陳偉，趙云雷，龔海燕，桑曉慧，崔艷利，趙佩，王紅梅

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所/棉花生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南安陽455000）

抗蟲棉的推廣應(yīng)用對棉花生產(chǎn)及其相關(guān)產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展和穩(wěn)定起著重要的作用[1]。但是由于棉花的常異花授粉等特性以及實(shí)際生產(chǎn)管理等綜合因素影響，抗蟲棉的抗蟲性常常隨著種植的周期增加而減弱，造成不必要的損失。

目前也有一些技術(shù)和方法用于解決上述問題。如使用卡那霉素鑒定篩選抗蟲棉，剔除不抗卡那霉素的棉株，保留抗性植株[2]。但實(shí)際操作過程中由于卡那霉素濃度、噴灑時(shí)機(jī)、噴施方式以及棉花材料本身的耐受程度等原因，鑒定結(jié)果有所偏差，經(jīng)常得到抗性不純即假陽性的植株，影響棉花材料抗蟲性的穩(wěn)定。而利用生物接蟲鑒定篩選抗蟲棉[3]，也會因?yàn)椴蓸訒r(shí)間、接蟲方式、接蟲數(shù)量等因素影響而產(chǎn)生不同的結(jié)果。并且這些方法主要是針對棉花材料是否抗蟲進(jìn)行判斷，雖然能維持抗蟲棉的一致性，但并沒有對抗蟲性強(qiáng)弱進(jìn)行準(zhǔn)確判定，從而影響材料的后續(xù)利用，往往導(dǎo)致棉花材料實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用管理的準(zhǔn)確性和有效性產(chǎn)生偏差，造成不必要的損失。因此降低因棉花抗蟲性因素對棉花生產(chǎn)的影響，顯得尤為重要。為降低杜絕這些因素的影響，有效的途徑是確保棉花材料在保持優(yōu)良性狀的同時(shí)具備高抗蟲性?；谶@一思路在前人的研究基礎(chǔ)上，本課題通過實(shí)踐形成一套有效篩選高抗蟲棉花植株的方法，通過這種方法已有效維持和提高了一些材料的抗蟲性，現(xiàn)總結(jié)如下以供討論和借鑒。

1 方法及流程

在棉花第一片真葉展平后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3 000 mg·kg－1的硫酸卡那霉素溶液噴灑葉面，約1周后拔除子葉和真葉上有黃色斑點(diǎn)的植株，保留無上述反應(yīng)的植株，并逐一編號。

待保留的植株長至4片真葉，且倒1片真葉展平時(shí)，取倒2片或倒3片葉接種棉鈴蟲，每個(gè)葉片上接種棉鈴蟲1齡幼蟲3頭，接種4～6 d后觀察統(tǒng)計(jì)葉片被取食比例和幼蟲死亡數(shù)，依此判斷篩選出高抗及中抗棉株，并進(jìn)行逐一分類編號。具體分類標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算方法參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 2162―2012棉花抗棉鈴蟲性鑒定方法。

蕾花期將高抗植株和中抗植株的花朵全部做自交處理，按照編號收取自交鈴，當(dāng)年底將自交鈴進(jìn)行南繁，每株自交鈴種植成行，每行繼續(xù)做自交處理，收獲時(shí)分單株收取并編號。第二年將高抗自交鈴種植2行，中抗自交鈴種植1行，即按照2∶1比例交叉種植，收獲時(shí)混收。

將混收種子進(jìn)行大田種植便可進(jìn)一步利用。

2 實(shí)踐應(yīng)用

2009年對材料中5017（中棉所29×中棉所17）、中 6416（中棉所 52×中棉所 43）進(jìn)行連續(xù)觀測，發(fā)現(xiàn)田間葉片有被取食現(xiàn)象，蕾鈴期蕾鈴也出現(xiàn)蟲害。2010年在卡那霉素篩選鑒定后，對葉片無反應(yīng)的植株進(jìn)行生物測定時(shí)發(fā)現(xiàn)，Bt蛋白含量低于抗蟲對照中棉所45，篩選抗蟲植株的效果不理想。由于2個(gè)材料耐病優(yōu)質(zhì)，利用價(jià)值較高，需要進(jìn)一步篩選提高。2010年底收獲葉片無反應(yīng)的植株進(jìn)行南繁種植，2011年種植南繁種子，利用上述方法進(jìn)行鑒定篩選。2013年將混收種子進(jìn)行大田種植，與抗蟲對照同樣管理的條件，在田間進(jìn)行靶標(biāo)害蟲的抗蟲檢測，觀測到植株器官蟲害程度大幅降低；同時(shí)田間抽樣進(jìn)行毒蛋白含量檢測，表達(dá)量比對照有了明顯提高（表1），收到了很好的實(shí)際效果。

表1 田間Bt殺蟲蛋白含量檢測結(jié)果ng·g－1

3 注意要點(diǎn)

一是噴灑卡那霉素鑒定應(yīng)選取天氣晴朗的時(shí)候進(jìn)行，便于藥物充分吸收發(fā)揮作用。鑒定處理時(shí)要及時(shí)拔除反應(yīng)株。

二是人工噴灑處理時(shí)，噴霧量不宜太大，不宜行走過快，盡量均勻噴灑到每個(gè)植株。

三是每項(xiàng)鑒定必須設(shè)置陽性及陰性對照，必須依據(jù)各個(gè)對照的反應(yīng)進(jìn)行調(diào)查歸類。歸納分類時(shí)，界限不分明要么不用，要么將它歸類到低一檔的類別中。

四是要把自然成鈴都去除，確保自交徹底。

五是正常吐絮后混收，不收僵瓣花、青鈴花等不成熟的棉鈴。

[1] 陳豪，梁革梅，吳孔明，等.轉(zhuǎn)基因棉和常規(guī)棉葉片對抗Cry1Ac近等基因系棉鈴蟲生長發(fā)育的影響[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2000，36(5)：126-130.

[2] 祝建波，王愛英，吳剛，等.轉(zhuǎn)基因棉花的田間篩選技術(shù)研究[J].棉花學(xué)報(bào)，2000，12(5)：230-233.

[3] 朱加保，楊可勝，產(chǎn)焰坤，等.轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉室內(nèi)鑒定技術(shù)研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2003，19(6)：69-70.