張靈靈 郭利芹 徐 可

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腎內(nèi)科,新鄉(xiāng) 453000)

糖尿病是一種嚴(yán)重危害人類生命健康的疾病，在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率極高，糖尿病引起的并發(fā)癥是導(dǎo)致其死亡的重要原因，糖尿病腎病是最為常見(jiàn)的糖尿病并發(fā)癥之一，其主要病理變化為腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化，而腎小管上皮細(xì)胞異常凋亡是造成腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化的重要原因[1,2]。大量的研究顯示，糖尿病患者腎臟組織中常常存在大量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)，影響組織內(nèi)的氧化平衡，造成氧化損傷，進(jìn)一步損害腎組織，研究高糖環(huán)境下的腎小管上皮細(xì)胞凋亡和氧化損傷是探討糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制的重要部分[3,4]。

膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因2(Glioma associated oncog-ene homolog 2,Gli2)是Sonic hedgehog(Shh)信號(hào)通路的關(guān)鍵基因，能夠調(diào)控下游靶基因的激活和轉(zhuǎn)錄過(guò)程，在細(xì)胞凋亡過(guò)程中具有重要作用[5]。研究表明，Shh信號(hào)通路與糖尿病的發(fā)生有關(guān)，其在糖尿病腎病組織中表達(dá)下調(diào)，Gli2作為Shh信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)控基因，在高糖作用后的腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平也下降[6]。為了明確Gli2在糖尿病腎病發(fā)病中的作用，本研究通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法過(guò)表達(dá)腎小管上皮細(xì)胞中的Gli2水平，探討Gli2在腎小管上皮細(xì)胞凋亡和氧化損傷中的作用。

1 材料與方法

1.1材料 腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E購(gòu)自上海研域生物科技有限公司；Lipofectamine2000購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；Gli2過(guò)表達(dá)載體(pcDNA3-Gli2)由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建保存；兔抗Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)一抗、兔抗Gli2一抗、兔抗活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3，Cleaved Caspase-3)一抗、兔抗Ptch相關(guān)跨膜蛋白Smoothened(Smo)一抗、兔抗β 肌動(dòng)蛋白(β-actin)一抗均購(gòu)自美國(guó)Santa公司；Gli2、β-actin引物購(gòu)自南京金斯瑞；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、 Real-time RT-PCR試劑盒均購(gòu)自大連TaKaRa公司；二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，BCA)蛋白濃度檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)pierce公司；ROS含量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海前塵生物科技有限公司；超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)含量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E在含有10%胎牛血清的DMEM中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%時(shí)，用Lipofectamine2000把pcDNA3-Gli2和對(duì)照pcDNA3空載體轉(zhuǎn)染到NRK-52E細(xì)胞中，并且依次命名為pcDNA3-Gli2組和pcDNA3組，以不做轉(zhuǎn)染的細(xì)胞為對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后48 h后，收集各組細(xì)胞，用RT-PCR和Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中Gli2水平。

1.2.2Real-time RT-PCR檢測(cè)Gli2水平 取1.2.1中的各組細(xì)胞，提取細(xì)胞中的RNA，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260/OD280≥1.8。用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA后，進(jìn)行Real-time RT-PCR檢測(cè)。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃ 30 s、95℃ 5 s、58℃ 40 s，共40個(gè)循環(huán)，65℃到95℃溶解曲線，以β-actin為內(nèi)參，2-ΔΔCt法統(tǒng)計(jì)分析基因水平。Gli2上游引物為5′-GTGGGTTAGGGATGGACTGAGG-3′，下游引物5′-GTTTTTGGTGGTAAAGTGGGTGG-3′。β-actin上游引物為5′-GTTGCGTTACACCCTTTCTTGAC-3′，下游引物5′-CTCGGCCACATTGTGAACTTTG-3′。

1.2.3Western blot檢測(cè)Gli2水平 取1.2.1中的各組細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，用BCA定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，蛋白變性后，用60 V的初始電壓電泳后，觀察溴酚藍(lán)進(jìn)入到濃縮膠的底部后，把電壓加大為100 V繼續(xù)電泳。1.5 mA/cm2轉(zhuǎn)膜90 min。5%脫脂奶粉封閉，加入1∶1 000稀釋的一抗在4℃過(guò)夜反應(yīng)，與1∶2 000稀釋后的二抗在室溫孵育90 min，顯色后，凝膠成像系統(tǒng)拍照，用Image-pro-plus 5處理圖片，以β-actin為內(nèi)參，分析目的蛋白水平。

1.2.4細(xì)胞處理 取腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E，按照1.2.1中進(jìn)行轉(zhuǎn)染后，在實(shí)驗(yàn)0 h時(shí)把對(duì)照組細(xì)胞分別用高糖培養(yǎng)液(含有30 mmol/L的葡萄糖、不含血清的DMEM)和低糖培養(yǎng)液(含有5.6 mmol/L的葡萄糖、不含血清的DMEM)培養(yǎng)，將pcDNA3-Gli2組細(xì)胞用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)，48 h后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。將轉(zhuǎn)染pcDNA3-Gli2后的細(xì)胞用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)記為pcDNA3-Gli2+高糖，將不做轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用高糖和低糖培養(yǎng)液分別記為對(duì)照+高糖和對(duì)照+低糖。

1.2.5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡 取1.2.4中處理的各組細(xì)胞，收集含有106個(gè)細(xì)胞，用500 μl的結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，加入5 μl的碘化丙啶(Propidium iodide，PI)和10 μl的膜聯(lián)蛋白 V-FITC(Annexin V-FITC)，室溫，避光反應(yīng)10 min。在1 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平。

1.2.6ROS、SOD含量檢測(cè) 取1.2.4中處理的各組細(xì)胞，收集細(xì)胞。用二氯二氫熒光素二乙酸酯(Dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA)探針?lè)z測(cè)細(xì)胞中的ROS水平，步驟參照試劑盒，用熒光強(qiáng)度表示ROS水平。同時(shí)收集細(xì)胞，用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)SOD含量，步驟參照試劑盒。

1.2.7Western blot檢測(cè)細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Smo水平 取1.2.4中處理的各組細(xì)胞，收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，按照1.2.3中檢測(cè)各組細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Smo水平。

2 結(jié)果

2.1細(xì)胞轉(zhuǎn)染后Gli2表達(dá)水平 如圖1和表1所示，對(duì)照、pcDNA3、pcDNA3-Gli2細(xì)胞中Gli2 mRNA水平為：0.85±0.07、0.82±0.11、3.26±0.24，蛋白水平為：0.16±0.04、0.18±0.01、0.82±0.09。pcDNA3-Gli2細(xì)胞中Gli2 mRNA和蛋白水平明顯高于對(duì)照細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。pcDNA3細(xì)胞中Gli2 mRNA和蛋白水平與對(duì)照細(xì)胞相比差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。pcDNA3-Gli2轉(zhuǎn)染后可以明顯提高腎小管上皮細(xì)胞中Gli2基因和蛋白水平。

2.2細(xì)胞凋亡檢測(cè) 如圖2和表2所示，對(duì)照+低糖、對(duì)照+高糖、pcDNA3-Gli2+高糖細(xì)胞凋亡率依次為：(9.26±0.95)%、(23.54±3.26)%、(18.05±1.36)%。對(duì)照+高糖細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照+低糖細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。pcDNA3-Gli2+高糖細(xì)胞凋亡率明顯低于對(duì)照+高糖細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡，而Gli2可以減少高糖對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。

圖1 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中Gli2蛋白水平Fig.1 Gli2 protein level in cells detected by Western blot

GroupsGli2 mRNAGli2 proteinControl 0.85±0.070.16±0.04pcDNA30.82±0.111)0.18±0.011)pcDNA3-Gli23.26±0.242)0.82±0.092)F236.513129.429P<0.01<0.01

Note：Compared with the control,1)P>0.05;compared with the control,tmRNA=16.697,tprotein=11.607,2)P<0.01.

2.3細(xì)胞中ROS、SOD水平檢測(cè)結(jié)果 如表3所示，以熒光強(qiáng)度表示ROS水平，對(duì)照+低糖、對(duì)照+高糖、pcDNA3-Gli2+高糖細(xì)胞熒光強(qiáng)度依次為：(5.36±0.58)×103AU、(10.69±1.63)×103AU、(7.50±0.95)×103AU，SOD水平為：(16.39±1.41)×103U/L、(7.85±0.83)×103U/L、(12.69±1.14)×103 U/L。對(duì)照+高糖細(xì)胞ROS水平明顯高于對(duì)照+低糖細(xì)胞，而SOD水平明顯低于對(duì)照+低糖細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。pcDNA3-Gli2+高糖細(xì)胞ROS水平明顯低于對(duì)照+高糖細(xì)胞， 而SOD水平明顯高于對(duì)照+高糖細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷，而Gli2可以減少高糖對(duì)腎小管上皮細(xì)胞的氧化損傷。

2.4細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Smo水平檢測(cè) 如圖3和表4所示，對(duì)照+低糖、對(duì)照+高糖、pcDNA3-Gli2+高糖細(xì)胞Bax水平依次為：0.32±0.04、1.14±0.12、0.58±0.08，Smo水平為：0.48±0.06、0.19±0.03、0.34±0.02，Cleaved Caspase-3水平為：0.15±0.02、1.03±0.09、0.64±0.07。對(duì)照+高糖細(xì)胞Bax、Cleaved Caspase-3水平明顯高于對(duì)照+低糖細(xì)胞，而Smo水平明顯低于對(duì)照+低糖細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。pcDNA3-Gli2+高糖細(xì)胞Bax、Cleaved Caspase-3水平明顯低于對(duì)照+高糖細(xì)胞，而Smo水平明顯高于對(duì)照+高糖細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。高糖作用后能夠降低腎小管上皮細(xì)胞Smo水平，升高Bax、Cleaved Caspase-3水平，而Gli2可以部分拮抗高糖對(duì)Bax、Cleaved Caspase-3、Smo水平的影響。

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡Fig.2 Apoptosis was detected by flow cytometry

GroupsApoptosis rate(%)Control+low glucose9.26±0.95Control +high glucose23.54±3.261)pcDNA3-Gli2+high glucose17.85±1.262)F35.458P<0.01

Note：Compared with the control+low glucose,t=7.284,1)P<0.01;compared with control +high glucose,t=2.820,2)P<0.05.

GroupsROS(×103 AU)SOD(×103 U/L)Control+low glucose5.36±0.5816.39±1.41Control +high glucose10.69±1.631)7.85±0.831)pcDNA3-Gli2+high glucose7.50±0.952)12.69±1.142)F16.62041.511P<0.01<0.01

Note：Compared with the control+low glucose,tROS=5.336,tSOD=9.041,1)P<0.01;compared with control+high glucose,tROS=2.929,tSOD=5.945,2)P<0.05.

圖3 Western blot檢測(cè)Bax、Cleaved Caspase-3、Smo水平Fig.3 Level of Bax,Cleaved Caspase-3,Smo detected by Western blot

GroupsBaxSmoCleavedCaspase-3Control+low glucose0.32±0.040.48±0.060.15±0.02Control +high glucose1.14±0.121)0.19±0.031)1.03±0.091)pcDNA3-Gli2+high glucose0.58±0.082)0.34±0.022)0.64±0.072)F70.55438.633130.590P<0.01<0.01<0.01

Note：Compared with the control+low glucose,tBax=11.228,tSmo=7.488,tCaspase-3=16.532,1)P<0.01;compared with control+high glucose,tBax=6.725,tSmo=7.206,tCaspase-3=5.925,2)P<0.01.

3 討論

Shh信號(hào)通路在腦組織、胃腸道、皮膚、肺組織等器官中均有表達(dá)，并且參與胚胎發(fā)育和組織器官生成，Shh信號(hào)通路是存在于脊椎動(dòng)物中的Hedgehog的同源基因，Shh信號(hào)通路是進(jìn)化較為保守，在早期的毛囊發(fā)育、牙齒形態(tài)發(fā)生、肢體發(fā)育、器官發(fā)育等均有重要作用，Shh信號(hào)通路由轉(zhuǎn)錄因子Gli、Ptch相關(guān)跨膜蛋白Smoothened(Smo)、Shh蛋白配體、靶基因、跨膜蛋白受體Patch(Ptch)等組成，當(dāng)細(xì)胞中的Shh和Ptch相結(jié)合后，使Ptch對(duì)Smo的抑制作用被解除，Smo受到甾醇類的影響持續(xù)活化，影響Gli2的轉(zhuǎn)錄，從而影響下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡等一系列過(guò)程，而Gli2反過(guò)來(lái)又可以影響Smo的表達(dá)水平[7-12]。糖尿病腎病作為一種慢性病已經(jīng)嚴(yán)重影響了人類的生命健康，而腎小管上皮細(xì)胞受損是糖尿病腎病發(fā)生的重要原因[13]。Shh作為調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)特性的信號(hào)通路，不僅參與腫瘤、糖尿病心肌病、腦缺血再灌注等疾病的發(fā)生，還與糖尿病腎病的發(fā)生有關(guān)[14,15]。研究顯示，Gli2在糖尿病腎病腎組織中表達(dá)水平減弱，并且在腎小管上皮細(xì)胞中也有表達(dá)，下調(diào)Shh表達(dá)可以抑制高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡[16]。

糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制除了與腎小管上皮細(xì)胞凋亡有關(guān)以外，氧化應(yīng)激也參與其中，高血糖環(huán)境下，腎小管上皮細(xì)胞的糖負(fù)荷加重，導(dǎo)致腎小管對(duì)氧的消耗能力加快，這就容易引起腎小管缺氧，進(jìn)而導(dǎo)致腎組織發(fā)生氧化應(yīng)激，損傷腎小管上皮細(xì)胞[17]。ROS水平與組織內(nèi)的氧化平衡有關(guān)，在正常情況下，適量的ROS在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮作用，而當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的ROS水平異常升高時(shí)，氧自由基的清除劑SOD不能及時(shí)將過(guò)量的ROS清除，導(dǎo)致細(xì)胞膜上的脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化，引起細(xì)胞膜通透性的改變，進(jìn)而引起氧化損傷，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生；另外，細(xì)胞內(nèi)適量的ROS可以發(fā)揮信號(hào)傳導(dǎo)的作用，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)ROS水平過(guò)量升高后，引起細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞發(fā)生紊亂，促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生[18,19]。

本研究結(jié)果顯示，高糖作用后的腎小管上皮細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞中ROS水平升高，SOD水平下降，細(xì)胞中Smo水平也下降，而Gli2過(guò)表達(dá)后的腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)高糖培養(yǎng)后，凋亡減少，ROS水平也降低，Smo水平升高，Gli2可以降低高糖對(duì)腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷，減少細(xì)胞凋亡。Gli2作為Shh信號(hào)通路的關(guān)鍵基因，與Shh同樣可以影響糖尿病腎病腎組織損傷，減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡。

細(xì)胞凋亡是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，是一系列基因共同調(diào)控的作用，也是凋亡蛋白和抗凋亡蛋白共同作用的結(jié)果，是細(xì)胞主動(dòng)發(fā)生的程序性死亡，是機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要組成部分[20]。Caspase蛋白家族和Bcl-2蛋白家族是目前研究的與細(xì)胞凋亡關(guān)系最為密切的兩大蛋白家族，其中Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，Caspase-3作為凋亡執(zhí)行因子，其活化后成為Cleaved Caspase-3是細(xì)胞凋亡不可逆的標(biāo)志，Bax是Bcl-2蛋白家族的成員之一，是一種促凋亡蛋白，其表達(dá)水平升高后發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用[21]。研究顯示，Cleaved Caspase-3、Bax在糖尿病腎病大鼠模型腎組織中水平均升高，并且二者在腎小管上皮細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮促進(jìn)作用[22]。本研究結(jié)果顯示，高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞Cleaved Caspase-3、Bax水平升高，而Gli2可以降低細(xì)胞中Cleaved Caspase-3、Bax水平，說(shuō)明Gli2作用機(jī)制與Cleaved Caspase-3、Bax有關(guān)。

總之，Gli2能夠降低高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷和細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞中Cleaved Caspase-3、Bax水平，在糖尿病腎病腎組織損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。本研究明確了Gli2在高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用，其作用機(jī)制仍需要在后續(xù)研究中繼續(xù)探討，由于本實(shí)驗(yàn)只選用了一種腎小管上皮細(xì)胞，后續(xù)會(huì)在多株細(xì)胞中進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王道周,裘志成,楊 艷,等.姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病大鼠保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2017,33(4):588-592.

Wang DZ,Qiu ZC,Yang Y,etal.Protective effect of curcumin on type 2 diabetic nephropathy rats and mechanism research [J].Chin J Immun,2017,33(4):588-592.

[2] Nishikawa T,Brownlee M,Araki E.Mitochondrial reactive oxygen species in the pathogenesis of early diabetic nephropathy[J].J Diabetes Invest,2015,6(2):137-139.

[3] Lv S,Cheng J,Sun A,etal.Mesenchymal stem cells transplantation ameliorates glomerular injury in streptozotocin-induced diabetic nephropathy in rats via inhibiting oxidative stress[J].Diabetes Res Clin Pract,2014,104(1):143-154.

[4] Bondeva T,Wolf G.Reactive oxygen species in diabetic nephropathy:friend or foe?[J].Nephrol Dialysis Transplant,2014,29(11):1998-2003.

[5] Furmanski AL,Barbarulo A,Solanki A,etal.The transcriptional activator Gli2 modulates T-cell receptor signalling through attenuation of AP-1 and NFκB activity[J].J Cell Sci,2015,128(11):2085-2095.

[6] Kang HM,Ahn SH,Choi P,etal.Defective fatty acid oxidation in renal tubular epithelial cells has a key role in kidney fibrosis development[J].Nat Med,2015,21(1):37-46.

[7] Zhao H,Feng J,Seidel K,etal.Secretion of shh by a neurovascular bundle niche supports mesenchymal stem cell homeostasis in the adult mouse incisor[J].Cell Stem Cell,2014,14(2):160-173.

[8] Tong CK,Fuentealba LC,Shah JK,etal.A dorsal SHH-dependent domain in the V-SVZ produces large numbers of oligodendroglial lineage cells in the postnatal brain[J].Stem Cell Rep,2015,5(4):461-470.

[9] Zhan M,Sun X,Liu J,etal.Usp7 promotes medulloblastoma cell survival and metastasis by activating Shh pathway[J].Biochem Biophys Res Commun,2017,484(2):429-434.

[10] 王寶祥,戴若蓮,李焰生.SHH 對(duì) MCAO 模型大鼠血管新生的影響及作用機(jī)制[J].山東醫(yī)藥,2015,55(14):1-4.

Wang BX,Dai RL,Li YS.Effect and mechanism of SHH on neovascularization of model rats with middle cerebral artery occlusion[J].Shandong Med J,2015,55(14):1-4.

[11] Grzelak CA,Sigglekow ND,McCaughan GW.GLI2 as a marker of hedgehog-responsive cells[J].Hepatology,2015,61(5):1770-1770.

[12] Sun Z,Zhang T,Hong H,etal.miR-202 suppresses proliferation and induces apoptosis of osteosarcoma cells by downregulating Gli2[J].Mol Cell Biochem,2014,397(1-2):277-283.

[13] Lee HJ,Lee DY,Mariappan MM,etal.Hydrogen sulfide inhibits high glucose-induced NADPH oxidase 4 expression and matrix increase by recruiting inducible nitric oxide synthase in kidney proximal tubular epithelial cells[J].J Biological Chem,2017,292(14):5665-5675.

[14] 賀昱霖,劉佳琪,劉 群,等.Sonic hedgehog 信號(hào)通路與食管癌放射抗拒的相關(guān)性研究[J].中國(guó)病理生理雜志,2017,33(6):1043-1047.

He YL,Liu JQ,Liu Q,etal.Relationship between Sonic hedgehog signaling pathways and radioresistance of esophageal cancer[J].Chin J Pathophys,2017,33(6):1043-1047.

[15] 侯世會(huì),李 藝,官 濤,等.Sonic hedgehog 蛋白在糖尿病腎臟病腎間質(zhì)纖維化中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床腎臟病雜志,2017,17(5):276-281.

Hou SH,Li Y,Guan T,etal.Expression and clinical significance of Sonic hedgehog in renal interstitial fibrosis of diabetic nephropathy[J].J Clin Nephrol,2017,17(5):276-281.

[16] Zhao D,Jia J,Shao H.miR-30e targets GLIPR-2 to modulate diabetic nephropathy:in vitro and in vivo experiments[J].J Mol End Ocrinol,2017,59(2):181-190.

[17] Zhang X,Zhao Y,Chu Q,etal.Zinc modulates high glucose-induced apoptosis by suppressing oxidative stress in renal tubular epithelial cells[J].Biological Trace Element Res,2014,158(2):259-267.

[18] Zhang X,Liang D,Lian X,etal.Berberine activates Nrf2 nuclear translocation and inhibits apoptosis induced by high glucose in renal tubular epithelial cells through a phosphatidylinositol 3-kinase/Akt-dependent mechanism[J].Apoptosis,2016,21(6):721-736.

[19] 余 理,黨西強(qiáng),何小解,等.尿酸上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶蛋白水平對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響[J].中華實(shí)用兒科臨床雜志,2011,26(17):1328-1330.

Yu L,Dang XQ,He XJ,etal.Effect of nicotinamide adenine dinucleotidephosphate enzyme protein levels increased uric acid on apoptosis of renal tubular epithelial cells of rats[J].Chin J Appl Clin Pediatr,2011,26(17):1328-1330.

[20] 劉 雪,陳麗香,周曉輝.炎癥小體和細(xì)胞死亡通路相互關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2016,32(5):739-743.

Liu X,Chen LX,Zhou XH.Research progress on the relationship between inflammatory corpuscles and cell death pathways [J].Chin J Immun,2016,32(5):739-743.

[21] Wang GH,Lan R,Zhen XD,etal.An-Gong-Niu-Huang Wan protects against cerebral ischemia induced apoptosis in rats:up-regulation of Bcl-2 and down-regulation of Bax and Caspase-3[J].J Ethnopharmacol,2014,154(1):156-162.

[22] Brezniceanu ML,Lau CJ,Godin N,etal.Reactive oxygen species promote caspase-12 expression and tubular apoptosis in diabetic nephropathy[J].J Am Society Nephrol,2010,21(6):943-954.