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        江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園大型真菌大時(shí)間尺度物種變化研究

        2018-07-07 01:20:54張俊波宋海燕吳均山霍光華胡頌平胡殿明
        生物災(zāi)害科學(xué) 2018年2期
        關(guān)鍵詞:馬勃江西農(nóng)業(yè)大學(xué)藥用菌

        張俊波,宋海燕,吳均山,江 可,霍光華,胡頌平,胡殿明

        (江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 江西省菌物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西 南昌 330045)

        大型真菌在自然生態(tài)系統(tǒng)中起著重要作用, 是生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分; 許多大型真菌種類具有食用、藥用等重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值,是重要的生物資源。了解大型真菌物種的時(shí)空變化規(guī)律是保護(hù)和利用該類資源的基礎(chǔ)。然而,現(xiàn)有大型真菌資源調(diào)查研究主要針對(duì)大型真菌的空間分布[1-12], 在時(shí)間變化規(guī)律方面的研究鮮有報(bào)道,偶有相關(guān)報(bào)道[2,4,13-15]也 是季節(jié)性變化研究,其研究的時(shí)間尺度一般不超過一年。研究大時(shí)間尺度(5 年以上)變化規(guī)律對(duì)了解大型真菌的生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特點(diǎn),及對(duì)其進(jìn)行保護(hù)利用等都具有重要意義。本研究以江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園為主要研究地點(diǎn),在大時(shí)間尺度上長(zhǎng)期跟蹤研究,以探索其變化規(guī)律。

        江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園位于江西省中偏北部,贛江、撫河下游,鄱陽(yáng)湖之濱,南昌市東北面,梅嶺腳下,總占地面積 1.6萬(wàn)畝[16-17], 地處東經(jīng) 115°27′~116°35′、北緯 28°09′~29°11′。常年氣候濕潤(rùn)溫和、雨量充沛、日照充足,無霜期長(zhǎng)、冰凍期短,屬典型中亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)型氣候[17-18]。 年平均氣溫在 17~17.7 ℃,年均降水量在 1 600~1 700 mm,年平均相對(duì)濕度為 78.5%[17], 適合于各類植物和花卉的生長(zhǎng)。校園內(nèi)共有木本植物 88 科 274 屬 412 種,裸子植物 8 科 22 屬 29 種,被子植物 80 科 225 屬 383 種,其中常綠樹種有 200種,占總數(shù) 48.5%[16]; 落葉樹種有 212 種,占總數(shù) 51.5%,兩者比例接近 1:1[16]; 就株型而言,其中喬木198 種,占總數(shù) 48%;灌木 177種,總數(shù) 43%;藤本植物 37種,總數(shù)9%;三者比例約為 5:4:1[16]。 校園內(nèi)植物多樣性及優(yōu)越的自然地理?xiàng)l件和生態(tài)環(huán)境孕育了豐富多樣的大型真菌。

        本課題組于2009 年開始對(duì)江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)大型真菌資源進(jìn)行了初步調(diào)查,并于 2011 年完成第一次調(diào)查,采集標(biāo)本 115份,鑒定為 76 種[1]。 為了長(zhǎng)期跟蹤調(diào)查江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園大型真菌的物種多樣性,探索同一地點(diǎn)的真菌物種在較長(zhǎng)時(shí)間跨度的物種變化規(guī)律,本課題組一直對(duì)江西農(nóng)大校園大型真菌進(jìn)行調(diào)查,并補(bǔ)充記錄了校園內(nèi)大量以前未發(fā)現(xiàn)的物種。

        1 材料與方法

        1.1 研究材料

        本團(tuán)隊(duì)于 2009 年 9 月—2011 年 11 月(第一次調(diào)查)及 2015 年 9 月—2017年 10 月(第二次調(diào)查),先后兩次對(duì)江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園本部為主各進(jìn)行了為期2 年的大型真菌資源調(diào)查,采集的標(biāo)本均保存于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)真菌標(biāo)本館 (The Herbarium of Fungi, Jiangxi Agricultural University, Nanchang, China,HFJAU)。

        1.2 調(diào)查方法

        在學(xué)校本部采用踏查采集標(biāo)本,且在大型真菌生長(zhǎng)高峰期不定時(shí)頻繁多次的調(diào)查采集大型真菌樣品。對(duì)發(fā)現(xiàn)的所有大型真菌子實(shí)體進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)攝影并采集,詳細(xì)記錄標(biāo)本宏觀形態(tài)及生境、習(xí)性及基質(zhì)等相關(guān)信息,保持標(biāo)本完整性帶回實(shí)驗(yàn)室保存。

        1.3 菌株分離與干標(biāo)本制作

        將采集的新鮮子實(shí)體帶回實(shí)驗(yàn)室,采用組織分離和孢子彈射法進(jìn)行菌株分離,并純化保藏于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)菌種保藏中心(Culture Collection of Jiangxi Agricultural University, JAUCC)。取 剩余子實(shí)體一部分用硅膠干燥制作成干標(biāo)本用于以后基因測(cè)序,剩余部分使用烘干器直接烘干,做成干制標(biāo)本保藏。

        1.3.1 組織分離法 使用酒精棉球?qū)⒆訉?shí)體外表的土壤及雜質(zhì)清理干凈,用滅菌后的刀片從菌蓋中央將子實(shí)體切為兩半,將菌蓋與菌柄連接處的組織切為小塊,用滅菌針頭挑取組織小塊接種至提前做好的 PDA培養(yǎng)基上,待長(zhǎng)出菌絲后純化。

        1.3.2 孢子彈射法 先將濾紙中間打直徑為 0.5 cm的小孔,121 ℃滅菌 30 min,冷卻待用(濾紙需比培養(yǎng)皿大)。用酒精棉球?qū)⒆訉?shí)體外表的土壤及雜質(zhì)清理干凈,切取比濾紙孔稍大的菌蓋,將無菌且打好孔的濾紙放在培養(yǎng)皿上,然后把切好的菌蓋輕放于濾紙孔上,菌褶朝下,再將皿蓋蓋在濾紙上方。幾小時(shí)后取出濾紙和菌蓋,蓋上皿蓋,25℃培養(yǎng),待孢子萌發(fā)后純化。

        1.3.3 硅膠標(biāo)本 切取 2 cm組織塊用衛(wèi)生紙包住,置 入小號(hào)自封袋,向 其倒入變色硅膠蓋住組織塊后封口。若變色硅膠變色較明顯,說明水分很多,需再加入變色硅膠,直至硅膠變色不明顯,子實(shí)體完全干燥為止。

        1.4 鑒定方法

        廣泛查閱大型真菌相關(guān)的彩色圖譜及分類學(xué)專著[19-22],采用宏觀特征和顯微結(jié)構(gòu)觀察等方法,對(duì)采集標(biāo)本進(jìn)行綜合分析鑒定,正確界定科名、屬名和種名,并對(duì)其經(jīng)濟(jì)應(yīng)用價(jià)值和生態(tài)習(xí)性等進(jìn)行歸納統(tǒng)計(jì)。

        本研究以分離得到的純菌株為材料,采用 CTAB 法提取總 DNA[11]。 提取過程直接采用 Mix 混合試劑,PCR 擴(kuò)增引物為:ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和 ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)[23]。 PCR擴(kuò)增條件為 95 ℃預(yù)變性 5 min,95 ℃變形 40 s,50 ℃退火 40 s,72 ℃延伸 1 min,35 個(gè)循環(huán),72 ℃后延伸 10 min,1 0 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增結(jié)果;電 泳回收 PCR 產(chǎn)物,使 用了 2×TaqDNA PCRMasterMix(MT201)、瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒(DH101)回收 PCR 產(chǎn)物。PCR 產(chǎn)物送北京博邁德生物有限公司測(cè)序,使 用美國(guó) ABI公司測(cè)序儀器(ABI 3030XL),及 測(cè)序試劑盒 (ABI BigDye Terminator v3.1)進(jìn)行測(cè)序[11]。所得序列在 NCBI上進(jìn)行 Blast比對(duì),進(jìn)行初步的分子鑒定。

        2 調(diào)查結(jié)果

        2.1 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園大型真菌物種資源

        本次調(diào)查為第二次調(diào)查,共采集大型真菌標(biāo)本 160 余份(表 1), 鑒定子囊菌門 2 目3 科 3屬 5 種,擔(dān)子菌門 9目 31科 54屬 104種,合計(jì) 109 種,其中腐生菌 61種,共生菌6 種,寄生菌 1種,菌根菌41 種;食用菌 50 種,藥用菌10 種,食藥兩用菌 8 種,毒菌10 種,分離純化獲得菌株 56 株。第一次調(diào)查鑒定擔(dān)子菌門 7目 27科 42屬 74 種。兩次合計(jì)169 種。

        2.2 大時(shí)間尺度物種變化

        兩次調(diào)查共采集大型真菌 42科,其中,第一次調(diào)查采集 27 科,第二次調(diào)查采集 34 科,兩次調(diào)查都采集到的有18科,占總數(shù)的42.9%,即:Agaricaceae, Amanitaceae, Auriculariaceae, Clavariaceae, Entolomataceae,Fomitopsidaceae, Hygrophoraceae, Hymenochaetaceae, Lyophyllaceae, Marasmiaceae, Mycenaceae, Omphalotaceae,Physalacriaceae, Polyporaceae, Psathyrellaceae, Stereaceae, Strophariaceae, Tricholomataceae。

        表1 兩次調(diào)查的大型真菌科、屬、種統(tǒng)計(jì)

        兩次調(diào)查共采集大型真菌 169 種,其中,第一次采集74 種,第二次采集109 種。兩次調(diào)查都采集到的大型真菌有 13 種,占總數(shù)的 7.7%,即:紫褐蘑菇(A. rubellus) 、耳匙菌(A. vulgare) 、頭狀禿馬勃(C.craniiformis) 、云芝(C. versicolor) 、粉迷孔菌(D. biennis) 、漏斗大孔菌(F. arcularius) 、硬柄小皮傘(M.oreades) 、長(zhǎng)根奧德蘑(O. radicata) 、草地小脆柄菇(P. campestris) 、白黃小脆柄菇(P. candolleana) 、喜濕小脆柄菇(P. hydrophila) 、根白蟻傘(T. eurrhizus) 、東方栓菌(T. orientali) 。第一次調(diào)查采集到,而在第二次調(diào)查中未采集到的大型真菌有 60種,占總數(shù)的 35.5%。第二次調(diào)查采集到,而在第一次調(diào)查中沒有采集到的有 96種,占總數(shù)的 56.8%。

        表2 兩次調(diào)查不同生長(zhǎng)習(xí)性真菌數(shù)量統(tǒng)計(jì) 種

        表3 兩次調(diào)查不同經(jīng)濟(jì)價(jià)值真菌數(shù)量統(tǒng)計(jì) 種

        表4 第二次調(diào)查大型真菌物種名錄

        續(xù)表4

        續(xù)表4

        續(xù)表4

        續(xù)表4

        3 小結(jié)與討論

        3.1 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園大型真菌資源

        通過對(duì)江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園大型真菌大時(shí)間尺度的調(diào)查,共鑒定大型真菌 42 科,81 屬,169 種(表 4),其中傘菌科種類最多,達(dá) 25 種,占全部種類的 14.8%;多孔菌科 12 種,占總數(shù)的 7.1%;紅菇科 11 種,占總數(shù)的 6.5%;3科真菌種數(shù)占總數(shù)的 28.4%。

        按不同的生長(zhǎng)習(xí)性劃分(表2),腐生菌 101 種,占總數(shù)的 59.8%,外生菌根菌 60 種,占總數(shù)的 35.5%;共生菌 7 種,占總數(shù)的 4.1%;寄生菌 1 種,占總數(shù)的 0.6%。腐生菌物種數(shù)量過半,占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),這可能是因?yàn)樾@內(nèi)小林地面積較大倒木及枯枝落葉等多年積累,為腐生菌提供了適宜的生長(zhǎng)環(huán)境。按經(jīng)濟(jì)價(jià)值劃分(表 3),校園內(nèi)大型真菌包括食用菌 77 種,占總數(shù)的 45.6%;藥用菌 16種,占總數(shù)的 9.5%;食藥用菌 8 種,占總數(shù)的 4.7%;有毒菌 25 種,占總數(shù)的 14.8%。

        食用與藥用菌共占 59.8%,其中有8 種為食藥兼用菌,即:頭狀馬勃(C. craniiformis)、 大禿馬勃(C.gigantea)、 墨汁鬼傘(C. atramentarius)、 網(wǎng)紋馬勃(L. perlatum)、 硬柄小皮傘(M. oreades)、 菌核側(cè)耳(P.tuber-regium)、 大孢硬皮馬勃(S. bovista)、 橙黃硬皮馬勃(S. citrinum), 其中菌核側(cè)耳已經(jīng)實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的人工栽培,充分的發(fā)揮其菌核的藥用價(jià)值且為農(nóng)戶帶來了經(jīng)濟(jì)效益[24-26]; 柱狀田頭菇(A. cylindracea)、 盾形木耳(A. peltata)、 哥倫比亞側(cè)耳(P. columbinus)、 巨大革耳(P. giganteus)等食用菌已經(jīng)實(shí)現(xiàn)人工栽培,且深受人們喜愛;雞樅菌(T. albuminosus)、 根白蟻傘(T. eurrhizus)、 裂紋白蟻傘(T. schimperi)、 條紋白蟻傘(T. striatus)、 灰褐紋白蟻傘(T. striatusf. griseus)、 黃褐紋白蟻傘(T. striatusf. ochraceus)、 端圓白蟻傘(T. tylerianus), 這一類統(tǒng)稱為雞樅菌,是一種味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高的食用菌,尤其是在云南極其受消費(fèi)者喜愛,由于這一類真菌和蟻共生,所以導(dǎo)致目前還未能實(shí)現(xiàn)人工栽培,致使野生雞樅菌價(jià)格居高不下;藥用菌有江西蟲草(草木王)(C. jiangxiensis)、 大禿馬勃(C. gigantea)、 云芝(C. versicolor)、 喜熱靈芝(G. calidophilum)、 靈芝(G. lucidum)等,其中江西蟲草為江西省特有蟲草之一,是江西民間應(yīng)用的一味珍稀名貴草藥,主要用于治療各種毒蛇咬傷[27-28];云芝的多糖成分能提高人體免疫力,具保肝、抗癌等功效[29-30]。 我國(guó)食藥用菌眾多[31-32], 但被人們認(rèn)知利用的卻很少,亟待更多的開發(fā)利用。

        本研究分離到菌株 56株,其中包括食用菌柱狀田頭菇(A. cylindracea)、 盾形木耳(A. peltata)、 長(zhǎng)根奧德蘑(O. radicata)、 哥 倫比亞側(cè)耳(P. columbinus)、 弗 羅里達(dá)側(cè)耳(P. floridanus)、 巨 大革耳(P. giganteus)、菌核側(cè)耳(P. tuber-regium)、 雞樅菌(T. albuminosus)、 黃褐紋白蟻傘(T. striatusf. ochraceus)、 端圓白蟻傘(T. tylerianus)等;藥用菌大禿馬勃(C. gigantea)、 江西蟲草(C. jiangxiensis)、 云芝(C. versicolor)、喜熱靈芝(G. calidophilum)、 靈芝(G. lucidum)、 橙黃硬皮馬勃(S. citrinum)等。其中如柱狀田頭菇、盾形木耳、長(zhǎng)根奧德蘑、巨大革耳等食用菌和喜熱靈芝、靈芝等藥用菌及菌核側(cè)耳等是藥用菌,現(xiàn)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)人工栽培,本研究所分離得到的這一部分菌株可作為遺傳育種材料。雞樅菌、黃褐紋白蟻傘、端圓白蟻傘等食用菌和大禿馬勃、江西蟲草等藥用菌由于還未能夠人工栽培,所以可作為馴化栽培的重要菌種資源及食藥用價(jià)值進(jìn)一步研究開發(fā)利用。

        3.2 大時(shí)間尺度物種變化

        本團(tuán)隊(duì)在2009年9月—2011年11月對(duì)梅嶺高校區(qū)大型真菌資源的首次調(diào)查研究,共 采集標(biāo)本115號(hào),鑒定出 74 種大型真菌,占兩次調(diào)查總物種數(shù)的 43.8%,另有 3 種鑒定到屬,共采集 77 種[1]。 第二次調(diào)查采集到大型真菌 109種,占總物種數(shù)的 64.5%,其中 96 種在上次調(diào)查中沒有采集到,占兩次調(diào)查物種總數(shù)的 56.8%。由 此可見,對(duì) 一個(gè)地域短時(shí)間調(diào)查(調(diào)查1次或 1 年調(diào)查多次)所得結(jié)果難以反應(yīng)該地域大型真菌真實(shí)的物種情況。另一方面,在上次調(diào)查所采集的 74種中,有 60種在本次調(diào)查中未采集到(表 4),占總物種數(shù)的 35.5%。這 60 種大型真菌有可能由于人為破壞、營(yíng)養(yǎng)消耗殆盡、氣候變化、植被變化等各種原因在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園消失了,或者在這次調(diào)查的 2 年期間沒有產(chǎn)生子實(shí)體。兩次調(diào)查所得大型真菌物種差異較大,只有 13 種是相同的,分別為:紫褐蘑菇(A. rubellus)、 耳匙菌(A. vulgare)、 頭狀禿馬勃(C.craniiformis)、 云芝(C. versicolor)、 粉迷孔菌(D. biennis)、 漏斗大孔菌(F. arcularius)、 硬柄小皮傘(M.oreades)、 長(zhǎng)根奧德蘑(O. radicata)、 草地小脆柄菇(P. campestris)、 白黃小脆柄菇(P. candolleana)、 喜濕小脆柄菇(P. hydrophila)、 根白蟻傘(T. eurrhizus)、 東方栓菌(T. orientalis), 其中根白蟻傘為共生菌,頭狀禿馬勃為菌根菌,其它均為腐生菌;這一類真菌能夠長(zhǎng)期生存于校園內(nèi),說明適合于它們生長(zhǎng)的環(huán)境未受到破壞。這兩次調(diào)查差異較大的主要原因可能為:兩次調(diào)查相隔四年之久,近幾年校園規(guī)劃的改變、生境變化或受采集季節(jié)性、隨機(jī)性及人為等因素影響,可能改變了部分物種的生長(zhǎng)環(huán)境,致使兩次采集鑒定結(jié)果重復(fù)性不高;部分真菌子實(shí)體的產(chǎn)生具有年周期性,幾年為一結(jié)實(shí)周期,例如:大禿馬勃、端圓白蟻傘、葉綠紅菇等部分大型真菌,在同一位置時(shí)隔 3年二次采集到。

        根據(jù)本研究的結(jié)果,用傳統(tǒng)的踩踏采集大型真菌子實(shí)體的調(diào)查法,連續(xù) 2年多次調(diào)查所得大型真菌物種數(shù)占總物種數(shù)的 44.4%~63.7%??紤]到森林、山地等自然生境往往比校園面積大得多,且由于道路難行、時(shí)間有限等原因,難以做到全方位的覆蓋的踩踏調(diào)查,因此,現(xiàn)有傳統(tǒng)資源調(diào)查方法所得物種數(shù)可能占實(shí)際物種數(shù)的一半不到。再加上有些大型真菌具有特殊的結(jié)實(shí)周期性,實(shí)際物種數(shù)可能還更多。要摸清我國(guó)大型真菌資源家底,不僅要加強(qiáng)對(duì)新地域資源的調(diào)查,對(duì)于已經(jīng)有調(diào)查數(shù)據(jù)的地區(qū),也應(yīng)該重復(fù)調(diào)查,并且可以采用現(xiàn)代分子技術(shù)輔助調(diào)查。

        致謝:江西科技師范大學(xué)趙寬老師對(duì)牛肝菌屬進(jìn)行了鑒定,謹(jǐn)致謝意!

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