羅佳齡， 彭 霞， 林 堃， 李 莉

（上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院檢驗科，上海 200080）

WFDC2編碼的人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是乳清酸性糖蛋白的一種。近來發(fā)現(xiàn)，HE4與卵巢癌密切相關(guān)，目前已獲得美國食品與藥品監(jiān)督管理局的支持，成為一種卵巢癌新的腫瘤標(biāo)志物[1]。除卵巢癌外，HE4在多種腫瘤中均存在表達(dá)異常升高的現(xiàn)象[2]。肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，目前肺癌常用的腫瘤標(biāo)志物如細(xì)胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE） 、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）相關(guān)抗原等往往在腫瘤負(fù)荷較重時才顯著升高，敏感性和特異性均不令人滿意，不足以幫助臨床早期發(fā)現(xiàn)肺癌。有研究者發(fā)現(xiàn)在部分肺癌患者的血清和組織中HE4可呈高水平表達(dá)[3-4]。本研究通過檢測肺癌患者血清HE4水平來評價HE4在肺癌診斷中的臨床應(yīng)用價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2015年2月—2016年1月于上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院呼吸科、腫瘤科、胸外科住院，首次確診為肺癌的患者226例為肺癌組，其中男154例、女72例，年齡62（56，68）歲。肺癌患者中非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者203例，其中Ⅰ和Ⅱ期患者135例，Ⅲ和Ⅳ期無轉(zhuǎn)移者24例，Ⅲ和Ⅳ期有轉(zhuǎn)移者44例；小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）患者23例，其中局限期（limited-stage disease，LD）8例，廣泛期（extensive-stage disease，ED）15例。所有病例均經(jīng)臨床和病理等確診。正常對照組為同期同地常規(guī)查體、化驗及影像學(xué)等檢查結(jié)果無異常的健康體檢者100名，其中男50名、女50名，年齡62（41，70）歲。良性疾病對照組為128例在呼吸科住院的單純性肺部良性疾?。òǚ窝?、慢性阻塞性肺病、肺良性腫瘤等，排除含有惡性胸腹水或合并肝、腎、生殖系統(tǒng)疾病或有惡性傾向的病例）患者，其中男69例、女59例，年齡60（49，70）歲。3組研究對象的年齡、性別差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 抽取所有患者術(shù)前清晨空腹肘正中靜脈血3 mL于普通血清管內(nèi)，立即送實驗室，于4 ℃條件下4 000×g離心10 min， 取上清液置1.5 mL離心管內(nèi)，-40 ℃保存待用。另選取在上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院首次確診為肺癌且之后繼續(xù)化療的患者，跟蹤1年，1年后再次抽血檢測血清HE4水平。

1.2.2 檢測方法 HE4測定采用酶聯(lián)免疫法，試劑盒購自瑞典CanAg Diagnostics公司，儀器為上?？迫A生物工程有限公司ST-360全自動酶標(biāo)儀，具體操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。SCC相關(guān)抗原測定試劑盒購自美國雅培公司，儀器為美國雅培公司生產(chǎn)的i2000全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。CYFRA21-l、NSE、CEA檢測采用電化學(xué)發(fā)光法，試劑由德國羅氏公司提供，儀器采用德國羅氏公司生產(chǎn)的E602電化學(xué)發(fā)光儀，質(zhì)控品采用英國朗道公司生產(chǎn)的腫瘤高低值質(zhì)控品，質(zhì)控判斷標(biāo)準(zhǔn)為Westgard多規(guī)則分析。

1.2.3 臨床分期和化療療效評價標(biāo)準(zhǔn) 按照國際抗癌聯(lián)盟（the Union for International Cancer Control，UICC）2009年制定的第7版國際TNM分期標(biāo)準(zhǔn)對腫瘤進(jìn)行分期?；煰熜t按照實體瘤的療效評價標(biāo)準(zhǔn)（response evaluation criteria in solid tumors，RECIST）進(jìn)行評價。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)比較及受試者工作特性（receiver operating characteristic，ROC）曲線的曲線下面積（area under curve ，AUC）用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料分析結(jié)果用中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用秩和檢驗，化療前后比較采用Wilcoxon符號秩和檢驗，聯(lián)合檢測比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清HE4水平的比較

肺癌組血清HE4水平明顯高于正常對照組和良性疾病對照組（P＜0.05）；不同病理類型肺癌患者血清HE4水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 HE4與CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC相關(guān)抗原對肺癌診斷效能的比較

采用肺癌患者和正常人的HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關(guān)抗原測定值作ROC曲線，并一次同時輸入HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關(guān)抗原所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單步回歸且轉(zhuǎn)化成聯(lián)合參數(shù)LOGREGR_Pred1與各項腫瘤標(biāo)志物作ROC曲線比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在診斷肺癌時，HE4的AUC大于其他4項血清腫瘤標(biāo)志物。見表2和圖1。

表1 各組血清HE4水平的比較[pmol/L，M（P25，P75）]

2.3 不同臨床分期肺癌患者血清HE4水平的比較

203例NSCLC患者中，Ⅰ和Ⅱ期患者的血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期患者；Ⅲ和Ⅳ期無轉(zhuǎn)移患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期有轉(zhuǎn)移患者。23例SCLC患者中LD患者與ED患者血清HE4水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 各腫瘤標(biāo)志物及5種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合參數(shù)對肺癌診斷效能的比較

圖1 HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關(guān)抗原單獨和聯(lián)合檢測對肺癌診斷的ROC曲線

2.4 HE4對肺癌療效監(jiān)測的作用

對54例符合要求的肺癌化療患者，化療后1年再次抽血檢測血清HE4水平，發(fā)現(xiàn)19例疾病進(jìn)展患者治療后血清HE4水平升高（P＜0.05），15例部分緩解患者和19例病灶穩(wěn)定患者化療前后血清HE4水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表3 各臨床分期肺癌患者血清HE4水平的比較[pmol/L，M（P25，P75）]

表4 54例化療患者化療前后血清HE4水平的比較 [pmol/L，M（P25，P75）]

3 討論

WFDC2編碼的HE4是由KIRCHHOFF等[5]于1991年在人附睪遠(yuǎn)端上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的。已有研究證明HE4在卵巢漿液性癌及卵巢子宮內(nèi)膜樣癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，能夠反映卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力，其血清水平對于卵巢癌的早期輔助診斷和治療監(jiān)測具有較好的臨床價值[6]。

2006年BINGLE等[7]發(fā)現(xiàn)部分肺癌細(xì)胞可表達(dá)HE4，從此開啟了國內(nèi)外學(xué)者們對HE4與肺癌之間關(guān)系的研究。IWAHORI等[8]對49例肺癌及18例卵巢癌患者血清HE4水平進(jìn)行了測定，結(jié)果顯示2組患者血清HE4水平均較健康組明顯升高；此外，對其中24例化療后患者的生存率與HE4水平的關(guān)系進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)二者也有一定關(guān)系。TOKUISHI等[3]發(fā)現(xiàn)HE4-V3剪切變異體在肺腺癌中的表達(dá)水平會影響患者的預(yù)后。LAMY等[4]認(rèn)為血清HE4水平越高，NSCLC患者的預(yù)后越差。肖然等[9]報道HE4檢測可以明顯提高肺腺癌的檢出率。

本研究結(jié)果顯示，肺癌組患者血清HE4水平高于良性疾病對照組和正常對照組（P＜0.05），說明HE4在鑒別良惡性肺腫瘤方面有一定意義。比較肺腺癌、肺鱗癌、SCLC患者血清HE4水平并無明顯差異（P＞0.05），說明血清HE4水平對不同病理類型的肺癌可能沒有指向性，這與于飛等[10]的研究結(jié)果基本一致，但如果能夠擴(kuò)大肺鱗癌和SCLC的例數(shù)，結(jié)果會更加可靠。本研究繪制的ROC曲線清楚地顯示，HE4的AUC為0.860，比傳統(tǒng)的肺癌血清腫瘤標(biāo)志物單項指標(biāo)的AUC都高，而聯(lián)合檢測后的AUC可提高到0.906，說明HE4對肺癌的早期診斷有更好的特異性和敏感性，這可能與HE4在呼吸道的先天性防御作用有關(guān)。203例NSCLC患者中，Ⅰ和Ⅱ期患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期患者（P＜0.05）；Ⅲ和Ⅳ期無轉(zhuǎn)移患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期有轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。23例SCLC患者中LD患者和ED患者血清HE4水平有明顯的差異，說明血清HE4水平可能與肺癌的進(jìn)展程度密切相關(guān)，推測HE4的來源與肺腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移過程有關(guān)。從54例肺癌患者化療前后的血清水平對比來看，HE4的水平可以反映出化療無效病情進(jìn)展的情況，部分緩解和治療后病灶穩(wěn)定的患者，其HE4血清水平基本上沒有太大波動，可以作為輔助監(jiān)測肺癌化療效果的指標(biāo)之一，但是仍需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)行跟蹤分析。

綜上所述，WFDC2編碼的HE4在肺癌的診斷、疾病進(jìn)展及療效監(jiān)測方面具有較好的應(yīng)用價值。隨著HE4在肺癌人群中的深入研究，HE4在肺癌中的應(yīng)用將日趨廣闊。

[1] FERRARO S，PANTEGHINI M. Is serum human epididymis protein 4 ready for prime time?[J]. Ann Clin Biochem，2014，51（Pt 2）：128-136.

[2] HUANG T，JIANG S W，QIN L，et al. Expression and diagnostic value of HE4 in pancreatic adenocarcinoma[J]. Int J Mol Sci，2015，16（2）：2956-2970.

[3] TOKUISHI K，YAMASHITA S，OHBO K，et al.Splice variant HE4-V3 expression is associated with favorable prognosis in pulmonary adenocarcinoma[J].Tumour Biol，2012，33（1）：103-109.

[4] LAMY P J，PLASSOT C，PUJOL J L. Serum HE4：an independent prognostic factor in non-small cell lung cancer[J]. PLoS One，10（6）：e0128836.

[5] KIRCHHOFF C，HABBEN I，IVELL R，et al.A major human epididymis-specific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors[J]. Biol Reprod，1991，45（2）：350-357.

[6] YILMAZ E P，KUMTEPE Y. Endometrial and ovarian cancer with MR imaging importance of serum HE4 and CA 125 levels in the extent of disease at evaluation[J]. Eurasian J Med，2016，48（3）：192-198.

[7] BINGLE L，CROSS S S，HIGH A S，et al.WFDC2（HE4）：a potential role in the innate immunity of the oral cavity and respiratory tract and the development of adenocarcinomas of the lung[J].Respir Res，2006，7：61.

[8] IWAHORI K，SUZUKI H，KISHI Y，et al. Serum HE4 as a diagnostic and prognostic marker for lung cancer[J]. Tumour Biol，2012，33（4）：1141-1149.

[9] 肖然，胡昊昀，王瑞，等. 血清腫瘤標(biāo)志物HE4檢測在肺癌診斷中的應(yīng)用價值探討[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)，2014， 29（9）：893-896.

[10] 于飛，王倩，鐘殿勝，等. 血清人附睪蛋白4檢測對肺癌的診斷意義[J]. 天津醫(yī)藥，2014，42（2）：116-118.