黃曼曼 鄧百萬(wàn) 王夢(mèng)姣 陳文強(qiáng) 劉開(kāi)輝 尹璐

（1. 陜西理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，漢中 723001；2. 陜西理工大學(xué)陜西省食藥用菌工程技術(shù)研究中心，漢中 723001；3. 陜西省漢中市公安局，漢中 723000）

隨著機(jī)油在工業(yè)及日常生活中的廣泛應(yīng)用，其污染已成為人類越來(lái)越重視的問(wèn)題，機(jī)油污染不僅對(duì)環(huán)境造成極大破壞，也很大程度的對(duì)人類健康造成危害［1-2］。而解決機(jī)油污染問(wèn)題研究最多的是通過(guò)一系列物理及化學(xué)方法，但存在著二次污染、成本較高等諸多問(wèn)題。隨之興起了一種高效、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)可承受的綠色清潔技術(shù)——生物修復(fù)技術(shù)，其主要包括3大類，植物修復(fù)技術(shù)、微生物修復(fù)技術(shù)及植物與微生物聯(lián)合修復(fù)技術(shù)［3-7］。植物修復(fù)技術(shù)對(duì)機(jī)油降解能力強(qiáng)，但植物的生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，修復(fù)效率慢，無(wú)法直接快速的分解機(jī)油，微生物修復(fù)技術(shù)不僅能很好的解決此類問(wèn)題，且存在著廣譜、高效、穩(wěn)定、適應(yīng)性強(qiáng)等諸多優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)有些菌株能很好的適應(yīng)強(qiáng)酸強(qiáng)堿等極端環(huán)境，這些是植物達(dá)不到的，所以利用微生物降解機(jī)油已成為機(jī)油污染土壤治理及環(huán)境保護(hù)的研究熱點(diǎn)［8-10］。

自然界中存在著許多能以機(jī)油及其產(chǎn)品為碳源和能源的土著微生物，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能降解機(jī)油的微生物有200多種，其中細(xì)菌、放線菌、真菌等微生物均可使機(jī)油中的烴類化合物得到降解。降解機(jī)油中的烴類化合物的細(xì)菌主要有：嗜麥芽窄食單胞菌（Stenotrophomonas sp.）、微桿菌屬（Microbacterium sp.）、蒼白桿菌屬（Ochrobactrum sp.）、假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）等，其中假單胞菌對(duì)于污染土壤中機(jī)油中烴類物質(zhì)降解治理研究較多，它對(duì)烷烴及芳香烴類均具有較好的降解作用。降解機(jī)油中烴類化合物的放線菌中主要有：分支桿菌屬（Mycobacterium sp.）、諾卡氏菌屬（Nocardia sp.）、放線菌屬（Actinomycetes sp.）等，其中研究較多的是諾卡氏菌屬。降解機(jī)油中烴類化合物的真菌主要有：金色擔(dān)子菌（Aureobasidium sp.）、假絲酵母屬（Candida sp.）、紅酵母屬（Rhodotorula sp.）等，其中研究最多的是假絲酵母，因?yàn)樗鼱I(yíng)養(yǎng)要求低，生長(zhǎng)繁殖快且降解效果顯著［11-15］。通過(guò)從自然生態(tài)環(huán)境或受機(jī)油污染的環(huán)境中篩選高效機(jī)油降解菌，并用于機(jī)油污染土壤及廢水的生物處理，已經(jīng)成為機(jī)油污染環(huán)境生物處理技術(shù)的重要內(nèi)容之一［16-20］。

本研究以20#機(jī)油和真空泵油為唯一碳源，土壤樣品采于漢中某工具廠的污水處理車間內(nèi)部活性污泥，由于該土壤環(huán)境長(zhǎng)期受各種機(jī)油類物質(zhì)的污染，大大增加了土壤環(huán)境中機(jī)油降解菌的存在。從中分離篩選出機(jī)油降解菌，利用紫外分光光度儀測(cè)定各菌株機(jī)油降解率，篩選出機(jī)油高效降解菌，經(jīng)細(xì)菌形態(tài)學(xué)、生理生化及16S rRNA序列分析對(duì)機(jī)油高效降解菌株進(jìn)行鑒定，采用紫外分光光度儀和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）研究菌株降解特性。本研究旨在為機(jī)油污染治理及環(huán)境生物修復(fù)提供新的菌種資源，以期為機(jī)油污染土壤的治理及生態(tài)修復(fù)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要培養(yǎng)基及其配置 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化鈉5.0 g，加水定容至1 L，120℃，1×105Pa滅菌30 min。固體培養(yǎng)基中加瓊脂18.0 g。

MSM培養(yǎng)基（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）：硫酸銨2.0 g，硫酸鎂0.5 g，磷酸氫二鉀1.0 g，磷酸二氫鉀1.0 g，氯化鈉4.0 g，氯化鈣0.02 g，微量元素母液1.0 mL，加水定容至1 L，120℃，1×105Pa滅菌30 min，固體培養(yǎng)基中加瓊脂18.0 g。微量元素母液配置：水100.0 mL，氯化鐵1.2 g，氯化銅0.3 g，氯化鋅0.3 g，氯化鈷0.1 g，硫酸錳0.3 g，鉬酸銨0.1 g。本試驗(yàn)用機(jī)油：等體積20#機(jī)油和真空泵油混合。

1.1.2 主要儀器及設(shè)備 凈化工作臺(tái)（SW-CJ-2FD，蘇州凈化設(shè)備有限公司），電熱恒溫培養(yǎng)箱（DHP-9162，上?；厶﹥x器制造有限公司），高壓蒸汽滅菌器（ML-3751L-PC，日本制造），電熱恒溫干燥箱（101-1AS），K960熱循環(huán)儀（杭州晶格科學(xué)儀器有限公司），PCR擴(kuò)增儀（英國(guó)TECHEN），電泳儀（Bio-Rad），移液器（Eppendorf），4802S紫外分光光度計(jì)（龍尼科上海儀器有限公司），GC-MS氣質(zhì)聯(lián)用儀（Thermo-H2GAJD，美國(guó)賽默飛世爾科技公司）。

1.2 方法

1.2.1 機(jī)油高效降解菌株的分離、篩選及鑒定

1.2.1.1 機(jī)油高效降解菌株的分離和篩選 將污染樣品接種到含機(jī)油1.0 g/L 的MSM液體培養(yǎng)基上，30℃，160 r/min培養(yǎng)7 d，富集培養(yǎng)3次，富集培養(yǎng)后的菌懸液涂布于含機(jī)油1.0 g/L 的MSM固體培養(yǎng)基，選擇具有透明圈且形狀不同的菌株多次在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上劃線，純化培養(yǎng)，將純化后菌株重新轉(zhuǎn)接到含機(jī)油1.0 g/L 的MSM液體培養(yǎng)基中，將能使培養(yǎng)基變混濁的菌株進(jìn)行甘油保藏。

將初步篩選出能以機(jī)油為唯一碳源生長(zhǎng)的機(jī)油降解菌進(jìn)行機(jī)油高效降解菌的復(fù)篩。采用紫外分光光度法測(cè)定機(jī)油的含量［21-22］，挑取純化后的菌株轉(zhuǎn)接入含機(jī)油2.0 g/L的100 mL MSM液體培養(yǎng)基中，30℃，160 r/min培養(yǎng)7 d，以石油醚萃取并定容置50 mL容量瓶［23-24］。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在紫外分光光度計(jì)235 nm處測(cè)其吸光度。機(jī)油降解率的計(jì)算公式如下：

其中，A為空白對(duì)照品吸光度值，B為樣品吸光度值。

1.2.1.2 機(jī)油高效降解菌株的鑒定 形態(tài)特征觀察：將純化后的菌株單菌落接種在牛肉膏蛋白胨固體平板上劃線，37℃恒溫培養(yǎng)2 d，期間觀察其生長(zhǎng)情況，菌落形態(tài)，顯微鏡下觀察菌體形態(tài)（包括菌體特殊結(jié)構(gòu)芽孢、鞭毛等），以及革蘭氏染色特性。

生理生化特征分析：利用氧化酶活性、吲哚試驗(yàn)、甲基紅反應(yīng)、乙酰甲基甲醇試驗(yàn)、糖類發(fā)酵試驗(yàn)、接觸酶試驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)對(duì)菌株進(jìn)行生理生化特性分析［9，25-26］。

16S rRNA基因序列分析：菌株DNA提取參見(jiàn)細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（天根）。

采用細(xì)菌 16S rRNA 通用引物 27F ：5′ -AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3′和 1492R ：5′ -GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3′對(duì)所提DNA進(jìn)行16S rRNA擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系50 μL：2 × Taq Master Mix 0.25 μL，上下引物（10 μmol/L）各 2 μL，模板DNA 1 μL（ 濃 度 10 ng/μL），10 × Buffer 5 μL，10 mmol/L dNTP 5 μL，dd H2O 補(bǔ)齊至 50 μL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性 2 min；94℃ 30 s，55℃退火 30 s，72℃1 min，32個(gè)循環(huán)；72℃延伸2 min，4℃ 保存。PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)后送上海生工生物技術(shù)有限公司進(jìn)行正、反雙向測(cè)序，再于NCBI進(jìn)行序列比對(duì)，確定屬種，并獲取GenBank號(hào)。利用MEGA 6.0，按照鄰接法（Neighbor-joining）法聚類，選擇1 000個(gè)重復(fù)做Bootstrap值分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.2.2 機(jī)油高效降解菌株降解特性的研究

1.2.2.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響 將待測(cè)菌株分別接種至pH為7.4含機(jī)油2.0 g/L的MSM液體培養(yǎng)基中，在30℃，轉(zhuǎn)速160 r/min的恒溫振蕩器中分別培養(yǎng)1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d和9 d，定時(shí)取樣，測(cè)定機(jī)油的殘留濃度，觀察不同培養(yǎng)時(shí)間下不同菌株機(jī)油降解率。

1.2.2.2 溫度對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響 將待測(cè)菌株接種至初始pH為7.4的機(jī)油濃度為2.0 g/L的液體MSM培養(yǎng)基中，分別置于20、25、28、30、35和40℃恒溫振蕩器中，以轉(zhuǎn)速160 r/min避光振蕩培養(yǎng)7 d，定時(shí)取樣，測(cè)定機(jī)油的殘留濃度，觀察不同溫度下不同菌株的機(jī)油降解率［25］。

1.2.2.3 pH對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響 待測(cè)菌株接種至用1 mol/L的HCl或NaOH調(diào)好pH（5.0、6.0、7.0、7.5、8.0、9.0）的機(jī)油濃度為2.0 g/L的液體MSM培養(yǎng)基中，在30℃下以轉(zhuǎn)速160 r/min避光振蕩培養(yǎng)7 d，定時(shí)取樣，測(cè)定機(jī)油的殘留濃度，觀察不同pH下不同菌株的機(jī)油降解率［26］。

1.2.2.4 機(jī)油高效降解菌株在不同機(jī)油組分中的生長(zhǎng)特性 將待測(cè)菌株接種至牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，于30℃，160 r/min振蕩培養(yǎng)2 d，12 000 r/min離心2 min，收集菌體，用生理鹽水沖洗兩遍后加入100 μL無(wú)菌水重懸，分別接種于單一組分的十二烷、十六烷、十八烷、二十二烷、苯、萘、芘和菲為唯一碳源的MSM培養(yǎng)基中，30℃，160 r/min培養(yǎng)5 d，取樣稀釋、涂平板計(jì)數(shù)，計(jì)算在不同機(jī)油組分中細(xì)菌生長(zhǎng)數(shù)，每組3個(gè)平行，并作不加任何機(jī)油組分的MSM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌的空白對(duì)照。

1.2.2.5 機(jī)油高效降解菌株降解特性研究 用GC-MS方法分析降解機(jī)油的殘油組分。先用正己烷萃取和溶解降解后殘油組分，萃取方法與1.2.1利用石油醚萃取機(jī)油的方法相同。用頂空進(jìn)樣器進(jìn)樣，DB-5MS毛細(xì)管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm，柱溫50℃，維持3 min后以15℃/min的速率升到120℃，再以8℃/min升溫速率升到260℃，然后在該溫度保持25 min，載氣氦氣，柱流量1 mL/min，分流比10∶1，進(jìn)樣口溫度250℃，傳輸線溫度260℃，離子源溫度250℃，EI源，電離電壓70 eV，掃描范圍35-650 amu［27-30］。

2 結(jié)果

2.1 機(jī)油高效降解菌株的分離、篩選

分離出54株均能以機(jī)油為唯一碳源生長(zhǎng)，編號(hào)JZ1-JZ54，篩選出其中降解圈較明顯且菌落形態(tài)不同的22株菌株。對(duì)初篩的22個(gè)菌株進(jìn)行機(jī)油降解能力的復(fù)篩，計(jì)算各菌株的機(jī)油降解率，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，初篩的22個(gè)菌株都對(duì)機(jī)油具有一定的降解作用，但不同菌株對(duì)機(jī)油的降解能力明顯不同，降解率最高的達(dá)到42.62%，最低的只有5.52%。其中JZ6、JZ18、JZ41和JZ50這4株菌的機(jī)油降解率超過(guò)30%，并且由多重比較結(jié)果可見(jiàn)，菌株JZ6、JZ18、JZ41和JZ50與其他菌株的機(jī)油降解率具有極顯著差異（P＜0.01），因此選取這4株機(jī)油高效降解菌株做進(jìn)一步鑒定。

表1 各菌株機(jī)油降解率的差異顯著性檢

2.2 機(jī)油高效降解菌株鑒定

2.2.1 機(jī)油高效降解菌的形態(tài)特征觀察 對(duì)機(jī)油高效降解菌株進(jìn)行形態(tài)特征觀察（圖1），4株菌株的菌落顏色，形態(tài)，菌體形態(tài)等都存在差異。其中JZ6菌落顏色為淡橘黃色，菌體形態(tài)呈球形，有芽孢，著生于細(xì)胞中央，無(wú)鞭毛，JZ18菌落顏色為淡黃色，菌體形態(tài)呈鏈狀，無(wú)芽孢，極生鞭毛。JZ41菌落顏色為白色，菌體形態(tài)呈桿狀，有芽孢，著生于細(xì)胞末端，周生鞭毛。JZ50菌落顏色為白色，菌體形態(tài)呈鏈狀，無(wú)芽孢，極生鞭毛，4株菌株均為革蘭氏陰性菌。

圖1 菌株菌落形態(tài)及革蘭氏染色

表2 菌株生理生化特征

2.2.2 機(jī)油高效降解菌的生理生化特征分析 機(jī)油高效降解菌株菌株生理生化試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表2。

2.2.3 機(jī)油高效降解菌的16S rRNA基因測(cè)定 對(duì)機(jī)油高效降解菌進(jìn)行16S rRNA基因測(cè)定，序列分析表明，JZ6與Massilia sp.菌屬序列相似性為97%，JZ18與假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）序列相似性為99%，JZ41與鞘氨醇桿菌屬（Sphingobacterium sp.）序列相似性為98%，JZ50與Shinella zoogloeoides sp.菌屬序列相似性為98%。4株機(jī)油高效降解菌與親緣相近菌株 16S rRNA 序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，如圖2。

結(jié)合4株菌的形態(tài)學(xué)特征及生理生化試驗(yàn)，初 步 確 定JZ6為Massilia sp.菌 屬，GenBank號(hào)為KY996847，JZ18為假單胞菌屬（Pseudomonas sp.），GenBank號(hào)為KY996857，JZ41為鞘氨醇桿菌屬（Sphingobacterium sp.），GenBank號(hào) 為 996866，JZ50為Shinella zoogloeoides sp.菌屬，GenBank號(hào)為996862。

圖2 4株機(jī)油降解菌與親緣相近菌株16 S rRNA序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2.3 機(jī)油高效降解菌株降解特性的研究

2.3.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株機(jī)油降解力的影響 測(cè)定培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株機(jī)油降解力的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。在培養(yǎng)第9天時(shí)，菌株JZ6、JZ18，JZ41和JZ50機(jī)油降解率分別達(dá)到44.50%、34.57%，35.33%和40.20%。菌株JZ6，JZ50在1-5 d機(jī)油降解率增長(zhǎng)較快，第5天后，機(jī)油降率增長(zhǎng)較平緩，處于較穩(wěn)定狀態(tài)，菌株JZ18，JZ41在第7天機(jī)油降率增長(zhǎng)較平緩，處于較穩(wěn)定狀態(tài)。該結(jié)果表明不同菌株最佳降解時(shí)間不一致，菌株培養(yǎng)時(shí)間要控制在一定范圍（5-7 d），菌株機(jī)油降解率不僅能夠達(dá)到最好效果，且株菌投入生產(chǎn)時(shí)，時(shí)間短，效益高。

圖3 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響

圖4 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響

2.3.2 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響 測(cè)定培養(yǎng)溫度對(duì)菌株機(jī)油降解力的影響，結(jié)果見(jiàn)圖4。菌株JZ6在培養(yǎng)溫度為35℃時(shí)，機(jī)油降解率達(dá)到最高43.01%，菌株JZ18，JZ41和JZ50在培養(yǎng)溫度為30℃時(shí)，菌株機(jī)油降解率達(dá)到最高，分別為32.74%、32.48%和38.94%。該結(jié)果表明菌株培養(yǎng)溫度要控制在一定范圍內(nèi)（30-35℃），機(jī)油降解率才能達(dá)到最好效果。并且由于土樣最初富集培養(yǎng)的溫度為30℃，所以4株菌株在30℃時(shí)都有較好的機(jī)油降解效果。

2.3.3 pH對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響 測(cè)定培養(yǎng)基初始pH對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖5。菌株JZ6、JZ18、JZ50的機(jī)油降解率在培養(yǎng)基初始pH 7.5時(shí)達(dá)到最大，分別為42.12%，34.73%，41.18%，菌株JZ41機(jī)油降解率在pH 7時(shí)達(dá)到最大值34.04，此外偏弱酸性或弱堿性的環(huán)境均不利于菌株的機(jī)油降解，要控制培養(yǎng)基的初始pH在7.0-7.5之間。

圖5 pH對(duì)菌株機(jī)油降解率的影響

2.4 菌株在不同石油組分中的生長(zhǎng)特性

菌株在不同機(jī)油組分中的生長(zhǎng)特性結(jié)果，見(jiàn)表3，4株菌株均能以十二烷、十六烷、十八烷及苯和萘為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，JZ6和JZ50還能在以芘和菲為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

表3 菌株在不同機(jī)油組分中的生長(zhǎng)

2.5 機(jī)油高效降解菌株降解特性

研究機(jī)油高效降解菌株對(duì)機(jī)油具體組分的降解，菌株接種于機(jī)油濃度為2.0 g/L的MSM培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)7 d，用正己烷萃取并溶解培養(yǎng)液中的機(jī)油殘油組分進(jìn)行GC-MS分析，結(jié)果見(jiàn)圖6。GC-MS分析機(jī)油殘油組分，發(fā)現(xiàn)機(jī)油主要組分為直鏈烷烴；其次為支鏈烷烴和環(huán)烷烴，以及一定量的芳香烴和非烴類物質(zhì)，其中的直鏈烷烴主要為正十二烷、十四烷、十五烷、二十烷、二十四烷、二十七烷、二十八烷及三十六烷，烷烴占原油總量59.89%.菌株JZ6、JZ18、JZ41和JZ50對(duì)總烷烴的降解率分別達(dá)到68.66%、52.69%、49.37%和61.40%，對(duì)直鏈烷烴的降解率分別為86.89%、55.98%、58.42%和89.13%，表明4株菌對(duì)烷烴具有很強(qiáng)的降解效果，對(duì)直鏈烷烴的降解作用尤為明顯，對(duì)于中鏈、C16-C28長(zhǎng)鏈烷烴都有較顯著地降解作用，菌株JZ6和JZ50對(duì)除烷烴類的其他芳香烴類物質(zhì)也有一定的降解作用。

3 討論

隨著石油開(kāi)采及石油工業(yè)的發(fā)展，石油污染問(wèn)題日趨嚴(yán)重，而機(jī)油作為石油非常重要的一個(gè)餾分，在機(jī)械制造、維修等行業(yè)被廣泛應(yīng)用，產(chǎn)生的大量含油廢水不僅污染環(huán)境，同時(shí)也給人類及其他生物帶來(lái)很大的危害。分離、馴化出高效的機(jī)油降解菌成為機(jī)油污染環(huán)境生物修復(fù)的一個(gè)重要的研究方向。目前，對(duì)于石油降解菌的研究較多，而對(duì)于機(jī)油降解菌的研究較少。Quatrini等［31］從機(jī)油污染地區(qū)中分離出幾株能對(duì)十二烷、十五烷和十六烷等烷烴類物質(zhì)具有很好的降解作用的紅球菌屬，但不能降解芳香烴類物質(zhì)。Soudi等［32］從機(jī)油污染地區(qū)分離出一株對(duì)苯酚有很強(qiáng)的降解能力的菌株SKO-1，在含苯酚1.0 g/L的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2 d后對(duì)苯酚降解率為99%以上，但對(duì)中長(zhǎng)鏈烷烴及其他的芳香烴類物質(zhì)的降解能力不明顯。孫華慶等［33］從首鋼焦化廠的污水處理系統(tǒng)中分離1株能降解吡啶的菌株BC026，經(jīng)鑒定為Shinella zoogloeoides菌屬，當(dāng)吡啶濃度為1 800 mg/L，投菌量為0.06 g/L時(shí)，BC026可在46 h內(nèi)將吡啶完全降解。蘇瑩等［34］從山東勝利油田的機(jī)油污染水體中分離出10株降解機(jī)油的細(xì)菌，培養(yǎng)6 d后，其中最高機(jī)油降解率為54.74%，其余菌株均在40%以下。本研究所獲得的4株機(jī)油高效降解菌株JZ6、JZ18、JZ41和JZ50分別屬于Massilia sp.、Pseudomona sp.、Sphingobacterium sp.和 Shinella sp.，有 關(guān)Pseudomona sp. 屬的降解菌中，Lin等［35］對(duì)菌株 Pseudomona sp. P29 的研究結(jié)果表明，菌株P(guān)29對(duì)短鏈烷烴有較好的降解效果，而本研究所篩選菌株JZ18對(duì)長(zhǎng)鏈烷烴也有很好的降解效果。與孫華慶等［33］研究結(jié)果相比，本研究所篩得的菌株JZ50除能降解吡啶外，還能以十二烷、十六烷、十八烷、芘，菲及苯和萘為唯一碳源生長(zhǎng)。有關(guān)Massilia sp.屬的降解菌中，羅小艷等［25］對(duì)多環(huán)芳烴中菲具有很好的降解作用，48 h菲的降解率迗96.78%，而本研究所篩選菌株JZ6對(duì)多環(huán)芳烴中芘，菲，苯和萘都具有一定降解作用。

圖6 菌株降解機(jī)油的GC-MS分析

4 結(jié)論

從長(zhǎng)期受機(jī)油污染地區(qū)分離篩選出4株機(jī)油高效降解菌株，經(jīng)鑒定4株菌株分別為Massilia sp.、Pseudomona sp.、Sphingobacterium sp.和 Shinella zoogloeoides sp.，在含機(jī)油培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)7 d后，機(jī)油降解率分別為42.62%、33.67%、33.36%和40.52%。在溫度20-40℃，pH5-9條件下菌株都具有降解機(jī)油的能力，4株菌株均能以十二烷、十六烷、十八烷及苯和萘為唯一碳源生長(zhǎng)。GC-MS分析發(fā)現(xiàn)4株菌株對(duì)總烷烴的降解率分別達(dá)到68.66%、52.69%、49.37%和61.40%。4株菌株具有較強(qiáng)的機(jī)油降解能力，適應(yīng)能力強(qiáng)，對(duì)于利用微生物治理機(jī)油污染環(huán)境具有潛在的應(yīng)用前景。

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