菌，以及部分真菌和少量革蘭陰性菌（如大腸桿菌）。由此看出，空氣中的菌類構(gòu)成復(fù)雜，種類繁多，存在致病性細(xì)菌，因此應(yīng)注意做好養(yǎng)驢場的日常消毒工作。

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