李 磊，劉 暢，李升和，寧康健，姜錦鵬

（安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部豬肉質(zhì)量安全控制重點實驗室，安徽 鳳陽 233100）

堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）可以通過水解磷酸單酯，從而去掉核酸、蛋白質(zhì)、生物堿等底物分子中的磷酸基團，同時生成自由基。ALP廣泛存在于組織與體液中，又以骨組織、肝臟、乳腺等分布濃度最高，是一組同工酶而非單一酶。當(dāng)上述組織器官出現(xiàn)病變時，ALP的活性顯著增強，因此，通過測量血清中的ALP值，可有效反映相關(guān)臟器組織的狀態(tài)。ALP的檢測是臨床重要的檢測項目，對于診斷相關(guān)臟器的病變狀態(tài)具有重要的作用。

測量不確定度作為與測量結(jié)果相聯(lián)系的重要參數(shù)，可表征被測量值的分散性，具有合理性。近年來，測量不確定度的應(yīng)用場景不斷增加，在越來越多的正式場合中替代相對偏差（SD）來表述結(jié)果的可信程度。越來越多的研究人員認(rèn)為測量結(jié)果中應(yīng)附有不確定度的說明，這樣的結(jié)果才是完整且有意義的，不確定度在一定程度上決定了測量結(jié)果的可信程度。根據(jù)ISO 15189的相關(guān)要求，承擔(dān)臨床檢測任務(wù)的實驗室應(yīng)該對臨床檢測結(jié)果的測量不確定度進(jìn)行評估。

該研究依據(jù)計量技術(shù)規(guī)范JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》的相關(guān)要求，以ALP檢測為例，對全自動血清生化分析儀檢測血清中ALP的檢測結(jié)果不確定度進(jìn)行評定，探討在檢測過程中測量不確定度的評定過程，熟悉測量不確定度在儀器法檢測血清學(xué)指標(biāo)中的應(yīng)用，以期找到合理的表征儀器法檢測結(jié)果不確定度的評定模式。

表1 CV內(nèi)數(shù)據(jù)結(jié)果

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

全自動血液生化分析儀 （深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；ALP測定試劑盒 （批號：140317001）；常規(guī)生化復(fù)合校準(zhǔn)品 （批號：150117001，標(biāo)定濃度為212 U/L）；常規(guī)生化復(fù)合定值質(zhì)控品（批號：050217002，標(biāo)定濃度為77.8U/L）；質(zhì)控血清由筆者所在實驗室提供。

1.2 測定過程

試驗過程中，按照儀器使用說明書對儀器進(jìn)行維護和保養(yǎng)，確保儀器的性能狀態(tài)良好；以儀器使用說明書及項目的SOP進(jìn)行檢測，質(zhì)控規(guī)則選擇westgard多規(guī)則。

1.3 檢測方法

全自動血液生化分析儀對于ALP測定主要采用AMP緩沖液法。該方法的檢測原理如反應(yīng)方程式所示：

磷酸對硝基酚+對硝基酚+磷酸鹽

該反應(yīng)生成的對硝基酚可引起405 nm處吸光度上升，其變化速率與ALP的活性成正比。因此，可用下式計算ALP濃度。

ΔA/min=ΔA/min樣本管/校準(zhǔn)管-ΔA/min空白管

1.4 測量不確定度來源分析

對不確定度進(jìn)行分析時，仍是從人員、設(shè)備、材料、方法及環(huán)境進(jìn)行分析。由于使用全自動檢測設(shè)備，并且根據(jù)檢測方法的原理，影響吸光度變化率值的主要因素是檢測體系中的質(zhì)控品的定值。根據(jù)儀器操作規(guī)程，上式中的樣本管可以是樣品或質(zhì)控品。最終所測得的ΔA/min不確定度由以下分量組成：①批內(nèi)精密度引入的不確定度分量CV內(nèi)；②批間精密度引入的不確定度分量CV間；③偏倚（正確度）引入的不確定度分量CVbias。其中CV內(nèi)、CV間、CVbias需要通過檢測獲取，計算公式如下：

（1）方法學(xué)偏倚帶來的不確定度：

式中▽為相對差值平均值為測定次數(shù)，ai%為測定值與已知定值的相對偏差；xi為質(zhì)控血清實驗室測定值，xs為質(zhì)控血清的已知定值；SD為相對差值標(biāo)準(zhǔn)差

（2）合成不確定度：

（3）擴展不確定度：U=kuc，取 95%置信水平時，k=2，U=2uc。

2 結(jié)果與分析

2.1 評定測量不確定度分量

2.1.1 CV內(nèi)測定結(jié)果：單日內(nèi)，對質(zhì)控品重復(fù)測定30次，對所得ALP質(zhì)控結(jié)果計算標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，其變異系數(shù)即為CV內(nèi)，具體數(shù)據(jù)結(jié)果見表1。

2.1.2 CV間測定結(jié)果：整理收集2016年1月—2017年9月期間的質(zhì)控品質(zhì)控數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析ALP質(zhì)控結(jié)果，計算SD和CV，該CV即為CV間，結(jié)果見表2。

表2 CV間數(shù)據(jù)結(jié)果

2.1.3 CVbias測定結(jié)果：單日內(nèi)重復(fù)測定質(zhì)控樣本血清，連續(xù)測定5次，通過質(zhì)控樣本血清的已知定值來計算CVbias，具體數(shù)據(jù)結(jié)果見表3。

表3 CVbias數(shù)據(jù)結(jié)果

2.2 合成不確定度及拓展不確定度

根據(jù)上述結(jié)果得到的CV內(nèi)、CV間與CVbias，按照下式可計算出合成不確定度uc及相對拓展不確定度U：

當(dāng)置信區(qū)間為 95%時，k=2，則 U=kuc=2×5.89%=11.78%。

2.3 檢驗結(jié)果表達(dá)

質(zhì)控樣本血清測量均值為94.83 U/L，則uc=94.83×6.12%=5.59 U/L；U=2×5.80=11.18 U/L；ALP含量測定結(jié)果：（94.83±11.18）U/L（k=2）。

3 討論

近年來，隨著實驗室認(rèn)可制度的大力推廣，不確定度的概念及應(yīng)用不斷普及，越來越多的檢測實驗室及檢測人員對于不確定度的認(rèn)知更加全面，在臨床相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用不斷加大。同一檢測項目在不同實驗室間的結(jié)果互認(rèn)對于實現(xiàn)檢驗一致化和標(biāo)準(zhǔn)化至關(guān)重要，這也是實驗室認(rèn)可及循證檢驗醫(yī)學(xué)的基本要求。

作為一項系統(tǒng)性的工作，檢測工作涉及多個環(huán)節(jié)[1]，檢測結(jié)果的不確定度來源廣泛，人、物、設(shè)備、方法、環(huán)境等各方面都是產(chǎn)生不確定度的因素，而這些環(huán)節(jié)產(chǎn)生的不確定度分量的大小并不一致，因此，需要對這些不確定度在分析之后進(jìn)行計算，最終形成合成不確定度[2-3]。測量不確定度的應(yīng)用對于將實驗室檢測結(jié)果控制在一個合理范圍內(nèi)具有重要作用[4]。通過對人員、機器、材料、方法、環(huán)境等方面進(jìn)行分析[5-8]，對檢測過程中的各環(huán)節(jié)所形成的不確定度的分量進(jìn)行確定，并計算uc及U。通過研究不確定度分量對uc貢獻(xiàn)的大小，不僅可以確定影響檢測結(jié)果質(zhì)量的主要因素，更可以有針對性地進(jìn)行控制并改善相關(guān)因素，實現(xiàn)檢驗工作的持續(xù)改進(jìn)[9]，從而提高檢測質(zhì)量，保證實驗室數(shù)據(jù)的可信度。

該研究以測量不確定度相關(guān)規(guī)范為基礎(chǔ)[10-11]，以血清中ALP含量檢測為研究指標(biāo)，對全自動血液生化分析儀的測量不確定度進(jìn)行了研究，通過開展試驗，計算、整理、分析、試驗數(shù)據(jù)，確定CV內(nèi)、CV間、CVbias等指標(biāo)的不確定度大小，最終獲得uc及U，為判斷相關(guān)動物的生理狀態(tài)以及計算其他指標(biāo)提供值得借鑒的思路。

[1]劉密鳳，劉蔚，郭海，等.臨床生物化學(xué)指標(biāo)測量不確定度的評估 [J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（23）：3153-3154.

[2]李新建.酶聯(lián)免疫法檢測血清丙肝抗體的測量不確定度的評估[J].中國輸血雜志，2013，26（7）：630-632.

[3]WHITE G H，F(xiàn)ARRANCE I.Uncertainty of measurement in quantitative medical testing：a laboratory implementation guide[J].Clin Biochem Rev，2004，25（4）：1-24.

[4]徐潤灝，張潔.8項生化指標(biāo)測量不確定度評估及允許范圍的初步研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2016，36（12）：1777-1783.

[5]梅敏，李海珠，帥虎.血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶測定分析中的測量不確定度評定 [J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2010，28（4）：371-372.

[6]呂賽平，劉琴，王春陽，等.自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白測量不確定度的評估 [J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2014，32（2）：137-138.

[7]崔驪，李向東.酶標(biāo)分析儀檢定結(jié)果的不確定度分析評定[J].中國醫(yī)學(xué)裝備，2017，14（11）：42-44.

[8]李嫻，季伙燕，蘇建友，等.14項臨床化學(xué)檢驗指標(biāo)分析前不確定度評定[J].臨床檢驗雜志，2014，32（6）：460-462.

[9]吳斌，李一松，賀勇，等.25項臨床生物化學(xué)指標(biāo)測量不確定度的評估 [J]. 臨床檢驗雜志，2012，30（5）：378-379.

[10]趙芳，季伙燕，李海泉，等.醫(yī)學(xué)實驗室血清球蛋白不確定度評定[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2015，53（27）：8-11.

[11]WESTGARD J O.Managing quality vs.measuring uncertainty in the medical laboratory [J].Clin Chem Lab Med，2010，48（1）：31-40.