蔣 敏，岳煥勛，李福平，蔣小輝，李定明，余 林，吳應(yīng)碧

四川大學(xué)華西第二醫(yī)院人類精子庫·出生缺陷與相關(guān)婦兒疾病教育部重點實驗室 (成都 610041)

我國已婚夫婦中不孕不育的發(fā)病率逐年增加，男性因素所致不育占40%，其中，4%～10%的男性不育患者有生殖道感染，白細(xì)胞精子癥是男性生殖道感染的重要表現(xiàn)[1]。目前，關(guān)于生殖道感染后，精液中白細(xì)胞異常增高是否會影響精液質(zhì)量，引起男性精液質(zhì)量降低、精子運動能力發(fā)生改變而導(dǎo)致不育的觀點仍存在分歧。本研究對四川大學(xué)華西第二醫(yī)院接診的男性不育患者精液中的白細(xì)胞水平、精液質(zhì)量及精子運動參數(shù)進(jìn)行分析，以探求精液中白細(xì)胞異常增高與男性精液質(zhì)量、精子運動能力的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2016年1月至2017年12月于四川大學(xué)華西第二醫(yī)院男科門診就診的男性不育患者8 714例為研究對象，年齡21～55(31.06±6.28)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：婚后正常性生活未采取避孕措施，1年以上不育，體格檢查未見睪丸、附睪及輸精管異常，無外傷、無性功能障礙史及遺傳性疾病家族史；女方經(jīng)檢查排除器質(zhì)性病變者。排除標(biāo)準(zhǔn)：女方因素所致不孕；女方1年內(nèi)有妊娠史；近期接觸過放射線、腫瘤放化療等影響精液質(zhì)量的因素者。按照患者精液中白細(xì)胞濃度的高低分為兩組：非炎癥組，白細(xì)胞濃度<1×106/mL，共7 106例；炎癥組，白細(xì)胞濃度≥1×106/mL，共1 608例。非炎癥組患者年齡21～55(32.14±6.58)歲；不育年限1～8年；炎癥組患者年齡21～55為(31.68±5.26)歲；不育年限1～9年。兩組患者年齡、身高、體質(zhì)量和不育年限等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1 兩組患者臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 精液常規(guī)分析 在患者知情同意的前提下，患者禁欲2～8 d，手淫法留取全部精液標(biāo)本于清潔干燥、對精子無毒性的一次性采精杯中，輕輕混勻后立即置37 ℃孵育，待精液完全液化后，嚴(yán)格按照WHO《人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)[2]要求進(jìn)行精液常規(guī)分析，包括精液外觀、液化時間、pH值、精子濃度、精子活動率、前向運動精子百分率、精子存活率及正常形態(tài)精子百分率等參數(shù)。同時，振搖混勻精液，用移液器吸取8 μL精液于MAKLER板中，37 ℃恒溫條件下采用計算機輔助的精子動態(tài)圖像檢測系統(tǒng)(CASA)分析精子活力及精子運動軌跡等參數(shù)。所有標(biāo)本的精液常規(guī)分析均由2名熟練的專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行分析。

1.2.2 精液中白細(xì)胞檢測 精液中白細(xì)胞檢測采用白細(xì)胞過氧化物酶染色法，采用安徽安科生物工程股份有限公司生產(chǎn)的精液白細(xì)胞染色試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，檢測數(shù)據(jù)等定量資料采用中位數(shù)(第5，95百分位數(shù))表示，非正態(tài)分布資料兩組間比較采用秩和檢驗，檢驗水準(zhǔn)α除特別說明外均設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 精液中白細(xì)胞對精液質(zhì)量各主要參數(shù)的影響

與非炎癥組相比，炎癥組患者的精液體積、精子濃度、精子總數(shù)、精子存活率、前向運動精子百分率及正常形態(tài)精子百分率均降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者精液液化時間和pH值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

表2 兩組患者精液各主要參數(shù)的比較

2.2 精液中白細(xì)胞對精子各運動參數(shù)的影響

與非炎癥組比較，炎癥組患者精子除側(cè)向擺動幅度(ALH)外，精子的曲線運動速度(VCL)、直線運動速度(VSL)、直線性(LIN)、前向性(STR)、平均路徑速度(VAP)均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；炎癥組患者精子的平均鞭打頻率(BCF)有所降低，但兩組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表3)。

表3 白細(xì)胞對精子各運動參數(shù)的影響

3 討論

精液質(zhì)量分析是評價男性生育能力及優(yōu)生優(yōu)育的重要指標(biāo)，是臨床進(jìn)行男性不育相關(guān)疾病診斷和療效觀察的常用檢測項目之一。精液質(zhì)量分析必須嚴(yán)格按照WHO《人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)的要求，對包括精液外觀、液化時間、pH值、精子濃度、精子活動率、前向運動精子百分率、精子存活率及正常形態(tài)精子百分率等參數(shù)進(jìn)行分析，從而對男性的精液質(zhì)量做出較為全面的評估[2]。

男性不育的病因很多，包括遺傳性因素、內(nèi)分泌疾病、免疫性因素、生殖道感染以及不良的生活習(xí)慣等[3]，其中生殖道感染是導(dǎo)致男性不育的重要因素。研究[4]顯示，精液中的白細(xì)胞對于吞噬和殺滅細(xì)菌等病原微生物至關(guān)重要，其可被細(xì)菌和精液中損傷的精子激活，從而清除變形、退化和凋亡的精子，阻止損傷的精子進(jìn)入女性生殖系統(tǒng)。更多研究[5]發(fā)現(xiàn)，精液中的白細(xì)胞增加會直接或間接地釋放炎癥因子(ROS、蛋白酶、細(xì)胞因子和淋巴因子)，與精子相互作用，導(dǎo)致精子數(shù)量減少，并影響精子運動能力及受精能力，從而影響男性生育能力。

本研究對8 714例男性不育患者精液中白細(xì)胞對精液質(zhì)量的影響進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，炎癥組男性不育患者的精液體積、精子濃度、精子總數(shù)、精子存活率、前向運動精子百分率及正常形態(tài)精子百分率均有所降低，且與非炎癥組男性不育患者相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Barraud-Lange等[6]研究結(jié)果顯示，精液中白細(xì)胞異常增加與精液主要參數(shù)，包括精子濃度、精子總數(shù)及活動率等呈負(fù)相關(guān)。王晟等[7]研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞精子癥可導(dǎo)致精子濃度、精子活動率及正常形態(tài)精子百分率降低，與本研究結(jié)果一致。

精子的運動能力是評估精子受精能力的重要指標(biāo)之一。精子高度快速的運動有助于精子擺脫輸卵管黏液形成的袋狀和套狀的影響，高度快速運動精子所占比例與精子體外受精能力、受精率密切相關(guān)，是反映精子質(zhì)量的重要指標(biāo)之一[8-9]。本研究結(jié)果顯示，與非炎癥組比較，炎癥組患者精子的、VCL、VSL、LIN、STR、VAP均下降，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；炎癥組患者精子的 BCF和 ALH與非炎癥組患者相比均有所降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。可見，精液中白細(xì)胞異常增加可導(dǎo)致精子VCL、VSL、VAP顯著下降，使精子的快速運動速率降低，同時改變精子的運動方式，減少空間位移程度，從而降低精子的運動能力，影響精子質(zhì)量。

綜上所述，精液中少量的白細(xì)胞可殺死、吞噬異常精子，但是精液中白細(xì)胞異常增高則會導(dǎo)致精子濃度、精子總數(shù)、前向運動精子百分率、正常形態(tài)精子百分率下降，精子前向快速運動速度受限。臨床工作者應(yīng)重視精液中白細(xì)胞的檢測，對白細(xì)胞精子癥患者早日進(jìn)行抗炎治療，從而降低精液中的白細(xì)胞，改善男性精液質(zhì)量，提高男性的生育能力。

[1]Jung J H, Kim M H, Kim J,etal. Treatment of Leukocytospermia in Male Infertility: A Systematic Review[J]. World J Mens Health, 2016, 34(3): 165-172.

[2]World Health Organization. WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th ed[M]. Geneva: World Health Organization, 2010:7-91.

[3]Kazemeini S K, Emtiazy M, Owlia F,etal. Causes of infertility in view of Iranian traditional medicine: A review[J]. Int J Reprod Biomed (Yazd), 2017, 15(4): 187-194.

[4]Kiessling A A, Lamparelli N, Yin H Z,etal. Semen leukocytes: friends or foes[J]. Fertil Steril, 1995, 64(1): 196-198.

[5]Agarwal A, Mulgund A, Alshahrani S,etal. Reactive oxygen species and sperm DNA damage in infertile men presenting with low level leukocytospermia[J]. Reprod Biol Endocrinol, 2014, 12: 126.

[6]Barraud-Lange V, Pont J C, Ziyyat A,etal. Seminal leukocytes are Good Samaritans for spermatozoa[J]. Fertil Steril, 2011, 96(6): 1315-1319.

[7]王晟, 賀占舉, 鄶艷榮, 等. 精液中白細(xì)胞與精液質(zhì)量的關(guān)系研究[J]. 中國性科學(xué), 2013, 22(5): 3-6.

[8]Hirano Y, Shibahara H, Obara H,etal. Relationships between sperm motility characteristics assessed by the computer-aided sperm analysis (CASA) and fertilization rates in vitro[J]. J Assist Reprod Genet, 2001, 18(4): 213-218.

[9]Fraczek M, Hryhorowicz M, Gill K,etal. The effect of bacteriospermia and leukocytospermia on conventional and nonconventional semen parameters in healthy young normozoospermic males[J]. J Reprod Immunol, 2016, 118: 18-27.