岳雨曦，王小燕，柏丁丁，黃毅娜，鐘 凱,*，高 鴻

（1.四川大學(xué)輕紡與食品學(xué)院，四川 成都 610065；2.四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院，四川 成都 610041）

野陽(yáng)合（Habenaria ciliolaris Kranzl）為雙子葉蘭科植物[1]，亦稱毛葶玉鳳花[2]、洋合[3]。主要分布于長(zhǎng)江流域及以南各省區(qū)。野陽(yáng)合作為一種富含膳食纖維、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素及礦物元素等的野生蔬菜[4]，在湖南[4]、湖北[5]、川南等地區(qū)有悠久的食用歷史，可涼拌、炒食、醬藏、腌漬，也可制作果脯、果汁等，深受當(dāng)?shù)厝嗣裣矏?ài)。研究顯示野陽(yáng)合原為野生，生命力極強(qiáng)，無(wú)需藥物制劑防治病蟲(chóng)害，屬純天然綠色食品[3]。野陽(yáng)合資源豐富，產(chǎn)量高，經(jīng)濟(jì)效益顯著，每667 m2的年收益高達(dá)5 000 元以上[3]。

多糖是由十個(gè)以上的單糖通過(guò)糖苷鍵聚合而成的天然高分子化合物，具有促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤及降血脂等生物功能，且安全、無(wú)毒，備受?chē)?guó)內(nèi)外研究者青睞，是食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)[6]。多糖的提取宗旨是，在不破壞多糖基本性質(zhì)的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)有效提取。多糖是極性大分子，不溶于有機(jī)試劑，難溶于冷水，易溶于熱水，多糖的傳統(tǒng)提取方法多為熱水提取[7]。對(duì)野陽(yáng)合的研究，目前主要集中在無(wú)公害栽培技術(shù)[3]和資源開(kāi)發(fā)利用[4]方面，有關(guān)野陽(yáng)合多糖的研究目前鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究擬采用水提醇沉法初步探究野陽(yáng)合多糖結(jié)構(gòu)等特征。多糖對(duì)膽汁酸的結(jié)合被認(rèn)定為其降低膽固醇的機(jī)理之一。多糖通過(guò)對(duì)膽汁酸的結(jié)合，防止其重吸收，并刺激血漿和肝臟中的膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，消耗更多的膽固醇[8]。野陽(yáng)合富含膳食纖維，本研究擬通過(guò)模擬腸道內(nèi)環(huán)境，探究野陽(yáng)合多糖體外結(jié)合膽汁酸的能力。

本研究以野陽(yáng)合為原料，提取野陽(yáng)合粗多糖，采用DEAE-纖維素52柱和TOYOPEARL HW-65柱分離純化得到4 種多糖組分，對(duì)其理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力進(jìn)行研究，為野陽(yáng)合在輔助降血脂功能食品中的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野陽(yáng)合，采自四川雅安，由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)徐正君教授鑒定為野陽(yáng)合（Habenaria ciliolaris Kranzl），常溫陰干后保存于四川大學(xué)食品工程系備用。

DEAE-纖維素52 合肥博美生物科技有限公司；TOYOPEARL HW-65 日本TOSOH公司；單糖標(biāo)準(zhǔn)品（鼠李糖、葡萄糖、巖藻糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖） 美國(guó)Supelco公司；葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品（T9、T60、T130、T400、T990、T1740、T3750） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；膽汁酸 源葉生物科技有限公司；豬胰酶 銳陽(yáng)生物科技有限公司；氯仿、正丁醇、苯酚、濃硫酸、乙腈、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、鹽酸、三氟乙酸、溴化鉀 成都科龍化工試劑廠。所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AU480全自動(dòng)生化分析儀 美國(guó)Beckman Coulter公司；SARNSPEED 1736R高速冷凍離心機(jī) 丹麥Labogene公司；BSA224S分析天平 德國(guó)Sartorius公司；SPECTRA MAX190酶標(biāo)儀 美國(guó)Molecular Devices公司；高效液相色譜系統(tǒng)（配有蒸發(fā)光散射檢測(cè)器-LT II檢測(cè)器） 日本Shimadzu公司；LGJ-50F冷凍干燥機(jī)北京松源華興科技發(fā)展有限公司；RV10CS25旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀德國(guó)IKA公司；Nicolet 6700紅外光譜儀 美國(guó)Thermo公司；BSZ-100自動(dòng)部分收集器、HL-系列數(shù)顯轉(zhuǎn)速恒流泵 上海市青浦瀘西儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 野陽(yáng)合粗多糖的提取

參照Huang Danmin等[9]報(bào)道的水提醇沉法。稱取野陽(yáng)合干品100 g，經(jīng)90%乙醇溶液脫脂脫色，抽濾，烘干濾渣，按料液比1∶50（g/mL）加入90 ℃的熱水，攪拌浸提4 h，重復(fù)3 次，合并提取液并減壓濃縮；將濃縮液與Sevag試劑（三氯甲烷-正丁醇（4∶1，V/V））按體積比1∶1混合脫蛋白，8 000 r/min離心15 min，得上層溶液即為多糖溶液；經(jīng)磁力攪拌透析48 h（透析袋截留分子質(zhì)量為3 500 Da）[10]，4 ℃醇沉12 h，真空冷凍干燥，得野陽(yáng)合粗多糖（記作YP）。

1.3.2 野陽(yáng)合多糖的分離純化

1.3.2.1 DEAE-纖維素52離子交換柱層析純化

稱取野陽(yáng)合粗多糖0.1 g，溶于10 mL超純水，上樣至DEAE-纖維素52柱（3 cm×50 cm），依次用超純水、0.1、0.3 mol/L和0.5 mol/L NaCl溶液洗脫[11]，流速1.5 mL/min，每管收集洗脫液3 mL，苯酚-硫酸法檢測(cè)并收集A490nm大于0.1的多糖組分，透析除鹽，真空冷凍干燥得初步分離純化的多糖組分YP1、YP2和YP3。

1.3.2.2 TOYOPEARL HW-65凝膠柱層析純化

稱取初步分離得到的各多糖組分0.05 g溶于5 mL超純水，上樣至TOYOPEARL HW-65凝膠柱層析柱（2.6 cm×70 cm）[12]，用超純水洗脫，流速為1 mL/min，每管收集洗脫液3 mL，苯酚-硫酸法檢測(cè)并收集A490nm大于0.1的多糖組分，透析除鹽，真空冷凍干燥得到純化野陽(yáng)合多糖組分，分別為YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1。

1.3.3 野陽(yáng)合粗多糖的總糖含量測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[13]測(cè)定野陽(yáng)合多糖的總糖含量。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=4.878 2X+0.060 2（R2=0.995），其中，X為多糖質(zhì)量濃度，Y為490 nm波長(zhǎng)處樣品的吸光度。取野陽(yáng)合粗多糖配制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的多糖溶液，加入1 mL 6%苯酚溶液，渦旋振蕩，再加入5 mL濃硫酸，渦旋振蕩，90 ℃水浴反應(yīng)20 min后，靜置冷卻至室溫，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。將吸光度帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出野陽(yáng)合粗多糖的總糖含量。

1.3.4 野陽(yáng)合多糖的紫外光譜分析

紫外光譜分析法能鑒定多糖樣品中是否還含有蛋白或核酸類(lèi)雜質(zhì)[14]。稱取YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1，配制成質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的多糖溶液，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)200～700 nm范圍內(nèi)掃描，檢測(cè)是否存在蛋白質(zhì)和核酸的特征吸收峰。

1.3.5 野陽(yáng)合多糖的純度鑒定和分子質(zhì)量測(cè)定

采用高效液相色譜與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用測(cè)定野陽(yáng)合多糖純度及分子質(zhì)量[15]。將標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（T9、T60、T130、T400、T990、T1740、T3750）及YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1，分別配制成質(zhì)量濃度為3 mg/mL的多糖溶液，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。以標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖樣品分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值（lgmw）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖樣品出峰時(shí)的保留時(shí)間（t）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。記錄各野陽(yáng)合多糖組分出峰時(shí)的保留時(shí)間，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各多糖組分的分子質(zhì)量，并根據(jù)高效凝膠滲透色譜洗脫峰形判斷多糖純度。

色譜條件：TSK-gel G5000PWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，10 μm）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器-LT II（霧化溫度35 ℃、壓力3.50 bar、檢測(cè)靈敏度6）；流動(dòng)相為雙蒸水；流速0.6 mL/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

1.3.6 野陽(yáng)合多糖的紅外光譜分析

采用溴化鉀（KBr）晶體壓片法[16]分析野陽(yáng)合多糖樣品的紅外光譜。分別稱取YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1樣品各2 mg，各按質(zhì)量比1∶100與干燥的KBr混合均勻，在瑪瑙研缽中充分研磨10 min，用壓片機(jī)制膜，再用紅外光譜儀在波數(shù)4 000～400 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描，采用干燥的光譜純KBr作背景對(duì)照。

1.3.7 野陽(yáng)合多糖的單糖組成分析

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one，PMP）柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定野陽(yáng)合多糖的單糖組成[17]。稱取YP1-1、YP2-1、YP2-2、YP3-1和單糖標(biāo)準(zhǔn)品（甘露糖、鼠李糖、巖藻糖、果糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖），分別加入4 mL 2 mol/L三氟乙酸溶液，封管，110 ℃水解6 h，冷卻至室溫，反復(fù)加入甲醇減壓蒸干，除去三氟乙酸。蒸干的樣品溶于500 μL蒸餾水，依次加入500 μL 0.3 mol/L的NaOH溶液和500 μL 0.5 mol/L的PMP-甲醇溶液，混勻；70 ℃水浴反應(yīng)100 min，取出置于冷水浴中10 min；再加500 μL 0.3 mol/L的HCl溶液中和，用氯仿萃取3 次，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，待高效液相色譜進(jìn)樣分析。

色譜條件：Archrom Bond-AQ C18反相色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；流動(dòng)相為0.3 mol/L磷酸鹽（pH 6.7）緩沖液-乙腈（83∶17，V/V）；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

1.3.8 野陽(yáng)合多糖對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力測(cè)定

參照Z(yǔ)eng Hongliang等[18]報(bào)道的方法，通過(guò)模擬腸道內(nèi)環(huán)境，測(cè)定野陽(yáng)合多糖體外結(jié)合膽汁酸的能力。將0.5 mL多糖溶液（5、15 mg/mL和25 mg/mL）和0.25 mL 0.01 mol/L的鹽酸溶液在37 ℃條件下充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)1 h，再加入0.1 mol/L的NaOH溶液將混合液pH值調(diào)節(jié)至6.3。向混合液中加入1 mL膽汁酸混合液（7.2 mmol/L），攪拌混勻，再加入2 mL 10 mg/mL的豬胰酶溶液，提供消化用胰淀粉酶、胰蛋白酶和胰脂肪酶。37 ℃條件下充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)1 h后，再加入20 mL無(wú)水乙醇，4 ℃醇沉12 h，8 000 r/min冷凍離心15 min，保留上清液。通過(guò)全自動(dòng)生化儀測(cè)定上清液中膽汁酸含量。辛伐他汀為陽(yáng)性對(duì)照。計(jì)算野陽(yáng)合多糖相比于辛伐他汀對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)取3 次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值，采用IBM SPSS Statistics 19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 野陽(yáng)合多糖的提取與柱層析分離純化

野陽(yáng)合經(jīng)熱水浸提、Sevag法脫蛋白、透析、醇沉、真空冷凍干燥處理后得野陽(yáng)合粗多糖，提取率為2.41%，其總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.35%。

圖1 野陽(yáng)合粗多糖經(jīng)DEAE-纖維素52柱層析分離的洗脫曲線Fig.1 Elution curve of YP on DEAE-cellulose 52 column

野陽(yáng)合粗多糖經(jīng)DEAE-纖維素52離子交換柱分離純化后，以洗脫管數(shù)為橫坐標(biāo)，苯酚-硫酸法測(cè)得490 nm波長(zhǎng)處的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制洗脫曲線如圖1所示。各組分洗脫峰狹窄對(duì)稱，表明分離效果好[19]。其中，經(jīng)超純水洗脫出的不帶電荷的中性多糖組分為YP1[20]，依次經(jīng)0.1、0.3 mol/L和0.5 mol/L NaCl溶液洗脫出的組分為YP2、YP3和YP4。收集含量較大的YP1、YP2和YP3組分，經(jīng)透析除鹽、冷凍干燥后，采用TOYOPEARL HW-65凝膠層析柱進(jìn)一步純化。多糖組分YP1和YP3洗脫后均得到單一洗脫峰，分別為YP1-1和YP3-1，多糖組分YP2洗脫后得到2 個(gè)洗脫峰，分別為YP2-1和YP2-2。經(jīng)冷凍干燥后，即得4 種蓬松狀、呈白色的純化野陽(yáng)合多糖YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1。

2.2 野陽(yáng)合多糖的紫外光譜分析

圖2 野陽(yáng)合粗多糖在波長(zhǎng)200～700 nm的紫外掃描圖譜Fig.2 UV absorption spectrum of YP

如圖2所示，多糖樣品溶液在波長(zhǎng)260 nm和280 nm處均無(wú)明顯吸收峰，表明其不含蛋白質(zhì)及核酸雜質(zhì)。這是由于Sevag試劑能使蛋白質(zhì)變性，而且DEAE-纖維素52離子交換柱不僅能分離純化野陽(yáng)合多糖，還能有效去除色素及殘余蛋白[21]。

2.3 野陽(yáng)合多糖的純度鑒定和分子質(zhì)量測(cè)定

多糖的分子質(zhì)量具有相對(duì)性，通常測(cè)定的分子質(zhì)量是一種統(tǒng)計(jì)平均值，代表相似鏈長(zhǎng)多糖分子質(zhì)量平均值[22]。采用高效液相色譜與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用測(cè)定分離純化得到的4 種多糖組分YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1的分子質(zhì)量，結(jié)果如圖3所示。4 種多糖均為單一峰，對(duì)稱性較好，說(shuō)明其純度較高，分離純化效果較好。采用高效液相色譜與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用，測(cè)定的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：lgmw=-0.398 8t+10.420（R2=0.983），計(jì)算得出YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1的分子質(zhì)量分別為3.52×106、3.08×106、1.93×106Da和3.35×106Da。

圖3 4 種純化野陽(yáng)合多糖組分YP1-1、YP2-1、YP2-2、YP3-1的高效凝膠滲透色譜圖Fig.3 HPGPC chromatograms of YP1-1, YP2-1, YP2-2, and YP3-1

2.4 野陽(yáng)合多糖的紅外光譜分析

圖4 4 種純化野陽(yáng)合多糖組分YP1-1、YP2-1、YP2-2、YP3-1的紅外光譜圖Fig.4 FT-IR spectra of YP1-1, YP2-1, YP2-2, and YP3-1

如圖4所示，4 種野陽(yáng)合多糖組分均在3 370～3 400 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)寬而強(qiáng)的吸收帶，它們是分子內(nèi)或分子間氫鍵的O-H伸縮振動(dòng)的結(jié)果[23]；在2 920～2 940 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)的吸收帶是糖類(lèi)C-H伸縮振動(dòng)的結(jié)果；在1 720～1 750 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)的強(qiáng)吸收帶是多糖樣品中乙酰基、酯基或羧基中C＝O非對(duì)稱伸縮振動(dòng)的結(jié)果；在1 600～1 640 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)吸收帶，表明多糖含有一定量的結(jié)合水；在1 400～1 430 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)的吸收帶是糖類(lèi)C-H變角振動(dòng)的結(jié)果；在1 320～1 340 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)的吸收帶是羰基O-H彎曲振動(dòng)的結(jié)果；在1 230～1 280 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)的吸收帶是乙?；–-O）伸縮振動(dòng)的結(jié)果。YP1-1、YP2-1及YP2-2在1 100～1 000 cm-1范圍內(nèi)均出現(xiàn)3 個(gè)較強(qiáng)的吸收帶，表明YP1-1、YP2-1及YP2-2含有吡喃糖，YP3-1在1 100～1 000 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)2 個(gè)較強(qiáng)的吸收帶，表明其含有呋喃糖和吡喃糖；YP1-1在892.89 cm-1處出現(xiàn)的吸收帶，表明其糖苷鍵以β-構(gòu)型為主；YP2-1在894.82 cm-1和829.25 cm-1處出現(xiàn)的吸收帶，表明其糖苷鍵有β-構(gòu)型和α-構(gòu)型；YP2-2在890.97 cm-1和829.25 cm-1處出現(xiàn)的吸收帶，表明其糖苷鍵有β-構(gòu)型和α-構(gòu)型；YP3-1在889.04 cm-1處出現(xiàn)的吸收帶，表明其糖苷鍵以β-構(gòu)型為主。

2.5 野陽(yáng)合多糖的單糖組成分析

圖5 單糖標(biāo)準(zhǔn)品（A）、4 種純化野陽(yáng)合多糖組分（B～E）的單糖組成高效液相色譜圖Fig.5 HPLC chromatograms of mixed monosaccharide standards (A)and purif i ed polysaccharide fractions (B through E)

表1 4 種純化野陽(yáng)合多糖組分YP1-1、YP2-1、YP2-2、YP3-1的單糖組成Table1 Monosaccharide composition of YP1-1, YP2-1, YP2-2 and YP3-1

對(duì)4 種野陽(yáng)合多糖組分YP1-1、YP2-1、YP2-2、YP3-1和單糖標(biāo)準(zhǔn)品（甘露糖、鼠李糖、巖藻糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖和半乳糖）進(jìn)行PMP柱前衍生化高效液相色譜分析，如圖5所示，單糖組成物質(zhì)的量比見(jiàn)表1。YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1均為雜多糖。YP1-1的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其物質(zhì)的量比為1.08∶2.01∶9.89∶29.14∶1.02，說(shuō)明YP1-1是主要由葡萄糖和半乳糖構(gòu)成的中性多糖；YP2-1的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和巖藻糖，其物質(zhì)的量比為1.84∶2.87∶16.76∶8.08∶1.78∶0.08；YP2-2的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和巖藻糖，其物質(zhì)的量比為2.93∶5.03∶25.55∶15.87∶3.37∶1.83；YP3-1的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其物質(zhì)的量比為1.01∶13.46∶8.84∶5.17∶1.00。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，野陽(yáng)合多糖的單糖組成和蘭科植物金線蓮[24]、鐵皮石斛[25]、白及[26]多糖的單糖組成類(lèi)似，金線蓮[24]和鐵皮石斛[25]多糖均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、巖藻糖，5 種單糖組成；白及[26]多糖由巖藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，5 種單糖組成。

2.6 野陽(yáng)合多糖對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力

圖6 野陽(yáng)合多糖對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力Fig.6 Bile acid-binding abilities of crude and purif i ed polysaccharides from Habenaria ciliolaris Kranzl

多糖能降低膽固醇，對(duì)膽汁酸的結(jié)合是多糖降低膽固醇的機(jī)理之一[27]。多糖通過(guò)結(jié)合膽汁酸，防止其重吸收，并刺激血漿、肝臟中的膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，達(dá)到消耗更多膽固醇的目的。陽(yáng)性對(duì)照辛伐他汀是一種有效的降膽固醇藥物，能有效增加膽汁酸分泌、降低膽固醇吸收[28]。野陽(yáng)合粗多糖及4 種純化多糖組分YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力如圖6所示。辛伐他?。? mg/mL）能結(jié)合大量的膽汁酸，定義其結(jié)合率為100%。野陽(yáng)合粗多糖（YP）及YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1（5、15 mg/mL和25 mg/mL）對(duì)膽汁酸的結(jié)合率均高于97%。其中，25 mg/mL野陽(yáng)合粗多糖對(duì)膽汁酸的結(jié)合率高達(dá)100.7%，有強(qiáng)膽汁酸結(jié)合能力。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)低濃度和高濃度野陽(yáng)合多糖對(duì)膽汁酸的結(jié)合能力無(wú)顯著性差異（P＞0.05），該結(jié)果與Hu Jielun等[29]的報(bào)道一致。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)多糖對(duì)膽汁酸有結(jié)合能力的一部分原因是多糖有高黏度，能通過(guò)水動(dòng)力學(xué)限制作用綁定膽汁酸[30]。此外，這種結(jié)合與多糖的陰、陽(yáng)離子及其物理化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)[31]。野陽(yáng)合多糖分子質(zhì)量在1.93×106～3.52×106Da范圍內(nèi)，分子質(zhì)量大，具有膳食纖維屬性[32]，能通過(guò)結(jié)合膽汁酸，增加膽汁酸的糞便排出量，抑制腸壁對(duì)膽汁酸的重吸收，刺激血漿和肝臟中膽固醇的轉(zhuǎn)化[33]。

3 結(jié) 論

利用水提醇沉法提取野陽(yáng)合粗多糖，提取率為2.41%，其總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.35%，紫外光譜檢測(cè)結(jié)果顯示其不含蛋白質(zhì)和核酸。經(jīng)DEAE-纖維素52柱和TOYOPEARL HW-65柱分離純化得到4 種多糖組分，分別為YP1-1、YP2-1、YP2-2和YP3-1。采用高效液相色譜與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用，測(cè)定4 個(gè)純化組分的分子質(zhì)量，分別為3.52×106、3.08×106、1.93×106Da和3.35×106Da。紅外光譜分析結(jié)果表明各野陽(yáng)合多糖主要為吡喃型糖苷環(huán)骨架，糖苷鍵以β-構(gòu)型為主。PMP柱前衍生化高效液相色譜分析表明，各野陽(yáng)合多糖純化組分的單糖組成均以半乳糖、葡萄糖和鼠李糖為主。水提醇沉法適用于植物多糖的初步探究，但利用水提醇沉法提取野陽(yáng)合多糖，提取率僅為2.41%。后續(xù)可根據(jù)野陽(yáng)合多糖的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，選用酸堿提取法、生物酶解提取法、超聲提取法、微波提取法等，提高野陽(yáng)合多糖的提取率。

對(duì)膽汁酸結(jié)合能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各野陽(yáng)合多糖對(duì)膽汁酸均有較強(qiáng)的結(jié)合能力，結(jié)合率均高于97%。其結(jié)合膽汁酸的具體作用機(jī)制，后續(xù)可從野陽(yáng)合多糖的流變學(xué)特性及陰、陽(yáng)離子組成等方面進(jìn)行探究。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步深入探究野陽(yáng)合多糖的結(jié)構(gòu)和生物活性提供了參考，也為提升野陽(yáng)合的產(chǎn)業(yè)價(jià)值，提供了新的思路。

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