夏永輝， 韓慶慶， 王守磊， 李 勇

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院檢測中心，天津 300020）

XN-20血液分析儀（簡稱XN-20）運(yùn)用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞術(shù)原理對細(xì)胞進(jìn)行分類、計(jì)數(shù)，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好，可檢測參數(shù)多，分析速度快。在白細(xì)胞分類檢測過程中，當(dāng)存在異常細(xì)胞時(shí)，XN-20白細(xì)胞前體通道（white cell precursor channel，WPC）信息欄處會出現(xiàn)儀器報(bào)警，如原始細(xì)胞、原始細(xì)胞/異常淋巴細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞等。本研究通過比較XN-20 WPC與人工鏡檢的檢測結(jié)果，來探討XN-20 WPC對外周血原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞的檢測性能，從而評價(jià)其臨床應(yīng)用的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年3月13—17日中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院住院及門診患者1 135例，其中住院患者919例，門診患者216例。

1.2 儀器和試劑

XN-20及其配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（日本Sysmex公司），BX31顯微鏡（日本Olympus公司），瑞氏吉姆薩染液，血常規(guī)抗凝管。

1.3 方法

采集患者外周血標(biāo)本，用乙二胺四乙酸二鉀抗凝管進(jìn)行抗凝處理。按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4版）[1]的要求，采用XN-20對標(biāo)本進(jìn)行檢測，同時(shí)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，所有標(biāo)本均在2 h內(nèi)完成檢測。打開WPC，對疑似有原始細(xì)胞、原始細(xì)胞/異常淋巴細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警的標(biāo)本進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)檢測結(jié)果。

根據(jù)美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（the National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS）EP15-A文件[2]要求，取3份不同水平（低水平、中水平、高水平）標(biāo)本，采用常規(guī)方法重復(fù)檢測11次，去掉第1次檢測結(jié)果，取后10次檢測結(jié)果，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差（s）及批內(nèi)精密度[變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）]，評價(jià)XN-20 WPC檢測外周血原始細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞的重復(fù)性。

根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（t h e International Council for Standardization in Haematology，ICSH）的指導(dǎo)方法[3]，取1份高水平標(biāo)本，連續(xù)檢測外周血白細(xì)胞3次，檢測值分別記為H1、H2、H3。取1份低水平標(biāo)本，連續(xù)檢測外周血白細(xì)胞3次，檢測值分別記為L1、L2、L3。按照公式計(jì)算攜帶污染率，該公式為攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

對所有出現(xiàn)儀器報(bào)警的標(biāo)本，制作血涂片；隨機(jī)選取未出現(xiàn)儀器報(bào)警的標(biāo)本，制作血涂片。標(biāo)本經(jīng)瑞氏吉姆薩染色后，由2名有經(jīng)驗(yàn)的操作人員，根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）H20-A2文件[4]要求，用BX31顯微鏡油鏡對血涂片體尾交界處200個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行觀察、分類，對原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算原始細(xì)胞百分比、異常淋巴細(xì)胞百分比。整個(gè)分類過程采用單盲方式，結(jié)果取2名操作人員觀察結(jié)果的平均值。原始細(xì)胞百分比=原始粒細(xì)胞百分比+原始單核細(xì)胞百分比+幼稚粒細(xì)胞百分比+幼稚單核細(xì)胞百分比，異常淋巴細(xì)胞百分比=原始淋巴細(xì)胞百分比+幼稚淋巴細(xì)胞百分比+淋巴瘤細(xì)胞百分比+漿細(xì)胞百分比。異常細(xì)胞百分比≥5%，即判定檢測結(jié)果為陽性；異常細(xì)胞百分比＜5%或未見異常細(xì)胞，即判定檢測結(jié)果為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 XN-20 WPC的重復(fù)性

XN-20 WPC對外周血原始細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞檢測的重復(fù)性良好。見表1、表2。

表1 出現(xiàn)原始細(xì)胞儀器報(bào)警的標(biāo)本重復(fù)性檢測結(jié)果

表2 出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警的標(biāo)本重復(fù)性檢測結(jié)果

2.2 XN-20 WPC的攜帶污染率

采用XN-20 WPC對出現(xiàn)原始細(xì)胞儀器報(bào)警的標(biāo)本進(jìn)行檢測，H1為54.92×109/L，H2為54.34×109/L，H3為54.21×109/L，L1為0.16×109/L，L2為0.19×109/L，L3為0.17×109/L，經(jīng)計(jì)算，攜帶污染率為0.02%。采用XN-20 WPC對出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警的標(biāo)本進(jìn)行檢測，H1為48.61×109/L，H2為48.49×109/L，H3為48.33×109/L，L1為0.91×109/L，L2為1.01×109/L，L3為0.90×109/L，經(jīng)計(jì)算，攜帶污染率為0.02%。

2.3 XN-20 WPC與人工鏡檢的符合率

共有257例標(biāo)本出現(xiàn)原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警，其中同時(shí)出現(xiàn)原始細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警的標(biāo)本共6例，對所有出現(xiàn)儀器報(bào)警的標(biāo)本制作血涂片；共有878例標(biāo)本未出現(xiàn)原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警，隨機(jī)選取117例標(biāo)本制作血涂片。XN-20 WPC與人工鏡檢的檢測結(jié)果符合率情況見表3。

表3 XN-20 WPC與人工鏡檢的檢測結(jié)果符合率

3 討論

XN-20針對前向散射光、側(cè)向散射光、側(cè)向熒光3種信號，運(yùn)用獨(dú)創(chuàng)的數(shù)字技術(shù)和演算法，將血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、白細(xì)胞、單核細(xì)胞等進(jìn)行分類、計(jì)數(shù)，同時(shí)檢測異常細(xì)胞。WPC可對原始細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測。溶血劑（Lysercell WPC）中的表面活性劑可使紅細(xì)胞及血小板溶血、溶解，還可使白細(xì)胞的細(xì)胞膜輕微受損。在此之后，染色液（Fluorocell WPC）中的熒光染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，對核酸等內(nèi)容進(jìn)行染色。根據(jù)細(xì)胞內(nèi)核酸量的不同來檢測白細(xì)胞及異常細(xì)胞。不同臨床疾病患者的原始細(xì)胞和異常淋巴細(xì)胞的性質(zhì)各不相同，因此溶血劑（Lysercell WPC）表面活性劑與染色液（Fluorocell WPC）熒光染料作用而產(chǎn)生的形態(tài)和染色性與正常細(xì)胞相比存在一定的差異，該差異由散射光強(qiáng)度和熒光強(qiáng)度所反映，根據(jù)獨(dú)創(chuàng)的演算法檢測異常細(xì)胞。

為了驗(yàn)證XN-20 WPC對原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞檢測的可靠性，本研究首先對其重復(fù)性、攜帶污染率進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，批內(nèi)CV均＜1.5%，由此可見XN-20 WPC的重復(fù)性良好。XN-20 WPC檢測原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞的攜帶污染率均為0.02%，故XN-20 WPC的分析性能良好。

本研究共對374例標(biāo)本進(jìn)行了人工鏡檢。共有6例標(biāo)本同時(shí)出現(xiàn)原始細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為83.3%，其中1例假陽性標(biāo)本為急性淋巴細(xì)胞白血病患者治療后所采集的標(biāo)本，其外周血血涂片中未發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。出現(xiàn)假陽性的原因可能是由患者經(jīng)治療后白細(xì)胞及異常細(xì)胞總數(shù)降低所致。

共有223例標(biāo)本出現(xiàn)原始細(xì)胞儀器報(bào)警，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為42.2%，假陽性標(biāo)本129例。115例標(biāo)本人工鏡檢未發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。4例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)淋巴瘤細(xì)胞，均來自伯基特淋巴瘤患者；1例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)漿細(xì)胞，來自多發(fā)性骨髓瘤患者；2例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)原始淋巴細(xì)胞，均來自骨髓增殖異常綜合征患者；7例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)原始淋巴細(xì)胞，均來自急性淋巴細(xì)胞白血病患者。另外，人工鏡檢共檢測出14例標(biāo)本有異常淋巴細(xì)胞，而儀器卻將其認(rèn)作原始細(xì)胞，這可能是由患者經(jīng)一段時(shí)間治療細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)發(fā)生變化所致，故儀器未能準(zhǔn)確對其進(jìn)行識別。

共有28例標(biāo)本出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為42.9%，假陽性標(biāo)本16例。14例標(biāo)本人工鏡檢未發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。1例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)早幼粒細(xì)胞，來自急性早幼粒細(xì)胞白血病患者。1例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)幼稚單核細(xì)胞，來自急性單核細(xì)胞白血病患者。儀器將這2例髓系早幼粒細(xì)胞和幼稚單核細(xì)胞認(rèn)作異常淋巴細(xì)胞，這可能是由患者細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生非典型異常改變所致。

共有878例標(biāo)本未出現(xiàn)原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警，隨機(jī)選取117例標(biāo)本制作血涂片，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為97.4%。114例標(biāo)本人工鏡檢未發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。2例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)淋巴瘤細(xì)胞，分別來自彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者及T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤患者。1例標(biāo)本發(fā)現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞，來自感染患者。儀器未能識別這3例假陰性標(biāo)本，發(fā)生了漏檢情況，故在實(shí)際工作中需制定相關(guān)復(fù)檢規(guī)則以防止漏檢。

綜上所述，XN-20 WPC對原始細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞具有一定的檢測、識別能力，但檢測結(jié)果存在一定的假陽性和假陰性情況。國內(nèi)外對此已做了大量的研究工作，建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)自行制定復(fù)檢規(guī)則[5-6]。當(dāng)儀器出現(xiàn)原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞儀器報(bào)警時(shí)，需打開WPC，進(jìn)而對異常細(xì)胞屬原始細(xì)胞還是異常淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測、區(qū)分，同時(shí)應(yīng)結(jié)合人工鏡檢結(jié)果進(jìn)行分析，從而提高檢測的準(zhǔn)確性。

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